rhGM-CSF生物活性的测定方法及工作标准品的标定

目的：研究用ＴＦ－１细胞测定ｒｈＧＭ－ＣＳＦ（重组人粒／巨噬细胞集落刺激因子）生物学活性的方法并用ＷＨＯ ｒｈＧＭ－ＣＳＦ国际标准品进行工作标准品和对照品（生白能先灵产品）的联合标定。方法：采用 ＭＴＴ染色法。结果：首次将（４,４）法引入ｒｈＧＭ－ＣＳＦ生物活性的测定,使所标定的工作标准品生物效价为每瓶１．３７×１０６ ＩＵ,所标定的对照品生物效价为每瓶１．７９×１０６ＩＵ,效价的平均可信限率分别为 ４． ９０４％和 ４． ３３３％。结论：（４, ４）法可用于ｒｈＧＭ－ＣＳＦ生物活性的测定,结果便于统计分析。所标定的工作标准品可作为ｒｈＧＭ－ＣＳＦ生物活性测定的工作标准。     

重组人粒细胞集落刺激因子生物学活性工作标准品的标定

目的用世界卫生组织 (WHO)粒细胞集落刺激因子 (G CSF)生物学活性国际标准品对所制备的重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)生物学活性工作标准品以及惠尔血 针剂 75进行标定。方法用NFS 6 0细胞采用MTT法进行rhG CSF生物学活性的测定 ,(4 ,4)法计算测定结果。结果制备rhG CSF生物学活性工作标准品 3批 ,两批为冻干剂 ,与G CSF生物学活性国际标准品配方一致 ,一批为水剂 ,与惠尔血 针剂 75配方一致 ;用G CSF生物学活性国际标准品对其标定 ,结果依次为 3.0 6 2× 10 6、4.2 76× 10 6IU/支及 1.6 35× 10 7IU/ml,样品为1.880× 10 7IU/ml。标定结果的FL %分别为 5 .5 2 9%、4.2 91%、4.2 44 %及 5 .175 %。结论所标定的rhG CSF生物学活性工作标准品可用于rhG CSF生物学活性测定。     

无创呼吸机治疗慢性阻塞性肺疾病并Ⅱ型呼吸衰竭临床分析

目的:探索无创呼吸机在治疗慢性阻塞性肺疾病合并Ⅱ型呼吸衰竭的临床价值.方法:在该院收治的慢性阻塞性肺疾病合并Ⅱ型呼吸衰竭患者中随机抽取出120例作为本研究的观察对象,将其随机分成观察组和对照组,其中对照组患者给予常规内科治疗,观察组患者则在对照组的基础上给予无创呼吸机治疗.就两组患者的血气分析等指标展开对比分析.结果:治疗后,观察组患者的心率、呼吸频率、PCO2指标值均明显低于对照组,且PO2值高于对照组(P＜0.05).结论:在慢阻肺合并Ⅱ型呼吸衰竭的临床治疗中加用无创呼吸机治疗效果确切,有助于改善患者的肺通气功能,缩短病程,值得推广应用.     

重组人粒细胞集落刺激因子生物学活性测定方法研究

目的用世界卫生组织国际标准品粒细胞集落刺激因子 (G CSF)生物学活性标准品研究NFS 6 0细胞测定重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)生物学活性的方法。方法采用溴化四唑蓝 (MTT)染色法。结果NFS 6 0细胞染色体为 39条 ;细胞数在 1× 10 5～ 1× 10 7个 /ml间MTT染色显示梯度 ;将 (4 ,4)法引入rhG CSF生物学活性的测定 ,单次实验结果的平均可信限率为 13.5 6 0 % ,(4 ,4)法测定rhG CSF生物学活性的批内CV <10 % ,批间CV为 10 .10 9%。结论 (4 ,4)法可用于rhG CSF生物学活性的测定 ,对测定方法标准化后 ,测定结果可准确、有效地指导rhG CSF的生产和研究。     

重组人粒细胞集落刺激因子生物学活性标准品的免疫学活性测定

目的测定重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)生物学活性标准品的免疫学活性。方法用深圳晶美公司及美国R&D公司的G CSFELISA试剂盒分别对WHOrhG CSF生物学活性国际标准品、惠尔血针剂 75 (GRAN 75 )及用WHOrhG CSF生物学活性国际标准品标定过生物学活性的工作标准品T1、T2、T3进行免疫学活性测定。结果不同公司的rhG CSFELISA试剂盒对所测定样品的测定结果不同 ,且用不同稀释液稀释样品测定结果亦不同。结论用免疫学方法定量测定rhG CSF的含量是有条件的 ,且免疫反应能识别聚体但不能识别蛋白分子的降解。     

HPLC法测定复方清带散中盐酸小檗碱的含量研究

目的：建立高效液相色谱法测定复方清带散中盐酸小檗碱的含量;方法：采用色谱柱：ODS—A,流动相：乙腈－0．05mol／L磷酸二氢钾溶液（30：70）,检测波长265nm;结果：盐酸小檗碱在0．08μg～0．40μg之间有良好的线性关系。（r＝0．9992）,样品平均回收率为98．84％,RSD=0．7％;结论：方法简便、快速、适用性好,可用于该制剂的质量控制。     

粒细胞巨噬细胞集落刺激因子与乙型肝炎疫苗协同诱导的特异性免疫应答

目的考察粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(Gm-csf)对乙型肝炎疫苗免疫原性及诱导的体液免疫效果的加强作用。方法将Gm-csf和乙肝疫苗分别采用4种不同的免疫顺序,联合免疫BALB/c小鼠。定期用酶联免疫吸附法检测小鼠产生的抗乙型肝炎表面抗原(抗-HBsAg)的抗体水平。结果联合免疫Gm-csf,可提高小鼠产生的抗-HBsAg抗体水平;②单次免疫后7 d,混合疫苗组的血清抗体滴度最高,为疫苗组的7.5倍;直至免疫后35 d,混合疫苗组仍为最高,为疫苗组的9.2倍;③二次免疫后14 d,混合疫苗组血清中抗体滴度与疫苗组相比有显著性提高(P<0.05),随后GM+疫苗组、混合疫苗组和疫苗+GM组血清中抗体滴度都先后达到峰值,分别为疫苗组的10.0,10.1,8.2倍。④小鼠血清中抗体水平达到稳定状态后,用乙肝疫苗原液进行挑战实验,抗体快速达到峰值,分别为挑战实验前的9.2,5.2,12.8,4.8倍。结论通过Gm-csf的联合免疫,可提高乙型肝炎疫苗的免疫原性,增强乙型肝炎疫苗诱导的体液免疫水平。     

降低盐酸林可霉素原料药B组分实验分析

目的:实验降低盐酸林可霉素B组分的含量。方法:采用萃取法、树脂法。结果:降低盐酸林可霉素B组分1．7％以下。结论:本实验具有实用价值,准确、简便、适合生产使用。     

来氟米特治疗类风湿性关节炎疗效的Meta分析

[目的]为评价来氟米特治疗类风湿性关节炎的临床疗效和安全性，为来氟米特在我国的应用提供科学依据。[方法]在中国科技全文数据库、中文科技期刊数据库等检索1989.1～2004.12来氟米特治疗类风湿性关节炎的随机化对照试验文献，用REVMAN4．2对入选的文献进行Meta分析。[结果]来氟米特与甲氨喋呤治疗RA疗效相比差异无统计学意义（P〉0．05），RR=1．05，95％CI为（0．98，1．13）。两药在副反应上差异有统计学意义（P〈0．0001），RR=0．52，95％Cr为（0．38，0．72）。[结论]来氟米特治疗类风湿性关节炎疗效与甲氨喋呤相近。耐受性好,是一个比较安全有效的改变病程药。     

hG—CSF大肠杆菌分泌表达系统的构建

构建了hG-CSF大肠杆菌融合分泌表达载体pSEGF,利用该系统可直接将hG-CSF融合蛋白分泌到培养基中,重组蛋白具有高度的可溶性,并具生物学活性。在该系统中,外源蛋白N端融合了金黄色葡萄球菌蛋白AIgG结合区,由lac启动子与金黄色葡萄球菌蛋白A启动子控制表达,信号肽选用金黄色葡萄球菌蛋白A的信号肽序列。在融合头与目的蛋之间设计了蛋白酶识别位点,可用Factor Xa蛋白酶特异切割,得到与天然氨基酸序列完全相同的重组hG-CSF蛋白。该系统的构建成功,为简化下游纯化工艺,提高收率带来可能。