结核分支杆菌分泌蛋白Mtb81克隆、表达、纯化及血清学诊断价值的初步研究

目的 通过结核分支杆菌Mtb81基因在大肠杆菌中的表达, 获得大量纯化的重组Mtb81蛋白.通过Western -blot和ELISA方法评价Mtb81抗原,检测血清中抗结核抗体的灵敏度和特异性,为进行结核病血清学诊断打下基础.方法 应用PCR技术扩增结核分支杆菌H37Rv Mtb81DNA序列;构建pET24b-Mtb81重组质粒,然后转化入表达宿主大肠杆菌BL21(DE3);通过Western-blot鉴定重组Mtb81蛋白,采用Chelating Sepharose Fast Flow纯化重组 Mtb81蛋白;将纯化的重组Mtb81蛋白通过Western-blot、酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测结核病人及正常人血清中的抗体,应用Microsoft Excel软件统计分析实验数据.结果 pET24b-Mtb81在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的30%左右.纯化后的Mtb81样品经SDS-PAGE和光密度扫描分析表明其纯度为95%左右.纯化后的Mtb81蛋白通过Western-blot鉴定,结果显示:加入结核病人血清抗体于目的蛋白位置有一条显色带,而加入正常人血清组则无显色反应;酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测30例结核病人及正常人血清中的抗体,结果显示:rMtb81的特异性和灵敏度分别为96%、93%.结论 pET24b -Mtb81大肠杆菌工程菌株能高效表达Mtb81蛋白,Western-blot结果证明表达蛋白具有很好的免疫反应性和抗原特异性;ELISA结果证明重组Mtb81检测结核病人血清中的抗结核抗体,具有较高的灵敏度和特异性.     

多种标志物在人群结核病分子流行病学研究中的应用

背景:目前世界正在开展很多结核病流行病学研究。对IS6110杂交带少于6条的菌株应用一个二级标志物指纹分析增强了菌株的追踪,但它对人群结论的影响尚未很好地研究。 目的:对低拷贝结核分支杆菌菌株应用多态性富含GC重复序列(PGRS)进行二级基因分型。探讨其对以人群为研究背景的流行病学研究结论的影响。 设计:对1991—1996年旧金山结核病例,通过单用IS6110及联合采用PGRS/IS6110定义菌株成簇,以便1)估计近期的传播;2)评价细菌群体参数在理论上对这些估计的影响;3)评价近期传播的危险因素。 结果:对低拷贝菌株(所有菌株的20.3％)进行二级分型,使近期传播的估算值由29.1％下降到25.3％(P=0.03)。补充基因分型造成不同估算值的最主要的影响参数是低拷贝菌株的比例和成簇的数量。对于上述两种分析方法而言。导致近期传播的危险因素是一样的。 结论:结核分支杆菌二级基因分型的统计和推论似乎取决于人群中低拷贝菌株的比例。该比例低时,或没有多少二级特型匹配时,补充基因分型在人群水平研究中的作用可能就很小。     

四种卡介苗重组疫苗对小鼠免疫原性的研究

目的研究esat6-卡介苗重组疫苗、mpt64-卡介苗重组疫苗、ag85a-卡介苗重组疫苗、ag85b-卡介苗重组疫苗的免疫原性。方法通过ELISA法检测小鼠血清中特异性抗体,用MTS法分析其脾淋巴细胞增殖指数。结果以生理盐水、卡介苗为对照,用各卡介苗重组疫苗免疫小鼠后,各组小鼠体重变化与对照组相比差异无统计学意义。应用不同抗原检测各组小鼠不同时间采集的血清,各组有其特异性抗体产生;ag85a-卡介苗重组疫苗能提高卡介苗刺激B细胞产生抗体的水平;各卡介苗重组疫苗免疫后15d,抗体水平已有升高,45d时达到最高水平。用不同抗原刺激各组小鼠脾淋巴细胞,平均刺激指数均达2.0以上,esat6-卡介苗重组疫苗组小鼠脾淋巴细胞的刺激指数稍高,其它各组之间差异无统计学意义。结论结核分枝杆菌esat6、mpt64、ag85a、ag85b基因在卡介苗中都能够表达特异的蛋白,刺激小鼠产生特异性抗体,均能刺激T淋巴细胞产生细胞免疫。     

芝麻素改善自发性高血压大鼠肾损伤的作用及与PI3K/AKT/mTOR信号通路的关系

 目的: 观察芝麻素对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)肾脏损伤的作用及与PI3K/AKT/mTOR信号通路之间的关系。方法: 雄性SHR随机分成模型组、芝麻素低剂量(80 mg/kg)、高剂量(160 mg/kg)组及卡托普利(30 mg/kg)组。同时选取同周龄WKY大鼠作为正常对照组。每日灌胃1次,模型组、正常对照组给予0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na),给药组给予CMC-Na溶解的上述剂量药物,给药前及给药后每隔2周测量1次血压。12周后,检测血尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)及尿微量白蛋白(U-mAlb)含量;测定肾脏丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平;HE、Masson染色观察肾组织病理学变化;TUNEL法检测肾组织细胞凋亡率;Western blot法检测肾脏p-AKT、p-mTOR、4EBP1、S6K1、Bcl-2和Bax的蛋白水平。结果: 芝麻素能降低SHR舒张压,明显改善肾组织的病理学变化,降低肾脏BUN、SCr、U-mAlb、MDA含量及细胞凋亡率,提高SOD活性,显著减少p-AKT、p-mTOR、4EBP1、S6K1和Bax的蛋白水平,增加Bcl-2的蛋白表达。结论: 芝麻素减轻SHR大鼠肾脏损伤的作用机制可能与降低血压、对抗氧化应激、抑制细胞凋亡、阻滞过度活化的PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。     

脑梗死患者颈动脉粥样硬化的危险因素分析

目的 探讨脑梗死患者颈动脉粥样硬化程度与血脂、纤维蛋白原、血糖、血尿酸及C反应蛋白的关系.方法 将122例脑梗死患者按颈动脉硬化程度分为内膜中膜增厚组、斑块形成组和管腔狭窄组,分别测定其与56例对照组的总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白A、载脂蛋白B、脂蛋白(a)、纤维蛋白原、血糖、血尿酸及C反应蛋白水平,观察颈动脉粥样硬化程度与血脂、纤维蛋白原、血糖、血尿酸及C反应蛋白的关系.结果 斑块形成组和管腔狭窄组三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B、纤维蛋白原、血糖、血尿酸及C反应蛋白水平显著高于内膜中膜增厚组和对照组(P<0.05).内膜中膜增厚组三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B、纤维蛋白原、血糖、血尿酸及C反应蛋白水平显著高于对照组(P<0.05).Logistic多元回归分析发现,颈动脉粥样硬化程度与低密度脂蛋白胆固醇、脂蛋白(a)、纤维蛋白原、血糖、血尿酸呈显著正相关(P<0.05～0.01).结论 低密度脂蛋白胆固醇、脂蛋白(a)、纤维蛋白原、血糖、血尿酸是颈动脉粥样硬化的独立危险因素.及时检测脑梗死患者血脂、纤维蛋白原、血糖、血尿酸、C反应蛋白和颈动脉粥样硬化情况,评价病变程度,对疾病的早期防治具有重要的价值.     

恩替卡韦治疗重型乙型病毒性肝炎的临床价值

目的 探讨恩替卡韦治疗重型乙型病毒性肝炎（CHB）的疗效及临床价值。方法 选取该院2012年3月至2013年5月收治的78例CHB患者,回顾性分析其临床资料,将患者随机分成对照组和观察组。对照组采用内科综合护肝治疗,观察组在此基础上增加恩替卡韦治疗,比较两组患者的病毒学指标、临床症状以及凝血酶原活动度（PTA）、血液生化指标等。结果 与对照组比较,观察组丙氨酸氨基转移酶（ALT）、总胆红素（TB）下降、PTA上升,差异有统计学意义（P〈0．05）。两组患者治疗后乙型肝炎病毒（HBV）DNA转阴率比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。两组患者治疗效果比较,对照组总有效率51．2％,观察组总有效率74．4％,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 采用恩替卡韦治疗CHB患者,能够迅速降低病毒含量,改善患者肝功能,具有临床价值。     

PCR直接测序法分析结核分枝杆菌katG基因突变

为了了解我国结核分枝杆菌耐异烟肼（ＩＮＨ）分离株ｋａｔＧ基因突变情况，研究其临床意义。本研究通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）、ＰＣＲ－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）和ＰＣＲ直测序法分析９２株结核分枝杆菌临床分离株的ｋａｔＧ基因。以Ｈ３７Ｒｖ标准株为对照，２３株药物敏感体中，２１株ｋａｔＧ基因ＳＳＣＰ分析正常，２株异常。３６株耐非ＩＮＨ药物的分离株中，２０株ｋａｔＧ基因ＳＳＣ正常，１６株异常。３３株耐ＩＮＨ分     

"贺氏三通法"对脑缺血再灌注模型大鼠血清IL-18和IL-1水平的影响

目的 观察"贺氏三通法"对脑缺血再灌注模型大鼠血清白细胞介素-18(IL-18)及白细胞介素-1(IL-1)水平的影响.方法 将SD成年雄性大鼠随机分为假手术组(8只)、模型对照组(8只)、针刺组(24只)、药物组(16只).采用线栓法制备脑缺血再灌注大鼠模型.造模成功后,针刺组分别于3 h、6 h、48 h(每时段8只)予"贺氏三通法"针刺,药物组于5 h、48 h予香丹注射液腹腔内注射.模型制备成功后72 h取材,采用双抗体夹心ABC-EUSA法检测血清IL-18,放射免疫法检测血清IL-1含量.结果 模型对照组IL-18和IL-1水平较假手术组明显增高,差异有统计学意义(均P<0.01);48 h针刺组IL-18水平较模型对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);6 h、48 h针刺组IL-1水平均较模型对照组降低,差异有统计学意义(均P<0.01);针刺组与相应时间介入的药物对照组比较均无显著差异(P>0.05).结论 "贺氏三通法"可改善脑缺血再灌注后血清IL-18和IL-1水平.提示"贺氏三通法"可能通过调节IL-1、IL-18的紊乱,参与对脑缺血再灌注脑损伤的保护机制.     

妇炎康丸联合抗生素治疗盆腔炎性包块56例疗效观察

本文采用妇炎康丸(中成药)联合抗生素治疗盆腔炎性包块,取得了显著的治疗效果,现报道如下.