17β-雌二醇对子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞PI3K/Akt信号转导通路活化的影响

目的 研究17β-雌二醇(17β-E2)对子宫内膜异位症(内异症)患者在位子宫内膜间质细胞磷脂酰肌醇3激酶/Akt(PI3K/Akt)信号转导通路活化的影响,探讨PI3K/Akt信号转导通路在介导雌激素促进内异症发生发展中的作用. 方法体外分离培养内异症患者在位子宫内膜间质细胞.用1×10-6 mol/L 17β-E2处理子宫内膜间质细胞不同时间(0、10、20、30、120 min),然后用MTT法检测子宫内膜间质细胞的活性,Western blot法检测细胞Akt的活化情况,确定子宫内膜间质细胞活性最强的时间点.用Western blot和MTT法分别检测不同浓度PI3K抑制剂LY294002对1×10-6 mol/L 17β-E2作用子宫内膜间质细胞20 min后Akt、细胞活性的影响. 结果 1×10-6 mol/L 17β-E2作用20 min时,子宫内膜间质细胞的活性最强,Akt活化在17β-E2作用10 min后出现,在20 min时达高峰;随着LY294002作用浓度的增加,Akt活化水平逐渐下降,浓度为50 μmol/L时已被完全阻断;随着LY294002作用浓度的增加,子宫内膜间质细胞活性逐渐下降,在50 μmol/L和100 μmol/L时活性最低,但此时仍高于空白对照组.结论 17β-E2增强在位子宫内膜间质细胞的活性可能与17β-E2通过非转录机制,迅速激活子宫内膜间质细胞的PI3K/Akt信号转导通路有关.     

子宫内膜异位症在位与异位子宫内膜血管发生研究

通过CMIS多功能彩色病理图像分析系统对子宫内膜血管密度和面积进行定量分析，并利用VIII-RAg标记子宫内膜血管，测定其微血管密度（MVD），结果表明：在同一期别中，无论是增生期还是分泌期，异位子宫内膜的血管密度及面积和MVD均主在位子宫内膜和正常子宫内膜（P＜0．01），表明在子宫内膜异位症患者中，由于异位子宫内膜组织中新生微血管增生，导致局部血管数量及面积增多，促进了异位子宫内膜的种植和生长。     

黄体生成素对多囊卵巢综合征患者卵巢黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物1和2 mRNAs及蛋白质表达的影响

目的探讨黄体生成素(LH)对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物(IRS)-1和IRS-2 mRNAs及蛋白质表达的影响,其及在卵巢局部胰岛素抵抗中的作用。方法收集行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的11例PCOS患者(PCOS组)和15例排卵正常的输卵管性不育患者(对照组)促排卵后黄素化颗粒细胞行体外培养,分别用不同浓度LH(0、20、200、2,000 mIU/ml)处理细胞48 h,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Western-blot)检测黄素化颗粒细胞IRS-1和IRS-2 mRNAs及蛋白质的表达。结果(1)与对照组比较,PCOS组黄素化颗粒细胞IRS-1 mRNA及蛋白质表达显著增加(P<0.05),IRS-2 mRNA及蛋白质表达显著降低(P<0.05);(2)不同浓度LH作用后,PCOS组黄素化颗粒细胞IRS-1 mRNA及蛋白质的表达显著增加,IRS-2 mRNA及蛋白质的表达变化不明显;对照组则均无显著变化。结论PCOS异常增高的LH可能通过增加黄素化颗粒细胞IRS-1 mRNA及蛋白质的表达参与了患者卵巢局部选择性胰岛素抵抗的发生。     

多囊卵巢综合征患者卵巢黄素化颗粒细胞瘦素信号转导分子STAT3磷酸化表达的研究

目的检测多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢黄素化颗粒细胞瘦素信号转导子和活化子STAT3磷酸化(p-STAT3)水平,并观察瘦素体外对培养卵巢黄素化颗粒细胞p-STAT3水平的影响,探讨瘦素在PCOS发病机制中的作用。方法选择行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的肥胖型PCOS患者(肥胖PCOS组)、非肥胖型PCOS患者(非肥胖PCOS组)、排卵功能正常和单纯输卵管因素不育的肥胖(肥胖对照组)及正常体重妇女(正常对照组)各15例。采用免疫印迹技术检测卵巢黄素化颗粒细胞p-STAT3水平。同时将正常人卵巢黄素化颗粒细胞行体外培养,分别加入不同浓度的瘦素(0、10、100、1,000 ng/ml)培养48 h,观察瘦素体外对人卵巢黄素化颗粒细胞p-STAT3水平的影响。结果(1)肥胖型PCOS组、肥胖对照组、非肥胖PCOS组和正常对照组卵巢黄素化颗粒细胞p-STAT3水平分别为(24.28±0.51)、(21.31±1.32)、(11.69±0.67)、(9.03±0.20),实验组间比较有显著性差异(P<0.05),其中肥胖型PCOS组p-STAT3表达水平最高,其次依次为肥胖对照组、非肥胖PCOS组和正常对照组。各组之间两两比较,均有显著性差异(P<0.05)。(2)加入瘦素培养48 h后,卵巢黄素化颗粒细胞p-STAT3水平随瘦素浓度升高而增高,呈浓度依赖性,至瘦素浓度达到100 ng/ml时,p-STAT3水平达到高峰,随后呈下降趋势。结论瘦素通过介导JAK2/STAT3信号途径可能参与了肥胖型PCOS的发病机制。     

瘦素体外对人卵巢黄素化颗粒细胞雌、孕激素分泌的影响

目的:探讨瘦素体外对人卵巢黄素化颗粒细胞雌激素(E2)和孕激素(P)分泌的影响。方法:将来自体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的卵巢黄素化颗粒细胞纯化后,在不同的浓度瘦素(0、10、20、100 ng/ml)和FSH(0、1、5、10 IU/ml)单独或联合作用下进行体外培养48 h,收集培养液,用放射免疫方法测定颗粒细胞产生E2及P的浓度。结果:①不同浓度的瘦素对黄素化颗粒细胞E2和P的基础分泌功能无明显影响;②FSH能促进黄素化颗粒细胞E2和P的分泌,随FSH浓度增加,E2和P的水平逐渐增高;③不同浓度瘦素对FSH促进黄素化颗粒细胞E2的分泌均有抑制作用,随瘦素浓度增加,抑制作用逐渐增强,但对P的分泌无影响。结论:瘦素抑制FSH刺激卵巢黄素化颗粒细胞雌激素的分泌,高浓度瘦素可能影响卵泡发育和黄体形成。     

多囊卵巢综合征合并胰岛素抵抗患者子宫内膜胰岛素受体底物1、2蛋白的表达及酪氨酸磷酸化

目的 研究多囊卵巢综合征(polycystie ovarian syndrome,PCOS)患者子宫内膜胰岛素受体底物(insulin re-ceptor substrate IRS)1 和 2 蛋白的表达及酪氨酸磷酸化的程度.探讨 PCOS 子宫内膜胰岛素抵抗的分子机制.方法 于月经周期第 1 天刮取 PCOS 合并胰岛素抵抗患者(PCOS组,15 例)和正常妇女(对照组,10 例)子宫内膜,行病理切片观察及免疫组化染色,计算机图像分析系统分析子宫内膜 IRS-1 和 IRS-2 蛋白的表达及酪氨酸磷酸化程度.结果 ①PCOS 组和对照组 IRS-1 蛋白表达的灰度值分别为(121.94±16.00)和(55.35±0.98),IRS-2 蛋白分别为(169.35±13.00)和(111.65±8.02),两组比较差异有显著性意义(P<0.01,P<0.05),PCOS 组子宫内膜 IRS-1 和 IRS-2 蛋白的表达明显降低;②PCOS 组子宫内膜 IRS 酪氨酸磷酸化的程度明显低于对照组,其灰度值分别为(141.98±22.50)、(102.72±9.78),两组比较差异有显著性意义(P<0.05).结论 PCOS 合并胰岛素抵抗患者子宫内膜组织的 IRS-1 和IRS-2 蛋白表达及酪氨酸磷酸化的程度异常所导致的受体后信号传导障碍,可能是发生胰岛素抵抗机制之一.     

罗格列酮对体外培养的PCOS患者卵巢黄素化颗粒细胞胰岛素抵抗的影响

目的:探讨罗格列酮改善PCOS卵巢局部胰岛素抵抗的作用。方法:收集行IVF-ET治疗的11例PCOS患者(PCOS组)和15例排卵正常的输卵管性不孕患者(对照组)促排卵后黄素化颗粒细胞行体外培养,分别用不同浓度罗格列酮(0nmol/L、1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L、10000nmol/L)处理细胞48h,采用RT-PCR和Westernblotting分别检测卵巢黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物(IRS)-1和IRS-2mRNA的表达及蛋白含量。结果:①基础状态下,PCOS组IRS-1mRNA表达及蛋白含量较对照组显著增加;IRS-2mRNA表达及蛋白含量较对照组显著降低(P<0.05);②不同浓度罗格列酮作用后,PCOS组IRS-1mRNA及蛋白表达显著降低,IRS-2mRNA及蛋白表达显著增加,并呈剂量依赖性,而正常对照组无变化。结论:PCOS患者卵巢局部存在胰岛素抵抗,其原因可能与IRS-1和IRS-2mRNA及蛋白表达异常有关;罗格列酮可通过提高黄素化颗粒细胞IRS-2的表达,降低IRS-1的表达,改善PCOS患者卵巢局部胰岛素抵抗。     

17β-雌二醇对子宫内膜异位症患者在位内膜间质细胞趋化因子SDF-1/CXCR4 mRNA及蛋白表达的影响

目的:研究17β-雌二醇(17β-E2)对子宫内膜异位症(内异症)患者在位子宫内膜间质细胞趋化因子SDF-1及其受体CXCR4 mRNA及蛋白表达的影响,探讨SDF-1/CXCR4在介导雌激素促进内异症发生发展中的作用。方法:体外分离、培养内异症患者在位子宫内膜间质细胞。用不同浓度17β-E2(10-12、10-10、10-8、10-6mol/L)处理子宫内膜间质细胞12 h、24 h、48 h,利用实时定量PCR(RQ-PCR)技术和流式细胞检测技术分别检测17β-E2处理前后子宫内膜间质细胞趋化因子SDF-1/CXCR4 mRNA及蛋白的表达;同法分析雌激素受体拮抗剂IC I182780(10-8mol/L)对SDF-1/CXCR4 mRNA和蛋白表达的影响。结果:不同浓度17β-E2作用于内异症患者在位子宫内膜间质细胞12 h、24 h、48 h后,SDF-1/CXCR4 mR-NA及蛋白的表达呈不同程度增高,于10-10mol/L作用最明显。雌激素受体拮抗剂IC I182780能明显抑制17β-E2的作用。结论:雌激素可促进内异症患者在位子宫内膜间质细胞SDF-1/CXCR4 mRNA及蛋白的表达,SDF-1/CXCR4可能参与了内异症的形成和发展。     

益气养阴法联合STARR手术治疗直肠前突的临床疗效观察

目的观察益气养阴法联合经肛门吻合器直肠部分切除术(STARR)治疗直肠前突的临床疗效。方法选择符合纳入标准的直肠前突患者160例,随机分为治疗组和对照组,各80例。对照组患者单纯给予STARR术治疗,治疗组给予STARR术联合益气养阴法方药(补中益气汤联合大补阴丸加减)治疗。治疗33 d后观Longo's出口梗阻型便秘评分(Longo ODS)、中医症候评分及排粪造影情况。结果两组患者治疗后Longo ODS评分、中医症候评分及排粪造影情况均优于本组治疗前(P0.05),且治疗组治疗后各指标改善情况明显优与对照组,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论益气养阴法联合STARR术治疗直肠前突疗效优于单纯STARR术,两者联合可以明显提高发病直肠前突临床症状,值得进一步推广研究。