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目的:优化以琼脂糖修饰的玻片为载体的抗体微阵列的制备方法,提高微阵列信噪比及检测灵敏度。方法:选取单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)作为待检的靶蛋白,在琼脂糖膜上首先固定MCP-1捕获抗体,经过洗涤、封闭,然后依次加入标准抗原、生物素标记的检测抗体以及亲和素标记的cy3,分别孵育、洗涤后,激光共聚焦扫描仪扫描获取图像,分析各点的荧光强度,根据荧光强度确定捕获抗体的最佳固定时间、温度以及最适宜的洗涤缓冲液。结果:与4、37℃过夜固定相比,捕获抗体室温(25℃左右)过夜固定时,蛋白质在载体上的固定效率和反应活性最高;捕获抗体过夜固定比固定2 h获得更高的检测灵敏度;另外,通过比较相同pH值不同溶质缓冲液的洗涤效应,pH 7.4的缓冲液PBST可获得更优信号强度。结论:本研究优化了以琼脂糖修饰的玻片为载体的蛋白质微阵列的反应条件,提高了微阵列的检测灵敏度。 相似文献
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急性肾损伤（acute kidney injury,AKI）和慢性肾脏病（chronic kidney disease,CKD）是严重威胁人类健康和生活质量的常见病,具有医疗花费高、病死率高的特点。研究表明,炎症是各种原因引起的肾脏病发生发展的基本病理改变的原因,因而抗炎治疗一直是肾脏病防治的核心策略。目前临床上抗炎治... 相似文献
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目的 观察单核细胞（U937细胞）对人近端肾小管上皮细胞（HK-2细胞）转分化的影响及其分子机制。 方法 将HK-2细胞与人单核细胞系U937细胞共培养;倒置相差显微镜观察HK-2细胞形态;Western印迹、实时荧光定量PCR法检测α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、纤连蛋白（FN）、E钙黏蛋白（E-cadherin）和胞间黏附分子1（ICAM-1）表达;BCECF-AM荧光染色法测定单核细胞黏附;流式细胞仪法检测HK-2细胞表面分子ICAM-1表达;基因芯片筛选HK-2细胞基因变化;利用信号阻断剂阻断基因芯片筛选出的信号通路,进一步验证单核细胞诱导肾小管上皮细胞转分化的分子机制。 结果 单核细胞可直接诱导HK-2细胞发生形态变化,减少HK-2细胞E-cadherin表达（均P < 0.05）,并上调α-SMA、FN表达（均P < 0.05）。应用CD18抗体阻断CD18-ICAM-1可抑制单核细胞黏附及其诱导的HK-2细胞形态变化。基因芯片结果显示,NF-κB信号通路分子CC亚族趋化因子配体20（CCL20）、白细胞介素（IL）2、IL-8、脂磷壁酸（LTA）及血小板内皮细胞黏附分子1（PECAM1）表达明显增加（均P < 0.05）。NF-κB信号阻断剂吡咯烷二硫氨基甲酸（PDTC）能显著抑制HK-2细胞形态变化及表面ICAM-1表达,抑制单核细胞诱导的肾小管上皮细胞转分化。 结论 单核细胞通过CD18分子与HK-2细胞表面ICAM-1结合,从而启动NF-κB信号通路介导的特定基因转录,最终导致肾小管上皮细胞发生转分化。 相似文献
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目的:应用抗体芯片技术同步检测糖尿病肾病(DN)大鼠尿液中多种细胞因子的水平,以初步探讨其在寻找DN生物标志物研究中的意义.方法:高糖高脂喂养联合低剂量链脲佐菌素(STZ)单次腹腔注射SHR大鼠诱导出2型DN模型,随机分为DN组(D组)和厄贝沙坦治疗组(T组,予厄贝沙坦50 mg·kg-1·d-1灌胃),并以同周龄WKY大鼠作对照(N组).8周后应用RayBio大鼠细胞因子抗体芯片,同步检测各组大鼠24 h尿液中19种细胞因子水平的变化.结果:与N组相比,D组大鼠尿液中性粒细胞趋化因子(CINC)-3和Fractalkine细胞因子的水平明显升高.厄贝沙坦治疗后尿液CINC-3、Fractalkine、干扰素(IFN)-γ、白介素(IL)-1α、IL-10、脂多糖诱导的CXC趋化因子(LIX)和肿瘤坏死因子(TNF)-α共7种细胞因子水平显著性下降.T组与N组细胞因子水平差异无统计学意义.结论:首次将抗体芯片技术应用于DN模型的研究中,证实尿液中某些细胞因子水平的变化与DN的发生发展和转归密切相关,为DN新型生物标志物的发现提供了新的途径. 相似文献