基于重组甘露糖结合凝集素蛋白–磁珠富集技术检测血流感染新型隐球菌的方法

目的建立一种基于重组甘露糖结合凝集素（MBL）蛋白–磁珠富集技术快速检测血流感染新型隐球菌的方法，为临床确诊新型隐球菌感染提供指导。方法利用Western blot方法检测重组MBL蛋白（M1）与新型隐球菌定性结合的情况；利用磷酸缓冲盐溶液（PBS）与兔血模拟样本检测M1-protein A磁珠对不同浓度梯度的新型隐球菌的捕获情况；比较3种不同方法［方法1，M1-protein A磁珠富集后直接进行qPCR鉴定；方法2，M1-protein A磁珠富集后培养加质谱鉴定；方法3（金标准），血培养加质谱鉴定］检测血液新型隐球菌的优劣。结果M1蛋白与新型隐球菌标准株及临床株普遍结合；不同浓度梯度新型隐球菌的PBS与兔血模拟阳性样本中，M1-protein A磁珠复合体的富集效率为18.00%～83.00%；3种新型隐球菌鉴定方法中，方法1耗时最短（4.25 h），灵敏度为10菌落形成单位/毫升（CFU/ml）；方法2灵敏度可达到≤ 1 CFU/ml，总时间57 h；作为临床诊断金标准的方法3灵敏度虽也能达到≤1 CFU/ml，但耗时较长，需120 h。结论采用磁珠富集结合qPCR、MALDI-TOF MS技术，比传统血培养大大缩短了检测时间，并且具有较高的灵敏度和特异度。     

用16S rRNA基因克隆文库研究腹泻粪便中菌群分布

目的 建立16S rRNA基因克隆文库分析菌群的方法,用于临床标本菌群分布的检测.方法 临床标本直接提取核酸,用16S rRNA基因的通用引物进行PCR扩增、纯化、连接、克隆和测序,建立16s rRNA基因克隆文库,序列与数据库进行比对分析.结果 通过16S rRNA基因克隆文库分析,腹泻标本中检出4种细菌,脆弱拟杆菌为绝对优势菌,占91%;腹泻恢复后的粪便标本中菌群呈多样性,检出12种确定种属的细菌,其中脆弱拟杆菌占14%.结论 16S rRNA基因克隆文库是一种较好地研究粪便标本菌群的方法,可直接进行粪便标本的菌群分析和研究各种细菌在腹泻中的作用.     

血流感染病原体分子检测技术研究进展

血流感染（BSI）的发病率在世界范围内有逐年升高趋势，早期识别与诊断BSI对临床治疗意义重大。 快速诊断BSI的分子学方法分为2类，即全血检测方法和依赖于血培养的检测方法。 与血培养方法相比，全血检测方法缩短了检测时间，可以检测难培养的病原菌，但敏感性仍需提高。 本研究对BSI病原体分子检测技术的研究进展予以综述。     

广西贵港地区2009－2012年新生隐球菌和格特隐球菌临床分离株基因分型与毒力特性研究

目的 研究广西贵港地区新生隐球菌和格特隐球菌临床分离株, 在种、基因型和交配型的构成及毒力特性。方法 收集2009－2012年广西贵港地区临床分离的新生隐球菌株20株, PCR扩增转录间隔区(ITS)序列进行分子生物学验证, 通过特异性引物进行PCR扩增, 鉴定血清型、交配型。利用M13-PCR指纹图谱法和URA5-限制性片段长度多态性分析法, 鉴定和验证基因型。表型研究包括37 ℃生长试验、黑色素生成试验和尿素酶试验。结果 20株有19株为新生隐球菌格鲁比变种, 血清型为A型, α交配型, 基因型为VNⅠ型。1株为格特隐球菌, 属α交配型, 基因型VGⅠ。毒力特性研究结果显示, 所有临床分离株37 ℃正常生长, 黑色素试验、尿素酶试验阳性。结论 广西贵港地区隐球菌致病菌株中绝大多数(95%)为新生隐球菌格鲁比变种、血清型为A型, α交配型, 基因型为VNⅠ型, 并发现格特隐球菌菌株。     

北京市昌平区城市居民抗菌药物及细菌耐药性认知调查分析

目的 调查分析北京市昌平区不同年龄及教育程度人群对抗菌药物及细菌耐药的认知、态度及行为,了解城市人群对抗菌药物及细菌耐药的认知缺口,为制定遏制耐药科普宣传策略提供依据。方法 设计调查问卷,采用分层随机抽样方法,借助微信“问卷星”平台开展问卷调查,利用SPSS软件进行统计分析,使用卡方(χ²)检验分析不同人群对抗菌药物认知、态度、行为状况及差异。结果 共收集到1 267份有效问卷,依据受访者年龄和教育程度的不同,将受访人群分为7个年龄组和4个学历组分别进行统计分析。受访者中对抗菌药物、当前的耐药形势及耐药菌跨领域传播的正确认知率分别为58.09%、48.38%和52.80%,研究生及以上学历组正确认知率高于另外3个学历组(χ²=32.378,P<0.05)。90.69%的受访者表示愿意学习抗菌药物的相关知识;93.61%的受访者使用前会主动了解药物的使用剂量、注意事项和不良反应;89.42%的受访者会在使用抗菌药物前阅读说明书,显示民众学习了解抗菌药物相关知识的主观意愿比较强。93.37%的受访者赞同必须医生开具处方才可购买抗菌药物的规定...     

多位点序列分型方法在嗜麦芽窄食单胞菌分子分型中的应用

目的建立多位点序列分型方法（Multilocus sequence typing,MLST）分析嗜麦芽窄食单胞菌。方法提取嗜麦芽窄食单胞菌基因组DNA,选择文献报道的7个嗜麦芽窄食单胞菌管家基因进行PCR扩增,将目的基因PCR产物测序,测序结果与标准序列比对后上传至数据库（http：／／pubmlst．org／smaltophilia／）,获得相应的7对管家基因组成的等位基因谱和序列分型编码（sequencetypes,STs）,应用MLST方法分析68株嗜麦芽窄食单胞菌ST型的流行病学意义。结果对68株嗜麦芽窄食单胞菌菌株通过多位点序列分型方法分析,所有菌株均为同一新的ST型（sT87）,该结果与现场流行病学的关系一致。结论MLST是一种方便、快速的分子生物学方法,实验室菌株资料可以比较,适用于嗜麦芽窄食单胞菌的进化关系、群体结构和长期的全球分子流行病学研究。     

北京市2004－2015年细菌性痢疾分布特征及气象影响因素分析

目的 分析北京市2004－2015年细菌性痢疾的分布特征,探讨气候因素对其时空分布的影响。方法 收集2004－2015年北京市气象资料及细菌性痢疾的发病资料,采用描述性分析方法了解其时空分布特征,直线相关分析和多元线性回归探讨细菌性痢疾发病率与平均降水量、平均气温、日照时数、平均风速、平均气压、大风日数和雨日数的关系。结果 北京市2004－2015年共报告细菌性痢疾患者280 704例,死亡36例,年平均报告发病率130.15/10万,发病集中在每年的5－10月,占报告总病例数的80.75%,0～岁组报告发病率最高,职业以散居儿童和学生最多,男女性别发病比例为1.22 ∶ 1。细菌性痢疾的报告发病率与平均降水量、平均气温和雨日数呈正相关,相关系数分别为0.931、0.878和0.888,与平均气压呈负相关,相关系数值为-0.820;多元逐步回归分析方法拟合细菌性痢疾与气象因素的回归方程为Y=3.792＋0.162X₁。结论 北京市细菌性痢疾报告发病率远高于全国发病水平,发病高峰在7－8月,平均降水量是影响细菌性痢疾报告发病率的重要气象因素。     

基于M1磁珠富集血液中念珠菌快速检测方法的建立

  目的  建立3种基于重组人甘露聚糖结合凝集素（MBL）蛋白（M1蛋白）磁珠富集技术的血液微量念珠菌快速检测方法（荧光定量PCR法、微培养法、铺板培养法）。  方法  根据荧光定量PCR方法的扩增效果,比较3种裂解液（酵母裂解液、LSTE和TXTE）提取微量念珠菌DNA的效果;通过检测液体培养后的菌量,比较5种微培养液（PBS、SA、YPD、LB和BHI）的增菌效果;使用人血浆模拟样本评价建立的3种方法和标准血培养法对血液中微量念珠菌的检测效果。  结果  与TXTE和LSTE相比,酵母裂解液提取微量念珠菌DNA的效果最佳。 SA、YPD、LB和BHI 4种微培养液中的菌量随时间延长均有上升趋势,特别是BHI增菌效果最佳。 人血浆模拟样本中,荧光定量PCR法虽然能够在最短时间内（3.75 h）检测到病原菌,但不能检出全部阳性样本。 与传统血培养法相比,微培养法和铺板培养法可分别提前至少39 h和22 h获得检测结果,灵敏度为10菌落形成单位/mL（CFU/mL）。  结论  与传统血培养法相比,荧光定量PCR法、微培养法和铺板培养法均能有效缩短检测时间,并且有较高的特异性和灵敏度。     

OXA-48的相关特性

苯唑西林酶OXA-48是一种D类碳青霉烯酶,近年来在肠杆菌科中报道日益增多。该酶对青霉素类水解能力很强,对碳青霉烯类药物活性较弱,酶活性不能被β-内酰胺酶抑制剂抑制。blaOXA-48基因上下游分别有一插入序列IS1999,共同组成转座子Tn1999。大多数菌株中,blaOXA-48基因位于一个可转移并且不携带其他耐药基因的62kb的质粒上,因此可以在细菌间广泛传播。PCR技术是检测菌株是否携带blaOXA-48基因的金标准。     

病原菌耐药监测分析指标评价体系构建的探索

当前我国病原菌耐药性问题严重,我国在多领域已分别建立的耐药监测网络,由于监测技术方法不统一,信息碎片化,无法显示我国病原菌耐药的整体流行趋势和传播规律。因此需构建全国多领域的病原菌耐药监测网络平台,揭示我国病原菌耐药发生、发展和传播规律。监测平台中需要使用相匹配的分析指标评价体系。本研究拟探索出一套科学合理的耐药监测分...