亚MIC剂量的抗生素对艰难梭菌tcdC、tcdE、tcdR转录的影响

目的亚最小抑菌浓度(MIC)剂量的某些抗生素能够诱导和促进艰难梭菌毒力编码基因及其毒素的表达,但具体机制不明。本文从艰难梭菌的毒力调控基因(tcdC、tcdE、tcdR)着手来试图解释亚MIC剂量的抗生素对艰难梭菌毒力编码基因和毒素的影响。方法中国株艰难梭菌BJ08分别生长在含有1/2 MIC剂量的克雷霉素或头孢噻肟或无抗生素的脑心浸液肉汤(BHI)液体培养基中。每4h,取一定量的艰难梭菌,通过实时荧光定量PCR检测其毒力调控基因(tcdC、tcdE、tcdR)mRNA的表达。结果 BJ08在1/2 MIC剂量的克雷霉素存在的情况下,对毒力调控基因mRNA表达的影响不大;但是在1/2 MIC剂量的头孢噻肟存在的情况下,tcdCmRNA的表达在培养早期和中期低于对照组,tcdE和tcdR的表达比起对照组都增高且提前,但两者增加幅度不同,高峰期也不同。结论在某些亚MIC剂量的抗生素存在的情况下,艰难梭菌毒力编码基因和毒素表达的变化可能是通过调节调控基因而实现的。     

利用GoPubMed对CRISPR相关文献的计量学分析

为了解CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)相关研究现状,笔者采用GoPubMed数据库的在线分析软件,对CRISPR相关文献进行计量分析.共检索到文献758篇.CRISPR相关研究文献呈逐年上升趋势,其中美国在CRISPR的文献数量和影响力均居首位,中国以北京地区发表文献最多(30篇).PLoS One刊登相关文献47篇,占发表总量的6.20%,居首位.CRISPR研究主题词涉及基因、基因组学、免疫等.高产作者为Horvath,共发表CRISPR相关文章11篇.利用GoPubMed可较好反映CRISPR研究的现状和发展趋势.中国CRISPR研究文献在整体质量和数量上均有待进一步提高.     

多位点串联重复序列分析方法在嗜麦芽窄食单胞菌分子分型中的应用

目的 探讨多位点串联重复序列分析方法(multiple-locus variable-number tandem repeat analysis, MLVA)在嗜麦芽窄食单胞菌分型中的应用。 方法 选用文献报道的12个嗜麦芽窄食单胞菌串联重复序列位点及引物,采用聚合酶链反应(PCR)和琼脂糖凝胶电泳,根据凝胶电泳图谱计算出各位点的串联重复单元拷贝数,通过BioNumerics(Version 4.0, Applied Maths BVBA, Belium)聚类分析。 结果 设置12个位点串联重复单元拷贝数100％的相似性为判断标准,可将106株嗜麦芽窄食单胞菌分为34个MLVA基因型,流行病学上有关联的菌株具有相同的基因型。设置12个位点串联重复单元拷贝数45％相似性为判断标准,将106株菌株分为11个群,相同的地域、分离来源和分离部位的菌株具有相关性。 结论 串联重复序列位点分型技术具有简便、快速、特异、可比性、可重复性和高鉴别力等优点,适合嗜麦芽窄食单胞菌的分子流行病学研究。     

致病梭菌感染的实验室诊断方法的研究进展

致病梭菌指一类可使人或动物致病的梭状芽孢杆菌, 主要包括肉毒梭菌、艰难梭菌、产气荚膜梭菌和破伤风梭菌。致病梭菌感染往往病情严重,病死率高,是重要的一类人兽共患病。鉴定致病梭菌感染的传统方法一般检测周期长,对操作人员的技术要求也高,因此,在常规检测中的应用越来越少。免疫学和分子生物学方法因其快速灵敏的特点而被广泛应用。本文将近年国内外致病梭菌的实验室诊断相关研究综述如下, 以期能够为致病梭菌临床诊断及流行病调查研究提供参考。     

病原微生物实验室生物安全管理工作进展与对策

随着科技进步和生物技术的迅猛发展，目前生物安全问题已经成为影响国家乃至世界政治、经济、安全与和平的大命题。所谓病原微生物实验室的生物安全（Biosafety）是指避免危险生物因予造成实验室人员暴露，向实验室外扩散并导致危害的综合措施，以防止实验人员感染和防止感染因子外泄而污染环境。随着形势发展的需要，近年来。国际上又将生物安全提升到生物安全保障（Biosecurity）的概念，即单位和个人为防止病原体或毒素丢失、被窃、滥用、转移或有意释放而采取的安全措施，以避免因微生物资源的不适当使用而危及公共卫生。     

脓毒症常见病原菌多重实时PCR检测方法的建立

目的 建立可同时检测脓毒症患者血液中肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、凝固酶阴性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和白假丝酵母菌的多重实时PCR方法。方法 根据各病原菌基因组保守序列设计引物和探针,建立多重实时PCR检测方法。对建立的多重实时PCR检测方法进行特异性、敏感性和灵敏度分析,并使用该法对112份脓毒症血培养阳性标本进行验证。结果 成功建立脓毒症常见病原菌的多重实时PCR检测方法。此方法特异性、敏感性良好,灵敏度达10-5 ng/l,与标准检测方法（血培养加生化鉴定）相比,缩短了20 h。112份临床血培养阳性标本中,目标病原菌83例,多重实时PCR检出80例阳性;非目标病原菌29例,多重实时PCR检测均为阴性。检测结果显示,该方法特异性达100%,敏感性达96.39%。结论 该多重实时PCR检测方法具有快速、高效、灵敏、特异的优点,可用于临床重症监护室患者血液常见感染病原菌的诊断。     

艰难梭菌五种实验室检测方法的评价

目的 比较5种艰难梭菌检测方法并进行评价。方法 包括tcdB基因PCR检测、tcdB基因Real-time PCR检测、酶联免疫法、酶联免疫层析法以及环丝氨酸-头孢西丁-果糖琼脂（CCFA）常规培养法。以CCFA培养的检测结果作为参考,对以上几种方法进行评价。结果 得到上述检测方法的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值结果以及其与参考方法的Kappa值。在125例样本中,CCFA培养法检出阳性标本11份,tcdB基因普通PCR检测、tcdB基因Real-time PCR检测、酶联免疫法、酶联免疫层析法分别检出阳性12、12、50和25例,4种方法间检出阳性率差异有统计学意义（2=61.452,P0.000 1）,敏感度分别为63.64%、63.64%、63.64%和54.55%,差异无统计学意义（2=0.288,P=0.962）;特异度为95.61%、95.61%、62.28%和83.33%,差异有统计学意义（2=63.597,P0.000 1）。结论 PCR方法敏感度、特异度最高,成本较低,适用于有实验条件的流行病学调查和临床诊断,两种免疫方法试剂盒适用于临床先期筛查以及辅助诊断。     

老年人群分离艰难梭菌分子型别特征研究

目的对不同老年人群粪便中艰难梭菌进行分离培养、鉴定以及分子型别特征研究,分析其规律特征,为积极有效地预防与控制老年人群艰难梭菌感染提供数据支持。方法收集2010年1月~2016年12月不同老年人群的粪便样本,厌氧培养艰难梭菌,并使用多位点序列分型(MLST)、毒素基因A、B和二元毒素检测、核糖体分型的方法,对老年人群分离的艰难梭菌进行研究分析。结果 116名老年人的粪便样品中分离出艰难梭菌;MLST分型得到32个型别,其中ST3、ST2、ST35、ST11为主要型别,新发现型别ST332及ST473;老年人群中艰难梭菌以产A毒素、B毒素并二元毒素阴性的菌株为主;经核糖体分型鉴定其中1株为RT027型(ST1型),发现6株RT078型(ST11型),RT001型最为常见。结论老年住院患者是艰难梭菌感染的高危人群,老年人群分离的艰难梭菌多为产毒株,ST37型非主要型别,与以往报道略有不同,并发现引起暴发流行的高毒株,应注重加强老年人群的艰难梭菌检测和预防措施。     

医院分离艰难梭菌耐药性研究

目的通过对临床分离的8株产毒型艰难梭菌进行PCR分型以及抗生素敏感性分析,初步了解临床分离艰难梭菌的耐药情况,为临床用药提供参考依据。方法临床送检的粪便标本,经生化鉴定和毒素检测后,确定8株为产毒型艰难梭菌,分别采用PCR方法进行分型,并采用Etest方法测定8株艰难梭菌对氨比西林（AC）、克林霉素（CM）、甲硝唑（MZ）、万古霉素（VA）的最小抑菌浓度,并对耐药性进行初步分析。结果8株产毒型艰难梭菌中有5株属于同一型别,7株出现耐药;3株对AC耐药;7株对CM耐药;1株对MZ耐药;未检测到对VA耐药菌株。结论临床分离艰难梭菌耐药比例高,且存在多重耐药;临床应加强艰难梭菌及厌氧菌抗生素敏感性检测。     

艰难梭菌感染诊断团体标准解读

艰难梭菌是引起抗生素相关性腹泻和医疗机构相关性腹泻的重要病原,在欧美引起暴发流行,造成沉重疾病负担。然而我国艰难梭菌感染调查缺乏统一的诊断原则和检测技术规范,我国艰难梭菌感染率和疾病负担尚不明确。因此中国CDC传染病预防控制所联合全国其他11家单位撰写《艰难梭菌感染诊断（T/CPMA 008-2020）》中华预防医学会...