可溶性肿瘤坏死因子受体p75检测在X线照射大肠癌细胞株Lovo细胞中的意义

目的:研究X线照射在体外培养人大肠癌细胞株Lovo后,检测培养上清中可溶性肿瘤坏死因子受体p75(sTNFR-p75)水平变化情况.方法:ELISA法检测培养上清中sTNFR-p75水平,流式细胞仪分析细胞凋亡率,光镜及透射电镜观察细胞形态变化.结果:X线照射后大肠癌Lovo细胞上清sTNFR-p75水平显著低于照射前sTNFR-p75水平(P＜0.01);光镜观察发现细胞体积缩小,变圆,核缩小,透射电镜观察发现部分细胞核染色质边集,染色质发生固缩.部分细胞核内染色质凝聚,核膜孔消失,核膜呈波纹状皱缩,形成凋亡小体,内含有退变的细胞器.流式细胞仪分析细胞凋亡率显著增高(P＜0.05).结论:X线照射可减少体外培养的大肠癌细胞膜上的sTNFR-p75脱落到上清中,从而提高肿瘤坏死因子(TNF)与癌细胞的结合率.进而增强照射后TNF对肿瘤的诱导凋亡作用.     

pSUPER-Racl-siRNA质粒的构建表达及对肝癌细胞HepG2体外增殖的抑制

目的 使用pSUPER作为产生siRNA的载体,构建针对Racl的siRNA表达载体,并观察其对肝癌HepG2细胞中Racl蛋白表达的抑制作用,同时研究Racl蛋白表达抑制后肝癌细胞HepG2的体外增殖情况.方法 合成用于产生针对Racl的发卡状RNA的寡核苷酸,含64个碱基,退火后插入线性化pSUPER载体的H1启动子下游.重组载体经限制性酶切和测序,构建载体pSUPER-Racl-siRNA,并将其转染肝癌细胞系HepG2.空载体pSUPER-Control-siRNA作为阴性对照.Western blotting检测转染质粒后细胞内Racl基因的变化,MTT法检测Racl蛋白表达后体外细胞增殖情况.结果 成功构建了可以表达针对Racl的siRNA表达载体pSUPER-Racl-siRNA.转染该载体能有效地下调HepG2细胞中Racl蛋白的表达,受抑制率为82%.MTT检测结果显示,抑制Racl蛋白表达后,细胞增殖速度明显减慢.结论 成功构建了针对Racl的发卡状RNA表达载体pSUPER-Racl-siRNA,其可以高效而特异地下调HepG2细胞内靶基因Racl的表达.Racl蛋白沉默对肝癌细胞增殖具有明显的抑制作用,说明其在细胞的体外生长过程中具有重要作用.     

检测X线照射肝癌细胞株HepG2可溶性肿瘤坏死因子受体-p75的临床意义

目的 研究X线照射在体外培养人肝癌细胞株HepG2后sTNFR-p75变化情况.方法 ELISA法检测培养上清中sTNFR-p75水平,流式细胞仪分析细胞凋亡率,光镜及透射电镜观察细胞形态变化.结果 X线照射后肝癌HepG2细胞培养上清sTNFR-p75水平显著低于照射前sTNFR-p75水平(P<0.01);光镜及透射电镜发现细胞体积缩小,变圆,胞浆浓缩,核固缩深染凋亡小体形成;流式细胞仪分析细胞凋亡率显著增高(P<0.05).结论 X线可通过抑制sTNFR-p75脱落到上清中,诱导细胞凋亡,增强照射肿瘤的杀伤作用.     

利用基因芯片筛查大肠癌肿瘤相关基因

目的探讨大肠癌肿瘤相关基因的差异表达。方法采用含有8064个人类靶基因的基因表达谱芯片筛选大肠癌组织同正常大肠黏膜的差异表达基因,并用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术对其中4条差异表达基因加以验证。结果大肠癌差异表达基因有1807条,发现上调表达的基因有936条,下调表达的基因有871条,其中癌基因及抑癌基因共57条。这57条基因中,36条基因表达上调．21条基因表达下调。结论大肠癌的发生发展与多个原癌基因及抑癌基因的差异表达有关。