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人骨髓间充质干细胞的生物学特性及向神经前体细胞分化的实验研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 观察体外培养的人骨髓间充质干细胞(hMSCs)的生物学特性,并探讨使其转分化为神经前体细胞(NPCs)的方法.方法以密度梯度离心和贴壁法相结合分离成人骨髓间充质干细胞,并观察细胞形态、生长、表面标记以及成骨和成软骨及成脂肪能力的情况.选用第3代细胞进行诱导,先经胚胎干细胞培养液扩增,再用加有5-氮胞苷和曲古菌素A的神经诱导液诱导,7d后,一部分样本进行Nestin、Sox2免疫荧光染色和RT-PCR检测;另一部分样本在含有B27的神经培养液中继续培养7d,然后进行NF-L的免疫荧光检测.结果分离培养的hMSCs纯度较高,CD29、CD44的阳性率均在90%以上;具有明显的成骨、成软骨和成脂肪能力;经5-氮杂胞苷和曲古菌素A作用后能向神经前体细胞分化,免疫荧光染色及RT-PCR结果显示,诱导后的细胞能特异性表达神经前体细胞标志物Nestin和Sox2;在神经培养液中继续培养后检测神经细胞标记物NF-L,可见较多阳性细胞.结论 hMSCs可在体外进行分离培养扩增,经药物修饰后具有向神经前体细胞分化的潜能. 相似文献
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诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS)是通过转录因子诱导的体细胞重编程建立的,它与胚胎干细胞具有共同的发育多潜能性及在细胞替代治疗上潜在的应用前景。然而,转录因子调节的重编程过程是一个复杂而漫长的过程,涉及大量、未知的分子及表观事件,而且产生的iPS细胞发育潜能差异较大。对其重编程机制的揭示,将有助于获得更高效、安全的iPS细胞,为最终实现应用于人类疾病的治疗提供理论依据。本文关注了近几年转录因子调节的重编程分子机制的研究,阐述了重编程过程中转录与表观的变化。 相似文献
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目的 建立体外培养和扩增胚胎干细胞R1(ES-R1)的最佳条件;利用多种生长因子,优化培养条件,体外定向诱导ES-R1分化为胰岛素分泌细胞(IPCs).方法 以丝裂霉索-C处理的MEF为饲养层,培养液中加白血病抑制因子(LIF),ES-R1维持未分化状态并扩增,进行碱性磷酸酶染色.胚胎干细胞(ESCs)悬浮培养制成拟胚体(EBs),对培养至第4d的EBs开始定向诱导,依次加入无血清的ITS培养液,胰岛前体细胞增殖培养液和胰岛分化培养液,每种培养液内各培养6d,获得形态功能较成熟的IPCs.采用DTZ染色、免疫荧光染色、胰岛素刺激实验等方法对IPCs进行检测.结果 ESCs在饲养层细胞上呈克隆状生长,经碱性磷酸酶染色为阳性;EBs经3种诱导液诱导成三维立体的IPCs,IPCs被DTZ染成猩红色,胰岛素和胰高血糖素阳性表达,胰岛素刺激实验阳性.结论 ES-R1在体外培养时,用MEF做饲养层,培养液中添加一定浓度的LIF,可以最好地保持未分化状态并大量增殖.用分阶段添加不同生长因子的方法诱导ES-R1定向分化生成的IPCs在形态和功能上具有胰岛的特性. 相似文献
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临床上许多疾病由于细胞老化或受到病损,而引起正常的生理功能发生障碍或丧失,严重威胁着人类的生命和健康,如帕金森综合征、糖尿病、皮肤烧伤等。目前治疗这些疾病的方法主要采用细胞、组织和器官移植,然而,供体来源不足和免疫排斥反应一直成为器官移植方面的有待解决的两个根本性问题。治疗性克隆是生物学界在20世纪90年代末取得的两个重大突破-体细胞克隆技术及干细胞培养技术结合后产生的医学奇迹。它的目的就是产生个性化的,在基因组成上与患者相同的胚胎干细胞(embryonicstemcell,ES),然后诱导ES分化为特定类型的可供移植的细胞或组织,来修复患者已丧失功能的组织或器官,达到完全治愈。常用的方法是:①利用体细胞核移植技术获得重构胚。②分离培养胚胎干细胞。③定向诱导分化胚胎干细胞,获得特定类型细胞。④目的细胞的分离纯化。⑤利用组织工程学的方法,把目的细胞构建成组织和器官。着重介绍治疗性克隆研究现状及最新使用方法,并对面临的问题作了概括性讨论。 相似文献
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治疗性克隆在组织工程方面的研究现状 总被引:3,自引:2,他引:3
临床上许多疾病由于细胞老化或受到病损,而引起正常的生理功能发生障碍或丧失,严重威胁着人类的生命和健康,如帕金森综合征、糖尿病、皮肤烧伤等。目前治疗这些疾病的方法主要采用细胞、组织和器官移植,然而,供体来源不足和免疫排斥反应一直成为器官移植方面的有待解决的两个根本性问题。治疗性克隆是生物学界在20世纪90年代末取得的两个重大突破一体细胞克隆技术及干细胞培养技术结合后产生的医学奇迹。它的目的就是产生个性化的,在基因组成上与患者相同的胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES),然后诱导ES分化为特定类型的可供移植的细胞或组织,来修复患者已丧失功能的组织或器官,达到完全治愈。常用的方法是:①利用体细胞核移植技术获得重构胚。②分离培养胚胎干细胞。③定向诱导分化胚胎干细胞,获得特定类型细胞。④目的细胞的分离纯化。⑤利用组织工程学的方法,把目的细胞构建成组织和器官。着重介绍治疗性克隆研究现状及最新使用方法,并对面临的问题作了概括性讨论。 相似文献
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目的 将四倍体胚胎补偿技术与转基因相结合,构建基因打靶载体转化的胚胎干细胞(ESCs),获得小概率的同源重组事件,进而直接得到所要的突变品系。 方法 通过电穿孔的方法将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达质粒转入ESCs,用G418筛选获得EGFP-ESCs。另外,通过电融合获得四倍体囊胚细胞,显微注射法将19~21个EGFP-ESCs注入每个四倍体囊胚腔,分别移植到假孕2.5d雌鼠子宫或假孕0.5d的输卵管内。 结果 获得稳定表达的EGFP-ESCs,染色体数目正常 (2n=40条);四倍体细胞融合率为95.07%,囊胚发育率为95%;共获得410个重构囊胚;移植后未得到出生小鼠,但共观察到了151个着床位点,子宫移植的着床率为29.41%,输卵管移植的着床率为64.37%,获得的胚胎中EGFP蛋白有散在的表达。 结论 稳定表达的EGFP-ESCs参与到了转基因胎鼠的发育中;本实验中输卵管移植的着床率高于子宫移植的着床率。 相似文献
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缺氧时15-脂氧化酶在体外牛肺动脉内皮细胞的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨急性缺氧时,15-脂氧化酶(15-LO)在体外肺动脉内皮细胞的表达部位及程度。方法通过细胞培养,然后牛肺动脉内皮细胞分别缺氧0h、0.5h、1h、2h、3h,在倒置显微镜下观察细胞形态,通过做免疫组化,观察牛肺动脉内皮细胞15-LO的表达情况及表达部位。结果正常情况下,牛肺动脉内皮细胞,倒置显微镜下呈扁平或多角形。通过免疫组化实验可观察到,15-LO在牛肺动脉内皮细胞胞质内有表达,而且在不同缺氧时间均有表达,15-LO被染成褐色,缺氧0h时胞质内无褐色颗粒。结论缺氧条件下,在体外牛肺动脉内皮细胞15-LO确有表达,而且随缺氧时间增加,表达增强。 相似文献
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目的检测用增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)转染的小鼠胎儿成纤维细胞及小鼠胚胎干细胞的转染效率及EGFP的表达情况。方法电穿孔法将EGFP转入胎儿成纤维细胞及胚胎干细胞,G418筛选,荧光显微镜观察转染效率及绿色荧光蛋白表达情况。结果胚胎干细胞的转染率高于成纤维细胞,转染后的两种细胞经药物筛选均有绿色荧光蛋白表达。结论电穿孔转染细胞的方法简单、效率高,是一种较为理想的基因转染方法,经药物筛选后的两种细胞均可用于核移植,为转基因克隆动物的研究奠定了基础。 相似文献