短膜虫培养方法的改进

寄生于青蝇幼虫肠道的一种短膜虫(Rithidialuciliae)是对人畜不致病的鞭毛虫。由于其动基体上的ds-DNA抗原可作检测结缔组织病,诸如红斑狼疮等疾病的抗ds-DNA抗体,因而在临床诊断中颇有意义.本文报道以199培养基培养短膜虫的     

竞争性ELISA法检测人尿金属硫蛋白方法的改进及应用

[目的]改进检测人尿金属硫蛋白（UMT）的竞争性酶联免疫吸附法（ELISA），探讨应用该法测定人尿样标本UMT含量的价值。[方法]分离纯化人肝脏金属硫蛋白（HMT），制备抗金属硫蛋白单克隆抗体（McAb），利用待测样品中MT与包被MT竞争结合McAb的原理，建立竞争性ELISA，并检测健康在校大学生298份尿样中的UMT含量。[结果]竞争性ELISA对人UMT最低检出限为9ng／mL，组内和组间的变异系数分别为1．78％一6．72％和5．45％～13：26％，样品的回收率为99．69％～107．25％。尿样检测结果显示运动后UMT含量为（19．73±8．65）ng／μmolCr较运动前的（10．58±5．62）ng／μmolCr明显增加（P〈0．05）；吸烟群体UMT含量为（86．58±30．96）ng／μmolCr，显著高于不吸烟人群[（14．73±6．57）ng／μmolCr]（P〈0．05）。[结论]本法对于检测人UMT具有较好的精密度和准确度，可用于人UMT检测；运动后UMT水平显著升高，吸烟者UMT明显高于正常对照。     

人嗜碱性细胞脱粒试验诊断棘球蚴病

本文报道了用含嗜碱性细胞多的细胞悬液对12例棘球蚴病人及68例对照者的嗜碱性细胞脱粒反应的结果。12例病人中有10例手术证实肝脏上有棘球蚴囊体、一例仅网膜上有一直径为3cm的囊体,另一例肝脏上有一囊体已经钙化。68例对照者是6名无棘球蚴感染的新生儿,12     

建立杜氏利什曼单克隆抗体的初报

以新疆平原地区病人分离的杜氏利什曼“801”株前鞭毛期免疫BALB/c小鼠,取其脾与Sp 2/0骨髓瘤细胞融合,融合率为79％,经测定,在杂交瘤细胞内有21％对杜氏利什曼抗原起阳性反应,其中0.2％显示为特异性抗体。选特异性高的杂交瘤细胞     

墨西哥利什曼原虫环形DNA1含有编码核苷酸结合蛋白基因

目的　对扩增的墨西哥利什曼原虫环形 DNA1(CD1)部分片段进行测序 ,确定具有蛋白编码功能的开放阅读框。　方法　通过脉冲电泳方法分离并使用琼脂糖酶方法回收 CD1,酶切的 CD1片段克隆于 p Zero载体 ,用 M13通用引物自动测序决定核苷酸序列 ,用 GCG- PCGENE程序分析序列。　结果　测出 4385个核苷酸序列 ,通过分析发现两个开放阅读框具有蛋白质编码功能 (编码核苷酸结合蛋白 )。　结论　墨西哥利什曼原虫 CD1遗传成分含有两个编码核苷酸结合蛋白基因     

恶性疟原虫单表位单抗的建立及鉴定

目的： 研制恶性疟原虫单表位单抗。方法： 根据蛋白质结构理论, 选取能代表恶性疟原虫蛋白质抗原性的ＨＲＰ－ＩＩ肽段, 长度为６～９ 个氨基酸, 经人工合成, 通过毛细管电泳, 确定其纯度后, 对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠进行免疫。结果： 应用脾脏埋植法和杂交瘤技术, 获得４ 株针对恶性疟原虫ＨＲＰ－ＩＩ单一表位的杂交瘤细胞。结论： 首次报告直接用合成ＨＲＰ－ＩＩ肽段制备针对该蛋白质的单表位单抗的方法获得成功。     

抗小鼠凝血因子IX的大鼠—小鼠杂交瘤细胞株的建立

1997年 ,Ｓｔａｆｆｏｒｄ博士等建立了凝血因子ＩＸ基因剔除小鼠动物模型 ,薛京伦等 (1997)证实了该模型能极佳地复现人血友病Ｂ临床表型 ,从而为血友病Ｂ基因治疗研究提供了一个良好的模型。为了对该动物模型的遗传稳定性和相应临床表征作深入研究 ,以及提供小鼠凝血因子ＩＸ(ｍＦＩＸ)表达的检测手段 ,我们制备了抗小鼠ｍＦＩＸ单克隆抗体。本实验选择Ｌｏｕ/Ｍ大鼠 ,以复旦大学遗传所制备的基因工程产品ｍＦＩＸ为抗原 ,以 0 2ｍｌｍＦＩＸ(含蛋白 0 6ｍｇ)加0 2ｍｌ福氏完全佐剂腹背部皮下多点免疫 ,2周后以同等剂量ｍＦＩＸ加不完…     

恶性疟原虫乳酸脱氢酶特异性单克隆抗体的制备

目的制备恶性疟原虫乳酸脱氢酶特异性单克隆抗体。方法克隆、表达恶性疟原虫乳酸脱氢酶基因,并以表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,对所制备的单克隆抗体确定其亚类和效价,蛋白质印迹法(Western blotting)分析其特异性。结果成功克隆并表达了恶性疟原虫乳酸脱氢酶基因,以重组恶性疟原虫乳酸脱氢酶蛋白作为免疫源制备单克隆抗体,共筛选了15株能高效分泌效价在1∶6 400～1∶51 200特异抗体的细胞株,抗体亚类为IgG1或IgG2。所有抗体均能唯一识别恶性疟原虫虫源蛋白Mr 33 000组分,而与疫区非疟疾发热病人的红细胞组分无交叉反应。结论以重组恶性疟原虫乳酸脱氢酶蛋白为免疫源成功制备了能识别天然恶性疟原虫乳酸脱氢酶蛋白的特异性单克隆抗体。     

恶性疟原虫现场样品HRP-Ⅱ基因部分序列分析

目的　分析和比较不同地理株恶性疟原虫现场样品及我国恶性疟原虫现场样品与实验室培养虫株在HRP Ⅱ基因上的多态性。　方法　分别以在中国感染的恶性疟病人和在非洲感染的恶性疟病人全血为材料 ,PCR扩增HRP Ⅱ基因片段 ,扩增的产物分别克隆于 pUCm T载体并进行测序 ,用GENEDOC软件比较分析核苷酸序列及其推导的氨基酸序列的同源性。　结果　从中国海南省和云南省恶性疟病人血样中扩增出序列和长度完全相同的片段 ,大小为44 7bp ;从在非洲感染的恶性疟病人血样中扩增出 813bp的片段 ;中国恶性疟原虫实验室培养株相应核苷酸序列长度为870bp。从中国恶性疟病人血样扩增出的HRP Ⅱ基因片段序列与从非洲恶性疟病人血样扩增出的HRP Ⅱ基因片段序列及我国恶性疟原虫培养株相应的核苷酸序列相比 ,不但有多个长短不等序列的缺失和插入 ,还有多个碱基发生了突变 ;比较推导的氨基酸序列 ,除了有多个长短不等氨基酸序列的缺失和插入外 ,其他氨基酸残基没有发生改变。　结论　恶性疟原虫HRP Ⅱ基因在不同地理株间存在差异 ,在同一地理株的实验室培养株与现场样品间也存在差异 ,这些差异主要表现为长度差异和少量碱基变异     

体外培养杜氏利什曼原虫无鞭毛期和期特异性抗原的测定

利什曼原虫无鞭毛期主要寄生在人体内巨噬细胞和网状内皮系统的其它吞噬细胞内。通常,媒介体内的前鞭毛体可经体外培养获得,而对无鞭毛期原虫的体外培养研究自1979年以来曾有不少学者用kuffer′s细胞、皮肤粘膜细胞、骨髓细胞及人外周血液等方法,均只能在较短时间获得成功。国内对无鞭毛期的体外培养,迄今尚无报道。为此,我们对其培养方法进行了研究,并以获得的材料,对杜氏利什曼原虫无鞭毛期的相关抗原作了观察。