深圳口岸首例入境人员HIV-1毒株近似全基因序列的测定与分析

目的获得深圳口岸首例入境人员HIV-1亚型毒株全长基因组序列并分析其特征。方法以深圳出入境检验检疫局HIV确证实验室确证的1例HIV感染者为研究对象,提取病毒RNA,利用逆转录巢式RT-PCR技术,分两段扩增病毒近似全长基因序列,对PCR产物进行核苷酸序列测定,应用生物信息学软件对全基因序列进行系统进化分析。结果获得了8 831 bp长度的近全长基因组序列,系统进化树分析结果显示该毒株与HIV-1 CRF01_AE亚型参考株成簇,Bootstrap值为100%,通过与世界上不同国家和地区流行的HIV-1 CRF01_AE亚型毒株比较,该毒株与泰国流行毒株的关系最近。结论该毒株是由境外传入的,应对入境人员HIV感染毒株的来源和变异进行密切监测。     

C群脑膜炎球菌结合疫苗的质量控制与生产的科学挑战

世界卫生组织(WHO)生物制品标准化专家委员会于1976年通过了脑膜炎球菌多糖疫苗的建议，并于1978年和1981年进行了修订。在临床研究中，疫苗的有效率至少达90％，证明其在疫苗接种计划中高度有效。然而，不能在幼婴中诱生保护性应答或免疫记忆制约了其在英国婴儿免疫接种计划中的应用。随着b型流感杆菌(Hib)结合疫苗的成功引入，C群脑膜炎球菌(MenC)荚膜多糖结合疫苗的研究取得了显著的进展。临床对照试验已证实它们在所有年龄组中均可诱生针对MenC多糖的保护性水平的抗体，并且作为T细胞依赖性抗原，能诱导免疫记忆和抗荚膜抗体的亲和力成熟。     

人免疫缺陷病毒1型CRF07_BC毒株准种间的重组

目的 通过研究人类免疫缺陷病毒1型（human immunodeficiency virus1，HIV-1）感染者个体内准种间的差异，探讨HIV的系统进化的发生模式。方法 从HIV-1感染者血浆中提取总RNA，通过逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）获得HIV．1gp120全长基因，纯化后装入T载体，转化至TOP10大肠埃希菌内增殖，通过蓝白斑筛选获得阳性克隆，对所获得的目的克隆测序并分析。结果 获得同一患者的16个克隆的gp120全长基因序列，通过系统进化树分析，克隆序列均为CRF07_BC亚型，但在系统进化树上16个克隆可明显分为A、B两群，其中13个克隆属于A群，2个克隆属于B群，1个克隆（编号XPD7）位于A、B群之间，通过simplot软件的重组分析，发现XPD7克隆为A群和B群的重组株。结论 发现了我国广泛流行的HIV-1CRF07-BC毒株准种间的重组现象，准种间的重组作为HIV进化的一种有效手段将导致HIV毒株的快速进化的发生，可能更易逃脱宿主的免疫监控。     

C群脑膜炎球菌结合疫苗的质量控制与生产的科学挑战

世界卫生组织(WHO)生物制品标准化专家委员会于1976年通过了脑膜炎球菌多糖疫苗的建议,并于1978年和1981年进行了修订.在临床研究中,疫苗的有效率至少达90%,证明其在疫苗接种计划中高度有效.然而,不能在幼婴中诱生保护性应答或免疫记忆制约了其在英国婴儿免疫接种计划中的应用.随着b型流感杆菌(Hib)结合疫苗的成功引入,C群脑膜炎球菌(MenC)荚膜多糖结合疫苗的研究取得了显著的进展.临床对照试验已证实它们在所有年龄组中均可诱生针对MenC多糖的保护性水平的抗体,并且作为T细胞依赖性抗原,能诱导免疫记忆和抗荚膜抗体的亲和力成熟.英国引入MenC结合疫苗后,证实该疫苗可提供保护性免疫.WHO已经制定了有关这些新疫苗生产和检定的建议.     

免疫接种质量标准指导方针

这是1997年免疫接种质量标准的修订版,也是受美国传染病学会(IDSA)实施指导方针委员会委托建立的系列指导方针之一.这个资料被视为卫生保健标准,而不仅仅是实施指导方针,因为这些建议有着强有力的证据,可以普遍实施,很少例外.这些指导方针的目的是为了给那些对婴儿、儿童、青少年以及成年人作出免疫决定的临床医师提供帮助.这个文件是对以前由国家组织制定的基于证据的方针的概括.对每个指导方针均采用标准分级系统确定建议的力度以及审核被文献引用的论据的质量.其应用对象为包括儿科医生、通科医生、内科医生(包括专家)、产科医生以及其他提供免疫接种的卫生保健人员.专家组成员都是成人和儿科传染病领域的专家.实施指导方针委员会及有关评论家已对该文件作了客观评价,并由IDSA委员会通过.对遵照这些标准的检测指标也包括在内.该文件将被公布在IDSA的主页(http://www.idsociety.rog/.)上.     

深圳国际旅行人员HIV-1基因型分析

目的监测深圳口岸国际旅行人员中HIV感染者HIV-1亚型的流行状况。方法从69份HIV-1抗体阳性血浆中提取病毒总RNA,通过逆转录和巢式PCR技术扩增HIV—1 gag和p02基因,再对PCR产物进行核苷酸序列测定,并对所获得的序列进行分析来确定基因亚型。结果69份样品中共发现9种HIV-1亚型和重组亚型,其中CRF01-AE重组亚型28份,B亚型21份,CRF02_AG重组亚型4份,C亚型4份,G亚型3份,CRF07_BC重组亚型3份,CRF08_BC重组亚型3份,A1亚型2份,D亚型1份。这些不同亚型的感染者来自包括中国在内的19个不同国家。结论深圳国际旅行人员中HIV-1亚型和重组亚型种类复杂多样,监测国际旅行人员中HIV感染者基因型分布情况,对及时发现新型毒株,预防和控制艾滋病十分重要。     

2008年深圳口岸外籍人员血清登革病毒抗体水平监测结果分析

〔目的〕了解深圳口岸外籍人员中登革病毒（Dengue Virus,DV）感染状况,为我国口岸登革热防控措施提供依据。〔方法〕用酶联免疫吸附试验（ELISA）对2008年8—9月入境体检的外籍人员进行血清DV IgM、IgG抗体检测,ELISA可疑结果采用登革热IgG/IgM联合快速检测卡进行复检以最终判定结果。〔结果〕共对440名外籍人员进行了血清DVIgM、IgG抗体检测,IgM抗体阳性率为2.27%（10/440）,IgG抗体阳性率为1.14%（5/440）。未检出IgM、IgG抗体均阳性者。东南亚地区人员的DV IgM、IgG抗体阳性率分别为7.59%（6/79）和3.80%（3/79）;拉丁美洲人员的DV IgM和IgG抗体阳性率均为6.67%（1/15）;北美地区人员的DV IgM抗体阳性率为0.99%（1/101）且未检出DV IgG抗体阳性者;欧洲地区人员的DVIgG抗体阳性率为1.59%（1/63）且未检出DVIgM抗体阳性者;非洲和大洋洲人员均未检测出DV抗体阳性者。〔结论〕与其他地区相比,东南亚和拉丁美洲入境人员携带DV的可能性较大。随着全球人口流动的日益频繁,应进一步加大对口岸传染病的防控力度。     

结核分枝杆菌双重实时RT-PCR检测方法的研究

目的建立检测结核分枝杆菌mRNA表达水平的双重实时RT-PCR反应体系,准确快速鉴定结核分枝杆菌。方法根据GenBank上已发表的结核分枝杆菌表达85B抗原的fbpB mRNA基因序列,进行对比分析,设计合成fbpB引物和探针,其中探针以CY5为报告基团,BHQ3为淬灭基团。根据WHO文献报道合成人类RNase P基因引物和探针,其中探针以FAM为报告基团,BHQ1为淬灭基团。经条件优化后,建立检测结核分枝杆菌mRNA双重实时RT-PCR方法,在同一体系内同时扩增结核分枝杆菌fbpB基因和人类RNase P基因,通过检测10份肺结核患者痰液和10份健康无症状人群痰液,检验方法的特异性、重复性和检测限性。结果肺结核患者痰液fbpB和RNase P基因均扩增阳性,健康无症状人群痰液fbpB均无扩展曲线,RNase P均扩增阳性。重复性检测显示fbpB基因重复检测的变异系数在1%以下,fbpB检测CT值与痰涂片抗酸染色分枝杆菌的数量呈良好的相关性。结论建立了一种快速双重实时RT-PCR方法能同时对结核分枝杆菌fbpB mRNA基因和人类RNase P基因进行检测,在检测fbpBmRNA基因的同时,通过检测RNase P基因监测RNA提取效果和PCR反应扩增效果。     

登革热病毒多重荧光PCR检测及基因分型方法的研究

目的建立一种登革热病毒双靶基因多重荧光PCR检测方法,用于登革热病毒的实验室诊断和基因分型。方法选取登革热病毒Ⅰ-Ⅳ型病毒保守区设计型特异性引物探针和通用型引物探针。评估多重荧光PCR检测方法的特异性、重复性和检测限;并对20份阳性样本进行检测。结果20个登革热阳性核酸标本在通用型检测全部为阳性,特异性型别检测发现登革热病毒Ⅰ型10例、登革热病毒Ⅱ型3例、登革热病毒Ⅲ型3例、登革热病毒Ⅳ型4例;20名正常无症状人群标本提取的核酸和HIV、HCV和HEV通用型和特异性型别检测全部为阴性。梯度检测的变异系数均小于5％。对登革热Ⅰ-Ⅳ型病毒检测最低检测限达10^3 eopies／ml。结论本研究建立的登革热病毒双靶基因多重荧光PCR检测及分型方法具有特异性好、重复性好、快速易操作等优点,可用于登革热病毒的快速检测和基因分型鉴定。     

人冠状病毒HCoV-HKU1环介导等温扩增检测技术的研究

目的建立一种快速、灵敏、高效的人冠状病毒HKU1(HCoV-HKU1)LAMP扩增检测方法。方法应用生物信息学软件设计5套LAMP扩增引物,以合成的HCoV-HKU1质粒为模板,通过实时浊度法进行最佳引物组的筛选,并分析该方法的特异性和灵敏度。结果 HCoV-HKU1 LAMP扩增方法针对其他病原微生物及人类基因组无反应信号。该方法可以检测到1拷贝/μl的HCoV-HKU1质粒。结论 HCoV-HKU1 LAMP扩增方法特异性好、灵敏度高,在临床鉴别诊断和口岸冠状病毒的检测中具有很好的应用前景。