核定位信号肽在异种移植动物模型转人α1,2-岩藻糖苷转移酶基因小鼠制备中的作用

目的探讨核定位信号肽（NLS）在转人α1，2-岩藻糖苷转移酶（HT）基因小鼠制备中的作用。方法将受精卵随机分为3组，采用显微注射的方法制备转基因小鼠。实验组：将NLS转基因构件与人HT转基因构件同时导入细胞质；对照Ⅰ组：将人HT转基因构件导入细胞质；对照Ⅱ组：将人HT转基因构件导入细胞核。应用聚合酶链反应（PCR）、Southern杂交及逆转录（RT）-PCR等方法检测人HT基因在G0代小鼠体内的整合与表达，应用流式细胞计数（FCM）检测转基因小鼠外周血单核细胞（PBMCs）表面H抗原与α-Gal抗原的表达。结果实验组与对照Ⅰ组G0代小鼠的出生率33．8%（46／136）及35．4%（23／65）高于对照Ⅱ组10．2％（51／498）（P〈0．01），实验组人HT基因的整合率（30．4%，14／46）高于对照Ⅰ组（0，0／23）与对照Ⅱ组（11．8%，6／51，P〈0．01），实验组人HT基因的表达率（19．6%，9／46）也高于对照Ⅰ组（0，0／23）和对照Ⅱ组（5．9%,3／51，P〈0．01），人HT mRNA在小鼠心、肝、肾和骨骼肌组织中均表达阳性。转基因小鼠PBMCs表面H抗原表达阳性，表达强度为人的85％～190%，同时α-Gal抗原表达显著降低。为正常小鼠的5%～12％。转基因小鼠已经稳定传3代。结论NLS基因与目的基因细胞质共注射是制备转基因小鼠简便实用的新方法。     

异种移植领域猪内源性逆转录病毒的研究进展

供体器官来源不足严重阻碍和困扰着器官移植手术的推广和应用，随着免疫学、基因工程与克隆技术的迅速发展，转基因猪的出现，异种移植有望解决器官短缺的问题，但猪内源性逆转录病毒种间传播的可能性必须进一步深入研究，本文就近期相关研究作一综述。     

多房囊性肾细胞癌8例报道及文献复习

目的 探讨并评估多房囊性肾细胞癌(MCRCC)的诊断及治疗方法的选择.方法 回顾性分析8例MCRCC的临床资料.分析MCRCC的临床表现、放射学特征、手术方法及病理特征和随访结果.结果 MCRCC占全部含囊性成分的肾细胞癌的3.3%,75.0%的病例行根治性肾脏切除,25.0%行肾部分切除.肿瘤的平均直径是3.7cm,平均实体成分占肿瘤的9.5%,平均肿瘤分级是1.1.平均随访38.2个月,无一例复发或转移.结论 MCRCC专指那些囊壁上由小量(25.0%或更少)的透明癌细胞构成的囊性肾细胞癌,是肾细胞癌的一种罕见的亚型,容易与其他表现的肾囊性病变的疾病相混淆,鉴别诊断很重要,超声检查是一个首选的方法,计算机断层扫描能更好地识别其恶性特征.磁共振成像用于模棱两可的病例.本病的良性生物学行为可能使患者受益于保留肾单位的手术.     

家族聚集性原发性夜间遗尿症患儿尿动力学研究

目的 探讨家族聚集性因素对原发性夜间遗尿症(PNE)患儿影响.方法 选取PNE患儿115例,依据PNE先症者三代家族其他成员是否累及,分为家族聚集性(FPNE组,45例)和散发性(SPNE组,70例).填写调查表评估觉醒功能、记录排尿日记和完成白天尿动力学检查.结果 FPNE组重度PNE、非单症状性PNE和小容量膀胱发生率分别为27%、58%和44%,均显著高于SPNE组的7%、21%和21%(P＜0.05),而夜间多尿和觉醒障碍发生率在二组之间的差异无统计学意义.FPNE组逼尿肌过度活跃和尿动力学功能性膀胱出口阻力增加发生率为53%和60%,分别显著高于SPNE组的19%和37%(P＜0.05).最大排尿量和最大膀胱压测定容量在对照组、SPNE组和FPNE组之间逐渐降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 家族聚集性因素可使PNE发生膀胱功能障碍风险增加,尿动力学检查为其治疗提供客观依据.     

血清前列腺特异性抗原联合血清肿瘤相关物质在早期前列腺癌诊断中的应用分析

目的分析血清前列腺特异性抗原(PSA)联合血清肿瘤相关物质(TAM)在早期诊断前列腺癌中的应用价值。方法选择128例前列腺癌患者为病例组,另选择128例前列腺良性病变者为对照组,检测所有患者PSA及TAM值,分析PSA联合TAM在早期诊断前列腺癌中的应用价值。结果以PSA≥4.08 ng/ml为诊断前列腺癌的临界值,PSA诊断前列腺癌的准确度、特异度以及灵敏度分别为82.8%、76.1%和88.6%,受试者工作特征(ROC)曲线下面积为0.873。以TAM≥98.36 U/ml为诊断前列腺癌的临界值,TAM诊断前列腺癌的准确度、特异度以及灵敏度分别为77.3%、78.7%和74.5%,ROC曲线下面积为0.832。实施双指标联合检测,特异度为96.6%,高于单一指标诊断特异度。病例组患者TAM和PSA水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论在进行筛查以及早期诊断前列腺癌中,采用PSA及TAM联合检测法,可提升诊断特异度,令检查结果更为精准,值得进一步在临床中推广应用。     

转人CD59基因小鼠对人补体介导的免疫反应的保护作用

目的:探讨转基因小鼠血管内皮细胞特异性表达人CD59(hCD59)基因对人补体介导的免疫反应的保护作用。方法:通过显微注射方法建立转hCD59基因小鼠,采用PCR、Southernblot方法检测hCD59基因的整合,流式细胞仪检测hCD59蛋白的表达,人血清体外灌注转基因小鼠心脏、免疫组织化学染色补体C9及IgG评估排斥反应的情况。结果:转基因小鼠hCD59基因表达强度为人外周血白细胞的35%～120%,转基因小鼠体外灌注心脏存活时间明显延长(P<0.01),心脏补体C9沉积明显减少。结论:血管内皮细胞特异性表达hCD59可以减轻异种移植排斥反应,延长移植物的存活时间。     

前列腺癌组织中前列腺癌抗原-1的表达及临床意义

目的:探讨PCa组织中前列腺癌抗原-1(PCA-1)的表达及其临床意义。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测45例PCa组织、30例前列腺高分级上皮样内瘤样病变组织(HG-PIN)、43例BPH组织和39例其他肿瘤组织标本中PCA-1 mRNA的表达。免疫组织化学检测不同前列腺组织中PCA-1蛋白的表达。结果:PCa与HG-PIN组织标本中PCA-1 mRNA的阳性表达率分别为80.0%(36/45)和60.0%(18/30),BPH组织及其他肿瘤组织中均未见PCA-1 mRNA的表达。PCA-1 mRNA表达与PCa的临床病理参数之间无明显相关性,差异均无统计学意义(P>0.05)。PCa与HG-PIN组织标本中PCA-1蛋白的阳性表达率分别为75.6%(34/45)和50.0%(15/30),BPH组织及其他肿瘤组织中未见PCA-1蛋白阳性表达。结论:PCA-1仅在PCa组织中表达,且与PCa的临床病理参数无关,有可能作为特异性的肿瘤标志物对PCa进行早期诊断。     

Nucleostemin基因在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义

Tasi等最近发现Nudeostemin (NS)蛋白存在于多种癌细胞的细胞核，并且其与维持癌细胞自我更新能力密切相关。我们应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及核酸分子原位杂交技术检测膀胱移行细胞癌(TCC)中NS基因的表达，探讨其在TCC中的作用。     

RNA干扰抑制膀胱肿瘤细胞BIU-87核干细胞因子基因表达对其增殖的影响

目的探讨体外培养膀胱肿瘤细胞BIU-87核干细胞因子(NS)表达在肿瘤发生和肿瘤细胞自身维护中的作用,以及RNAi技术应用于肿瘤治疗的可行性.方法通过RT-PCR和Northern blot方法检测体外培养的BIU-87细胞中NS的表达情况.采用分子克隆手段构建NS基因特异性siRNA表达载体,细胞转染获得稳定整合有pcDNA4/C-NS-Silencer载体和pcDNA4/C载体的细胞克隆,Northern blot方法检测阳性克隆NS基因表达丰度的变化,并观察其体外增殖能力的变化.结果RT-PCR和Northern印迹杂交结果均显示所检测的BIU-87细胞有较高水平的NS表达,NS在正常人膀胱组织中无表达.Northern blot检测证明获得稳定整合有pcDNA4/C-NS-Silencer载体的细胞克隆NS的表达丰度明显下调,且其体外增殖速率明显降低(P＜0.05).结论NS表达在BIU-87细胞体外增殖过程中发挥重要作用,通过RNAi技术实现NS基因沉默可能是一种较有前景的肿瘤治疗方法.     

异种移植模型转人a1,2岩藻糖基转移酶基因小鼠显微注射DNA片段的制备

目的制备转人琢1,2岩藻糖基转移酶(HT)基因小鼠显微注射DNA片段。方法引物两端设计酶切识别位点,聚合酶链反应(PCR)扩增HTcDNA全长序列,两端含有EcoRⅠ和BamHⅠ酶切识序列;回收HTcDNA片段并与PMD18-T载体连接,EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切纯化质粒鉴定;EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切pMD18-HTcDNA重组质粒和pCMV-MCS质粒,回收HTcDNA片段和pCMV-MCS质粒片段,进而连接,转化感受态细菌,纯化质粒对其进行酶切、PCR和测序鉴定;PvuⅠ和NotⅠ依次单酶切重组质粒pCMV-MCS-HTcDNA,回收大小约2.85kb片段,溶于适量显微注射用缓冲液。结果成功构建了重组质粒pCMV-MCS-HTcDNA,酶切回收了2.85kb的显微注射DNA片段。结论通过基因工程技术可以获得转人HT基因小鼠显微注射DNA片段,包含基因表达元件,可以用于显微注射法建立转人HT基因小鼠。