登革热Ⅳ型病毒单克隆抗体的研究

将SP2/0-Ag小鼠骨髓瘤细胞与经登革热病毒Ⅳ型H_2 41株免疫的瑞士种小鼠脾细胞融合,获得1株分泌高滴度单克隆抗体的杂交瘤细胞,经克隆化得6E_5和6F_4两个细胞株。此单克隆抗体用免疫荧光法检查属型特异性,而用血凝抑制试验检查则呈组特异性。此抗体和一些蚊媒病毒和虫媒病毒Langat株有交叉反应。用6E_5组织培养上清液标记荧光素获得成功,这使从蚊和感染标本中直接检出和定型病毒成为可能。     

从三带喙库蚊分离出一株低毒力乙脑病毒的报告

5株从印尼三带喙库蚊分离的乙脑病毒中,有二株毒力较低,其空斑滴度,鼠脑滴变比值分别为2.23和3.23。经二次空斑选种获得到三周鼠脑内基本不致死的6-2株,当在鸡胚繁殖一代,病毒滴度为Log10PFU4.0/ml和7.0/ml时,用不同稀释度的病毒免疫小白鼠,经强毒株攻击,其保护指数分别为0.00001和0.000001。文中讨论了这种高比例的低毒力的毒株在自然界的存在与当地不显性感染率高的关系,以及可能从自然界获得免疫力好的活疫苗毒株的可能性。     

三硝基甲苯血红蛋白加合物的单克隆抗体检测方法

近年来,从动物试验到现场调查研究都证实了ＴＮＴ血红蛋白加合物是生物监测比较理想的指标［１,２］。已建立的检测三硝基甲苯（ＴＮＴ）血红蛋白加合物的方法有：化学的高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）［３］、酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）［４］、质谱法［５］以及作为初筛用的抗原斑点法［６］。ＥＬＩＳＡ法具有简便、成本低等优点,多克隆法所制备的免疫血清存在滴度低的缺点。我们采用杂交瘤技术筛选出特异性高、分泌抗体稳定的杂交瘤株,得到高滴度的抗体,并使用所获得的单克隆抗体建立检测ＴＮＴ血红蛋白加合物的ＥＬＩＳＡ方法。一…     

基于荧光微球的病毒性出血热IgM抗体检测方法的建立

目的 建立并初步评价多元检测引起病毒性出血热病原体特异性IgM抗体的方法.方法 在原核细胞中重组表达纯化马尔堡病毒、拉沙热病毒、裂谷热病毒、肺综合征出血热汉坦病毒、汉滩病毒、Seoul病毒及普马拉病毒核蛋白(NP),共价偶联到7种不同的xMAP荧光微球上.优化评价偶联效果,通过参比血清中相应病毒NP特异性抗体检测,评估检测方法,并与常规使用的MacELISA方法进行比较.结果 在Luminex平台的基础上建立了多元检测引起病毒性出血热的病毒核蛋白特异性抗体的方法,特异性与敏感性与常规应用的特异性抗体检测MacELISA试剂盒相当,但可以同时排查多个病毒感染情况.结论 利用Luminex xMAP技术建立基于病毒核蛋白多元检测方法快速敏感,操作简单,可以用于病毒性出血热的检测和血清流行病学调查.     

肾病综合征病毒McAb的获得及其在病原学及流行病学的应用

目前我国用于肾病综合征(HFRS)病原及流行病学调查的标准血清主要是病人恢复期血清。由于个体差异及血清的复杂性,必然影响检查结果的可靠性。我们用杂交瘤技术在国内首先获得高滴度(≥1/81920)高特异性的HFRS的25-1 McAb。用间接免疫荧光法能识别从不同地区、动物和人血清分离到的轻型和经典型出血热,但不能识别其它一些虫媒病毒、小儿麻痹病毒和呼肠弧病毒;鼠肺抗原检查证明,25-1 McAb的敏感性和人恢复期血清一     

重组登革病毒E蛋白结构域Ⅲ抑制登革病毒感染的初步研究

目的 了解原核表达的登革病毒(dengue virus, DV)的E蛋白结构域Ⅲ直接抑制登革病毒感染及其抗体的中和作用.方法 在大肠埃希菌中表达1~4型登革病毒E蛋白结构域Ⅲ(EⅢ).重组蛋白纯化后,进行阻断DV-2感染BHK~21细胞试验.用重组蛋白制备免疫血清,检测抗体中和作用.结果 在大肠埃希菌中成功表达了1-4型登革病毒E蛋白结构域埃希菌,4型重组E蛋白结构域Ⅲ均能够阻断2型DV感染,4型重组蛋白的免疫血清均能中和2型DV,但中和抗体效价不同.结论 原核表达的登革病毒结构域Ⅲ可以直接抑制病毒感染,所产生的抗体具有中和作用.直接抑制和中和抗体均对同型病毒作用较强.     

双抗原夹心法ELISA在检测抗肾综合征出血热总抗体中的应用

目的建立可以检测不同来源血清中抗汉坦病毒抗体的简单、灵敏的方法。方法汉坦病毒核蛋白重组表达纯化后，同时作为捕获作用的固相抗原和检测作用酶标记抗原，建立检测血清中抗汉坦病毒总抗体的双抗原夹心法ELISA法，并与常用的IFA法进行比较分析。结果检测不同血清时特异性为100％，敏感性高于IFA法4～8倍。且不需考虑更换检测试剂，不同来源的血清样本对检测结果没有明显的影响。结论本方法操作简单，成本低，具有较高的敏感性和特异性，适合用于汉坦病毒感染的监测、调查和临床诊断以及宿主动物间病毒感染流行的调查与监测。     

高致病性禽流感病毒H5N1安徽株A/Anhui/1/2005感染人肺癌上皮细胞(A549)的差异表达分析

目的 筛选人细胞中与高致病性禽流感病毒致病相关的基因,探讨高致病性禽流感病毒的致病机理.方法 分别用高致病性禽流感病毒安徽株和普通人流感病毒H1N1株分别感染人肺癌上皮细胞,通过人类全基因表达谱芯片技术对不同时段感染细胞进行差异表达分析,筛选出与高致病性禽流感病毒感染相关的候选基因,以实时定量荧光PCR法验证差异表达基因.结果 获得了不同致病性流感病毒感染细胞后的差异表达谱,验证了细胞凋亡通路、mTOR通路中以及与免疫相关的16个基因的差异表达.结论 H5N1感染后与普通人流感病毒H1N1相比具有促进细胞凋亡的趋势.     

Colti病毒抗原制备、保存及其在检测患者血清Colti病毒抗体中的应用

目的 获得较高滴度和稳定的Colti病毒抗原，进一步开展Colti病毒感染的血清学诊断。方法 用C6／36细胞培养Colti病毒，于不同时间收获后进行病毒滴度测定。病毒经聚乙二醇(PEG)纯化浓缩后抗原分别保存于-20℃和4℃备用。利用该抗原采用ELISA法检测患者血清标本的Colti病毒抗体。结果 在制备Colti病毒抗原时，以细胞培养3—4周的病毒滴度最高，经PEG纯化浓缩的抗原于-20℃和4℃条件下，保存6个月，其抗原滴度仍保持在较高水平。特别是加入甘油的抗原无论在-30℃，还是在4℃下，甚至可保存2年。用这些抗原，检测疑似乙型脑炎或病毒性脑炎患者标本1141份，Colti病毒IgM抗体阳性130例，阳性率为11．4％(130／1141)，特别是检测广州市儿童医院患者标本41份，9份Colti病毒抗体阳性，阳性率为22．0％，其中5例临床诊断为病毒性脑炎。结论 为建立检测Colti病毒抗体及诊断试剂盒提供了较稳定的抗原，Colti病毒可能是引起我国夏、秋季脑炎的又一重要病原。