北京地区三带喙库蚊乙型脑炎病毒感染率调查

1981年夏季,用接种C6/36细胞、乳鼠和三周龄小白鼠的方法从北京地区的三带喙库蚊分离病毒,检查了168批8400只蚊子,分离到乙脑病毒30株。当年的乙脑病毒检出率(批)为17.8%,蚊自然感染率为1:280,病毒检出高峰在7月下旬,最高检出率(批)为58.3%,最高自然感染率为1:86.上述三种方法的乙脑病毒检出率(批)分别为18.75%、16.96%和16.21%。文中还讨论了三带喙库蚊乙脑病毒检出率或自然感染率的高低与乙脑流行程度的关系。     

乙脑病毒McAb对乙脑病毒实验治疗的研究

本实验用经我们杂交获得的乙脑病毒51-8McAb进行。用乙脑强毒株A_2及SA_(14)株分别皮下或腹腔感染3周龄小鼠,治疗组分别于感染后24、48和120小时用51-8McAb腹腔一次注射,对照组注同量正常腹水,观察两组动物的死亡率,并计算其保护率。结果感染后24、48和120小时治疗的保护率分别为60～100％,60～83％及20～28％。数次实验结果经统计学处理,证明有显著性意义。     

流行性出血热单克隆抗体的研究

实验用流行性出血热病毒免疫的BALB/C鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,成功地获得了三株杂交瘤细胞株(25号、32号、19号),能分泌高滴度高特异性的流行性出血热单克隆抗体。以此种细胞株制备的小白鼠腹水单克隆抗体的滴     

乙脑单克隆抗体被动血凝抑制试验在乙脑血清学诊断上的应用

本文应用乙脑单克隆抗体(McAb)致敏羊血球(M-RBC)作反问被动血凝抑制试验(RPHI),检测临床诊断为乙脑的60份急性患者血清抗体,并与HI试验进行比较。结果表明,RPHI法阳性率为85.0%,HI试验法阳性率为53.3%。经统计分析,以RPHI法敏感性高、特异性强、方法简便和诊断快速,适于国内基层医院和卫生防疫站在开展临床诊断和流行病学调研时推广应用。     

我国Colti病毒基因分型的研究

目的 对我国分离的Colti病毒进行基因分型。方法 采用针对Colti病毒B2亚组第9和12片段和B1亚组第12片段的3对引物，对我国近年来分离的Colfi病毒利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法进行基因分型。同时对北京分离株BJ95-75和云南分离株YN-6的PCR产物进行了克隆测序及同源性分析。结果 Colfi病毒北京分离株BJ95-75、云南分离株YN-6、-67-1、-68-1、-69、-70-1、-70-2、-90、-92-2、-93病毒用B2亚组特异引物12-854-S/12-B2-R均能得到相对分子质量为850bp的特异条带，用针对于第9片段的B2亚组引物9-JKT-S／9-JKT-R均得到了相对分子质量为492bp的特异条带。而Colti病毒东北分离株NE97-12、NE97-3l及对照病毒如环状病毒YN-99、乙脑病毒YN-151-1未能扩出特异条带。所有Colti病毒分离株及病毒对照用Bl亚组特异引物12-B1-S/12-B1-R均未见特异条带。BJ95-75、YN-6这2株病毒第12片段核苷酸序列与B2亚组其他毒株间的同源性达到89．4％以上，特别是与中国早期分离株Banna病毒，其同源性达到98．9％以上；2株病毒第9片段的核苷酸序列与属于B2a型的Banna病毒的同源性可达到99．2％和96．5％，和JKT6423病毒的同源性也能达到84．0％，而与属于B2b型的JKT6969和JKT7043相应片段核苷酸序列的同源性只有53．0％左右。结论 首次对我国分离的Cohi病毒从分子水平上进行了研究，证实了PCR方法对Colti病毒进行基因分型的可行性，北京和云南分离株主要为B2亚组的B2a型。吉林分离株NE97-12、NE97-3l的正确分型还要依赖于将它们基因组的特定片段进行全序列分析的完成。     

汉坦病毒经不同途径黏膜免疫效果研究

目的 以大肠埃希菌不耐热肠毒素8亚单位为佐剂研究汉坦病毒经不同黏膜途径免疫的效果.方法 以乳糖为诱导剂,在大肠埃希菌表达不耐热肠毒素B亚单位(LTB),Ni2+亲和层析进行纯化.以灭活汉坦病毒84Fli株为疫苗,LTB为佐剂,分别采用滴鼻、口服、经阴道3种黏膜途径接种C57BL/6小鼠.ELISA检测血清中特异IgG和阴道冲洗液中特异IgA.结果 免疫印迹和神经节苷脂结合活性研究,证实了LTB的表达.经滴鼻、口服、阴道免疫,均可诱导分泌型IgA抗体和血清IgG抗体反应,不同途径接种组间差异无统计学意义.结论 以LTB为佐剂的灭活汉坦病毒通过3种黏膜途径均能产生抗汉坦病毒黏膜免疫和系统免疫应答.     

肾综合征出血热IgM抗体早期诊断两步法MacELISA的建立

目的 建立和改善肾综合征出血热早期诊断IgM抗体捕获MacELISA法.方法 汉坦病毒核蛋白重组表达纯化后用辣根过氧化物酶标记,建立一种以酶标抗原为基础的MacELISA(称为两步法MacELISA)并与常规三步法MacELISA进行比较分析.结果 检测不同病日HFRS患者血清IgM抗体比较两步法与三步法MacELISA高度相关,敏感性和特异性为100%,无有明显差别.结论 本方法操作简单,用时少,成本低,适合用于肾综合征出血热早期诊断和汉坦病毒感染的监测.     

登革2型病毒ZS01/01株E蛋白在真核细胞中的分泌表达研究

目的 对登革2型病毒(DENV-2)ZS01/01株E蛋白在哺乳动物细胞及昆虫细胞中的分泌表达进行研究.方法 RT-PCR扩增DENV-2 prM/E基因,通过融合PCR在prM基因前添加来自乙型脑炎病毒的信号肽序列,并将E基因羧基末端20%区域缺失或替换为乙型脑炎病毒SA14-14-2株E基因相应序列,将上述基因元件分别克隆入哺乳动物细胞表达载体pcDNA5/FRT及昆虫细胞表达载体pAcUW51-M中,将重组质粒转染293T细胞或S19细胞,利用间接免疫荧光(Immunofluoreseence assay,IFA)及Western Blot检测E蛋白的表达与分泌.结果 各重组质粒分别转染293T细胞或Sf9细胞后,E蛋白在细胞内均有效表达,而仅有携带乙脑信号肽且缺失或替换E基因羧基末端20%区域的重组质粒转染293T细胞后,上清中可检测到明显的E蛋白分泌.结论 信号肽及E基因羧基末端20%区域对登革病毒E蛋白的分泌至关重要,宿主细胞对其亦有一定影响.     

流行性出血热(EHF)诊断试剂盒的研制及使用后的初步评价

流行性出血热(EHF)是由一组病毒引起的自然疫源性急性传染病,在欧亚大陆广泛流行。该病主要危及青壮年劳力,起病急,危重病人比率多,病死率高,迄今缺乏特异的预防和治疗方法,是我国和世界重点防治的疾病之一。 1978年李镐汪等用黑线姬鼠组织切片作抗原,将可疑病人血清与之结合后,用抗人IgG荧光抗体做间接免疫荧光试验诊断病人。经多年广泛使用,确认此法准确敏感。随着EHF病毒分离培养成功,EHF的研究工作有了很大进展。近几年又建立了酶标检测EHF抗体方法以及EHF病毒的血凝和血凝抑制试验。前者操作仍较繁琐,价格昂贵;后者虽较简便,但被检血清需处理,并需新鲜血细胞;故都不十分理想。     

乙脑病毒SA14-14-2株复制子载体的构建及鉴定

目的 构建乙脑病毒SA14-14-2株复制子载体,为进一步研究以乙脑病毒为载体的新型疫苗奠定基础.方法 (1)构建了两个乙脑病毒复制子:一个为完全缺失PrM/E基因(命名为Full △prM/E Replicon);一个保留E基因C端213 bp(命名为Partial △prM/E Replicon),并代之以多克隆位点.(2)将复制子RNA转染BHK-21细胞,于24、48、72、96 h采用Real-time PCR验证复制子的自主复制能力.(3)于复制子多克隆位点处插入YFP报告基因,并将含报告基因的复制子RNA转染BHK-21细胞,采用荧光显微镜观察及流式细胞仪检测验证YFP的表达.结果 (1)两个复制子RNA转染BHK-21细胞后,RNA有随时间增加而不断增多的趋势.(2)含报告基因的复制子RNA转染BHK-21细胞后,荧光信号持续增强,表达YFP的阳性细胞率也逐渐增多.结论 构建的乙脑病毒SA14-14-2株复制子载体Full △prM/E Replicon及Partial △prM/E Replicon具有自主复制能力及对外源蛋白的表达能力.