von Hippel-Lindau 基因两种异构体在真核细胞中高效表达和对细胞凋亡信号Bax/Bcl-2的影响

目的构建von Hippel-Lindau(VHL)基因的两种异构体的重组表达载体并研究异构体与细胞凋亡信号之间的关系。方法将VHL基因的两种异构体VHL19、VHL30分别克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,测序鉴定。转染293细胞,通过蛋白印记分析细胞内两种异构体高效表达与凋亡信号Bax、Bcl-2之间的关系。结果重组质粒经酶切获得与目的基因大小相当的条带(pVHL30约660 bp,pVHL19约500 bp),测序结果显示与目的基因完全相同。蛋白印记分析结果显示VHL19和VHL30在293细胞中获得表达,Bax和Bcl-2在空白对照、载体对照和pcDNA3.1-VHL19、pcDNA3.1-VHL30各组细胞之间的表达均没有观察到明显的差异。结论成功构建VHL两种异构体VHL19、VHL30的高效表达质粒,并获得高效表达。当细胞内VHL19、VHL30高效表达时凋亡信号Bax、Bcl-2表达并没有明显变化。     

人次级淋巴组织趋化因子腺病毒载体的构建和鉴定

目的 构建携带人次级淋巴组织趋化因子的重组腺病毒载体(Ad-6Ckine),并观察其在真核细胞中的表达,为进一步的肿瘤基因治疗研究奠定基础.方法 RT-PCR法从人淋巴结中扩增出人次级淋巴组织趋化因子cDNA,利用AdMax腺病毒包装系统在细胞内同源重组出Ad-6Ckine,然后用Ad-6Ckine感染真核细胞,观察6Ckine蛋白在真核细胞中的表达.结果 成功构建了重组Ad-6Ckine,PCR法鉴定无野生型腺病毒的污染,构建的Ad-6Ckine所携带的6Ckine基因能在真核细胞中得到表达.结论 AdMax腺病毒包装系统是一种简便高效的重组腺病毒构建方法,构建的重组Ad-6Ckine可用于肿瘤基因治疗的体内外研究.     

含绿色荧光蛋白和小鼠T-bet基因双顺反子真核表达载体的构建及其在A549细胞中的表达

目的 构建一种带有绿色荧光蛋白(GFP)和小鼠T-bet基因双顺反子的新型真核表达载体pCI-mT-bet-IRES-GFP.方法 利用脑炎心肌炎病毒(EMCV)的内部核糖体进入位点(IRES),将GFP的cDNA与小鼠T-bet基因(mT-bet)连接到真核表达载体pCI中,构建含GFP和mT-bet基因双顺反子的重组质粒.结果 成功构建了含GFP和mT-bet基因双顺反子的真核表达载体.荧光显微镜下可观察到发绿色荧光的转基因细胞.结论 含绿色荧光蛋白和mT-bet基因双顺反子真核表达载体的构建为哮喘基因治疗研究提供了新的生物表达体系.     

NT-3基因修饰施万细胞促进神经干细胞体外分化为神经元样细胞

目的：观测神经营养素-3（NT-3）基因修饰施万细胞(SCs)对神经干细胞体外分化为神经元样细胞的影响。方法：神经干细胞(NSCs)分别与NT-3基因修饰SCs（NT-3-SCs）、LacZ基因基因修饰SCs（LacZ-SCs）和SCs在体外共培养，7d后用免疫组化方法观测NSCs的分化并计算其中神经元样细胞的分化率。结果：NSCs在体外可分化为神经元样细胞（NF阳性）和神经胶质样细胞（GFAP阳性），与未基因修饰的SCs相比，NT-3-SCs能更有效地提高神经元样细胞的分化率，而LacZ-SCs与SCs没有明显区别。结论：NT-3-SCs能促进NSCs向神经元样细胞分化。