E1B缺陷腺病毒对鼻咽癌CNE-2细胞杀伤作用及其机理研究

为总结我国肿瘤内科临床与基础研究成果 ,促进肿瘤内科学发展 ,由中华医学会、中华医学杂志编辑委员会主办的“首届中国肿瘤内科论坛” ,定于 2 0 0 2年第三季度召开 (具体时间、地点另行通知 )。本次会议将由出版社出版正式专著《中国肿瘤内科学研究进展》和光盘版。一、征文内容 :(1)肿瘤化疗与化疗药物的合理应用 ;各种恶性肿瘤化疗方案的制定与临床应用 ;化疗并发症的防治等。(2 )肿瘤耐药与耐药逆转剂的研究与临床应用。 (3)各类抗肿瘤药物的研究及进展。 (4 )肿瘤的生物治疗、免疫治疗与基因治疗等。 (5 )实体瘤和白血病高剂量化疗及…     

腺病毒携带人内皮抑素基因在舌癌细胞和血管内皮细胞中的表达

【目的】以腺病毒携带的人内皮抑素基因 Endostatin基因 (Ad/hEnd)感染舌癌细胞株Tca8113和人脐静脉内皮细胞株ECV30 4,观察其在舌癌细胞和静脉内皮细胞株中的表达。【方法】用 2 93细胞扩增Ad/hEnd ,并抽提、纯化。以 10MOI的Ad/GFP感染ECV细胞 ,观察细胞中表达绿色荧光蛋白的细胞所占的比例。采用免疫组化法检测Endostatin蛋白在感染了Ad/hEnd的Tca细胞和ECV细胞中的表达。Ad/hEnd感染Tca细胞后收集细胞培养液上清 ,ELISA检测上清中Endostatin蛋白含量。Western blot检测Endostatin蛋白在Tca和ECV细胞中的表达。【结果】扩增的Ad/hEnd通过空斑形成试验准确测定其滴度可达 1× 1 0 1 0 ～ 8× 1 0 1 0 PFU/mL。表达绿色荧光蛋白的细胞所占的比例为 31 %。实验显示感染Ad/hEnd后 ,在Tca细胞和ECV细胞胞浆内有Endostatin蛋白合成。细胞培养液上清中Endostatin蛋白表达浓度呈时间剂量依赖关系 ,最高达到 5 97μg/L。Western blot检测显示Endostatin蛋白可在两种细胞中高效表达 ,相对分子质量与自然Endo statin蛋白一致 ,无杂合蛋白 ,呈剂量依赖关系 ,且持续到第 7天仍呈明显的Endostatin蛋白质条带。【结论】本实验制备的重组腺病毒Ad/hEnd能在舌癌细胞和血管内皮细胞中有效表达Endostatin蛋白 ,可用于抗     

介入导向下Ad-p53基因治疗晚期恶性肿瘤的临床安全性初步观察

目的：观察介入导向下经动脉导管系统灌注p53重组腺病毒(Ad-p53)进行恶性肿瘤基因治疗的安全性。方法：选择经放化疗无效或复发及因故不能进行常规治疗的中晚期肿瘤患者15例,经瘤组织主要供血动脉进行1.5×1010～2.8×1011pfu/次、累积剂量为9.5×1010～1.40×1012pfu/例的Ad p53基因治疗(其中5例宫颈癌病人联合化疗),并观察出现的副作用。结果：临床观察发现以发热、流感样症状为主的5种不良反应,其中发热8例,流感样症状2例,胃不适、腹泻及心动过速各1例;血常规检查发现白细胞和血小板减少各1例,血红蛋白减少2例;肝肾功能检查发现转氨酶CGT、AST升高2例;治疗前后未见心电图改变(只有1例在化疗开始当天出现心动过速,第2天又恢复正常)。与化疗联合治疗未产生强于单纯化疗的副作用。上述毒副反应以Ⅰ级反应为主(占86.8％),无Ⅲ、Ⅳ级反应。结论：在所用试剂量范围内Ad-p53经动脉局部用药及与化疗联合治疗是安全可行的。     

腺病毒介导SARS病毒SN基因表达及其诱导的体液免疫

目的检测重组腺病毒Ad-SN在体内外的表达,初步探讨其在大鼠内诱导的体液免疫反应。方法Ad-SN感染Vero-E6细胞后用RT-PCR和WesternBlot法检测SN基因的表达;用WesternBlot法检测Ad-SN在大鼠皮下组织中的表达。Ad-SN皮下免疫大鼠,用ELISA法测定血清中抗SARS-CoVIgG水平。结果在Ad-SN感染的Vero-E6细胞中存在SN基因的转录,其mRNA量呈剂量依赖性;在Ad-SN感染的细胞、其培养上清及Ad-SN注射部位组织中均能检测到SN的表达。在Ad-SN免疫大鼠血清中可检测到高滴度SARS冠状病毒抗体(IgG)。结论Ad-SN能表达分泌型SN蛋白,并在大鼠体内诱导SARS-CoV特异的体液免疫反应。     

NT-3基因修饰施万细胞促进神经干细胞体外分化为神经元样细胞

目的：观测神经营养素-3（NT-3）基因修饰施万细胞(SCs)对神经干细胞体外分化为神经元样细胞的影响。方法：神经干细胞(NSCs)分别与NT-3基因修饰SCs（NT-3-SCs）、LacZ基因基因修饰SCs（LacZ-SCs）和SCs在体外共培养，7d后用免疫组化方法观测NSCs的分化并计算其中神经元样细胞的分化率。结果：NSCs在体外可分化为神经元样细胞（NF阳性）和神经胶质样细胞（GFAP阳性），与未基因修饰的SCs相比，NT-3-SCs能更有效地提高神经元样细胞的分化率，而LacZ-SCs与SCs没有明显区别。结论：NT-3-SCs能促进NSCs向神经元样细胞分化。     

肝癌特异性HSV-TK/CD基因表达质粒的构建及其杀伤活性

[目的]构建肝癌特异性双自杀基因表达质粒.[方法]用平端连接方法将pUH-3质粒中822 bp的pALBeAFP片段(含有416 bp的白蛋白启动子pALB和406 bp的甲胎蛋白增强子eAFP)代替pCEA-CD/TK质粒的CEA启动子,用PCR法鉴定插入方向,构建肝癌特异性双自杀基因表达质粒pALBeAFP-CD/TK.将pALBeAFP-CD/TK转染HepG2等4种肝癌细胞,MTT法测定前药GCV、5-FC对HepG2细胞的杀伤作用.[结果]获得pALVeAFP-CD/TK克隆,RT-PCR证实HepG2细胞转染pABeAFP-CD/TK后可表达自杀基因,pALBeAFP-CD/TK转染可使前药GCV、5-FC特异性地杀伤HeFG2细胞.[结论]肝癌特异性HSV-TK/CD基因表达质粒构建成功.     

溶瘤病毒dl1520体外对肝癌细胞杀伤作用的研究

目的:探讨E1B缺陷溶瘤腺病毒dl1520体外对肝癌细胞Hep3B的杀伤作用。方法:通过细胞病变效应(CPE)观察d l1520对肝癌细胞株的杀伤作用;MTT法测定对肝癌细胞生长抑制作用,并通过空斑法测定病毒增殖,探讨其杀伤机理。结果:d l1520在肝癌细胞株Hep3B中可复制增殖并导致明显细胞病变效应,显著抑制癌细胞的生长。结论:d l1520体外可在肝癌细胞Hep3B中复制并裂解杀伤肿瘤细胞。     

人次级淋巴组织趋化因子腺病毒载体的构建和鉴定

目的 构建携带人次级淋巴组织趋化因子的重组腺病毒载体(Ad-6Ckine),并观察其在真核细胞中的表达,为进一步的肿瘤基因治疗研究奠定基础.方法 RT-PCR法从人淋巴结中扩增出人次级淋巴组织趋化因子cDNA,利用AdMax腺病毒包装系统在细胞内同源重组出Ad-6Ckine,然后用Ad-6Ckine感染真核细胞,观察6Ckine蛋白在真核细胞中的表达.结果 成功构建了重组Ad-6Ckine,PCR法鉴定无野生型腺病毒的污染,构建的Ad-6Ckine所携带的6Ckine基因能在真核细胞中得到表达.结论 AdMax腺病毒包装系统是一种简便高效的重组腺病毒构建方法,构建的重组Ad-6Ckine可用于肿瘤基因治疗的体内外研究.     

油菜素内酯对CCRF-VCR1000细胞多药抗药性的逆转作用及其机制的初步探讨

目的了解油菜素内酯（BR）对多药抗药性细胞CCRF-VCR1000耐药性的逆转及机理。方法MTT法测定耐药因子及逆转倍数；罗丹明法测定药物积累；Sulliven方法测定拓扑异构酶II催化活性；Western blotting方法检测p53蛋白表达。结果CCRF-VCR1000细胞对阿霉素、VP-16和VCR分别呈153.1，55.9和8 123.1倍耐药。BR在不具细胞毒的浓度下（0.001-10.00 μg·mL^-1）使耐药性逆转4.4-11.6倍；并使耐药细胞药物积累改善；过度表达的p53回复到敏感细胞水平。结论在无细胞毒浓度下，BR能逆转CCRF-VCR1000的耐药性；抑制P糖蛋白对药物的外排。下调异常表达的p53蛋白可能是其逆转机制之一。