重组人纽兰格林二硫键分析

目的：应用多种质谱技术确证重组人纽兰格林（rhNRGL）的一级结构及其二硫键定位。方法：（1）利用Q—FT—MS测定rhNRGL二硫键还原前后的精确相对分子质量，确定分子中二硫键数目；（2）应用MALDI—TOF／TOF—MS法测定rhNRGL的N端序列；（3）用ESI-MS／MS法测定rhNRGL的C端序列；（4）通过Trypsin和Glu—C2种蛋白酶进行酶解，获得肽质量指纹谱，确证其序列及定位3对二硫键。结果：（1）测定rhNRGL还原前后的精确相对分子质量，两者相差6．0516，确证其主成分形成了3对二硫键；（2）串联质谱法测定rhNRGL的N端序列的5个氨基酸和C端序列的11个氨基酸，均与理论序列一致；（3）2种酶切肽谱的序列覆盖率分别为82％和64％，分析确证主成分二硫键配对正确，但同时存在少量错配二硫键异构体。结论：以上结果表明，该样品的一级结构正确，主要二硫键模式为：1—3，2—4，5—6。多肽药物的二硫键分析常常需要多种质谱及样品制备技术联合。     

重组蛋白药物C末端不同长度氨基酸序列的质谱分析

目的:基于本实验室已建立的溴化氰裂解蛋白质C末端方法结合优化后的质谱检测技术,对C末端长度分别为2~37个氨基酸,相对分子质量在200~5000的8个重组蛋白药物进行检测。方法:(1)针对重组蛋白药物的不同状态(SDS-PAGE、干粉或溶液)分别进行C末端胶内或溶液裂解;(2)质谱检测,正离子方式,雾化气为氮气,碰撞气体为氩气。源温80℃,锥孔电压50 V,MCP检测器电压为2.15 kV。结果:8个重组蛋白药物的C末端全部成功检测出,且基本为基峰。结论:建立的重组蛋白药物C末端测序联用方法应用于实际药物的检测具有很高的实用价值和学术意义。     

宫内避孕环异位致绞窄性肠梗阻1例

病人,女,45岁,经产妇.因阵发性中腹部剧烈疼痛,阵发性加重1d入院.病人腹胀,恶心,呕吐数次,低热,停止排气、排便.病人18年前曾放金属避孕环,放环后有腰酸,腹坠感,无阴道流血.查体;T 37.8C,P 90min-1,R 20min-1,BPl4/8KPa.神志清,查体合作,贫血貌.全身淋巴结不肿大.心肺无异常.腹膨隆,肠型明显,全腹有肌紧张、压痛及反跳痛.有移动性浊音.肠鸣音弱,腹腔穿刺抽出暗红色液体.X线透视见多个液平,宫底有避孕环,同时有肠管覆盖.诊断为绞窄性肠梗阻.硬膜外麻醉下行剖腹探查术,术中见:腹腔内有约2 000mL暗红色液体,距回盲部约15cm处有一段7.5cm回肠连同系膜套入避孕环内,套入段肠管坏死.金属避孕环2/3穿透子宫移位于腹腔,1/3仍嵌于子宫底部后壁.裸露于腹腔之避孕环呈弹性扩大,直径约3～4cm,回肠嵌入其中,行坏死肠段切除吻合.取出避孕环,对子宫裂口行缝合修补、术后10d病人痊愈出院.     

纳升电喷雾串联质谱对奥曲肽一级结构的确证

目的:对奥曲肽(人工合成8肽)的全序列进行确证.方法:采用加入二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)还原方法将奥曲肽中的二硫键打开,然后利用纳升电喷雾串联质谱对奥曲肽的分子量以及全序列进行了确证.结果:采用纳升电喷雾串联质谱测得的还原前奥曲肽相对分子质量1 019.4502,与理论分子质量1 019.4483一致,误差为1.9 ppm.还原后奥曲肽实测相对分子质量1 021.4567,比还原前奥曲肽实际相对分子质量1 019.4502多2,表明奥曲肽中存在一对二硫键.还原后奥曲肽的序列测定结果为FCFWKTCT',与理论序列一致.结论:通过质谱分析确定了奥曲肽的一级结构,包括二硫键分析、序列分析以及C端的苏氨醇化修饰.     

原发性脑创伤后人脑皮层差异蛋白质组研究

目的应用蛋白质组学技术，研究不同程度脑创伤后的人脑皮层蛋白质组表达变化的情况。方法将临床标本以GCS评分分为中度和重度损伤组，提取脑挫伤部位皮层的总蛋白。通过双向电泳．分离蛋白。应用胶内酶切、生物质谱，鉴定由图像分析软件所得出的具有表达差异的蛋白质点。结果通过比较，目前已发现12个蛋白质点，表达水平具有显著性差异变化。在已鉴定出的蛋白点中，属于10种蛋白质。依其功能可分为：细胞骨架、代谢反应、氧化应激反应、功能未知等几类。在重伤组中，一共有9个蛋白点、6种蛋白表达上调（α-烯醇化酶、磷酸丙糖异构酶、5’磷酸吡哆醇氧化酶、crtstalin、stathmin-1、NP25）；中度损伤组3个蛋白点、4种蛋白表达上调（谷氨酰胺S转移酶、5’3’核苷酸酶、HSPC108、proapolipoprotein）。结论外伤后，神经系统由于受伤程度的不同，蛋白表达水平会发生变化。原发性脑创伤的损伤程度不同将产生神经系统病生理反应的差异。     

改进的质谱兼容的胶内酶切方法

目的：改善胶内酶切的肽段回收率，提高蛋白质的有效鉴定率。方法：将改进的胶内酶切“四步提取法”，应用到96个双向电泳蛋白质斑点分析。结果：该方法提高了胶内蛋白质酶切肽段的回收率，改善了质谱图谱的质量。蛋白质的有效鉴定率达89．6％，其中，数据库检索得分80分以上者达82％。另外，证实了酶解原液直接用于质谱分析可获得较好信噪比的谱图。结论：应用“四步提取法”使得酶解肽段提取率和蛋白质的有效鉴定率明显提高。     

青蒿素的红外光谱定量测定

青蒿素的红外光谱定量测定军事医学科学院仪器分析中心北京１００８５０刘炳玉，田惠君，崔进，宋占军青蒿素是从中药黄花蒿（ＡｒｔｅｍｉｓｉａａｎｎｕａＬ．）中提取出的有效化合物。具有抗疟［１］、抗血吸虫、抗病毒与增强机体免疫等作用。文献报道青蒿素的检测方法...     

纳升电喷雾串联质谱鉴定吗啡依赖2个重要相关蛋白的N端乙酰化修饰

目的：用纳升电喷雾串联质谱（nanoESI—MS／MS）鉴定吗啡依赖相关蛋白。方法：采用吗啡递增给药法建立吗啡依赖模型，用纳洛酮催促后出现典型的戒断症状，以盐水组为对照，对长期接受吗啡处理和纳洛酮催促戒断这2种状态的大鼠纹状体进行了比较蛋白质组研究，确定了33个差异点。其中差异点150和209用电喷雾串联质谱进行了氨基酸序列分析。结果：电喷雾串联质谱分析表明差异点150和209为2个重要的吗啡依赖蛋白质：G蛋白β1亚基和电压依赖型阴离子通道蛋白1（VDAC-1），并且这2个蛋白质都发生了N端乙酰化修饰。结论：纳升电喷雾串联质谱分析是研究蛋白质N端乙酰化的好方法。N端乙酰化对蛋白质生物学功能有重要作用。这2个蛋白质N端乙酰化的生物学功能及其与吗啡依赖的关系值得深入研究。