硫酸软骨素对急性坏死性胰腺炎大鼠细胞连接的作用

在急性坏死性胰腺炎（ANP）发生的早期阶段氧自由基损伤细胞连接结构引起胰腺组织水肿。外源性硫酸软骨素（CS）通过抗氧化作用减轻ANP大鼠胰腺细胞损伤及胰腺水肿。本研究旨在探讨硫酸软骨素稳定ANP大鼠胰腺细胞间连接，减轻胰腺间质水肿的作用机制。     

党参皂苷L1对抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠星形胶质细胞损伤的作用

目的：观察扶正固本、益气类中药党参皂苷L1对缺氧缺糖再给氧所致大鼠大脑星形胶质细胞损伤是否有保护作用。 方法：实验于2004-08／2005-05在北京中医药大学东直门医院中医脑病研究室完成。①选用出生1d的Wistar大鼠40只，雌雄不拘。②分离大脑星形胶质细胞进行原代培养。加入含连二亚硫酸钠10mmol／L的无糖Earle液，置37℃体积分数0．05CO2孵箱中孵育90min进行缺氧缺糖处理。然后吸弃Earle液，加入不含连二亚硫酸钠的无血清DMEM培养液，继续置37℃体积分数0．05CO2孵箱中孵育90min进行再给氧处理。③将在相同或不同细胞培养板中的不同培养孔中细胞按随机抽签法分为6组（每10孔或8孔细胞为1组）;正常对照组（正常细胞培养），模型组（进行缺氧缺糖再给氧处理），尼莫地平组[在无糖Earle液和无血清DMEM培养液加入终浓度0．5mg／L尼莫地平[购自山东新华制药股份有限公司，生产批号：0211048，10mL（2mg）／支1，其余处理同模型组]，缺氧缺糖再给氧＋党参皂苷L1高、中、低浓度组[在无糖Earle液和无血清DMEM培养液分别加入质量浓度1．3，0．13和0.013mg／L党参皂苷L1（由北京中医药大学中医内科学教育部重点实验室采用高效液相色谱法制备法分离得到，含量为96．2％），其余处理同模型组]。测定乳酸脱氢酶漏出率时缺氧缺糖处理后直接测定，而不做再给氧处理。④四唑盐比色法测定细胞存活率，Hoechst33342和碘化丙啶原位双染法荧光显微镜观察细胞形态学变化和细胞坏死率、细胞凋亡率，比色法测定乳酸脱氢酶漏出率。 结果：①荧光显微镜观察细胞形态：尼莫地平组和党参皂苷L1各浓度组与模型组比较均可见红染的坏死细胞数量明显减少，尼莫地平、党参皂苷L1各浓度组与模型组比较凋亡细胞数量无明显变化。②星形胶质细胞存活率：模型组明显低于正常组、尼莫地平组和党参皂甙L1中、低浓度组（F=42．464，P〈0．01）。③细胞坏死率和乳酸脱氢酶漏出率：模型组明显高于其他5组（F=69．344，24．994，P〈0．01）。④细胞凋亡率：模型组明显高于正常组（F=3．311，P〈0．05），与尼莫地平组和党参皂苷L1各浓度组比较，差异不明显（P〉0．05）。 结论：中药党参皂苷L1对缺糖缺氧再给氧造成的星形胶质细胞损伤具有保护作用，可抑制细胞坏死，但对凋亡过程无保护作用。     

新型重组IL6D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白的表达优化及下游纯化

目的优化提高重组IL6D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白在原核细胞中的表达量,并建立有效的下游纯化路线。方法对IL6D24-PE40KDEL的受体菌、菌体生长状态及诱导表达时间等进行优化,经反复筛选确定了高效简捷的纯化路线:即将Q型强离子交换树脂与DEAE弱离子交换树脂相结合的两步纯化法。结果宿主工程菌HB101的优化表达条件为2%接种量,30℃培养3h,42℃再诱导4h,可使目标蛋白的表达量由最初的13.5%提高到23.8%;经12%SDS-PAGE蛋白电泳证实,特异性表达产物为包涵体形式,占包涵体蛋白的40%,分子量约为60kD,与所预测的IL6D24-PE40KDEL融合蛋白的分子量相吻合。两步纯化法可获得纯度>95%的IL6D24-PE40KDEL融合蛋白,纯化蛋白的回收率为8.7%,经Western-blot实验证明,它可同PEA多抗和IL6单抗特异性的结合。MTT试验检测证实,该融合蛋白能特异性的杀伤高表达IL6R的U266多发性骨髓瘤细胞,ID50为180ng/ml;而对IL6R的T淋巴白血病细胞CEM则无杀伤,ID50>1000ng/ml。结论获得了高表达重组IL6D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白的菌株并建立了高效简捷的下游纯化路线,融合蛋白能特异性的杀伤表达IL6R的多发性骨髓瘤细胞系U266。     

康复训练对脑缺血大鼠神经功能恢复和脑组织中白介素10含量变化的影响

目的 探讨康复训练对脑缺血大鼠神经功能恢复和脑组织中白介素-10（interleukin-10，IL—10）含量变化的影响。方法 采用改良Zea—Longa线栓法将36只SD大鼠制作成大脑中动脉栓塞（MCAO）动物模型。并于48h后将其随机分成康复组和对照组。康复组大鼠每天给予平衡、抓握、旋转、行走等运动功能训练。对照组则置于普通笼内饲养。期间可自由活动、进食。2组大鼠分别于造模后3，7及14d时进行神经功能评估，并断头取脑组织制成标本。采用酶联免疫吸附分析法（ELISA）测定脑组织中IL-10的水平。结果 康复组大鼠MCAO后7d时和14d时的神经功能评分均明显优于对照组；康复组大鼠MCAO后7d时和14d时脑组织中IL-10浓度亦均较对照组明显增高。结论 运动康复训练可刺激脑缺血大鼠脑组织中IL-10生成，这可能是运动康复训练促进脑缺血大鼠神经功能恢复的重要机制之一。     

新型重组IL6D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白的理化分析

为了对构建成功的新型重组IL6D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白的部分物化表征进行分析鉴定，采用Edman法、SDS-PAGE法、胰蛋白酶消化的MALDI—TOF—MS质谱法、蛋白印迹法和MTT法分别测定该融合蛋白的N-末端6个氨基酸、相对分子量、肽谱、抗原特异性以及靶向杀伤生物学活性。结果表明：所构建表达纯化的新型重组IL6D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白N末端6个氨基酸序列为Met—lie—Asp—Lys—Gin—Ile-，而IL-6缺失24个氨基酸后的原序列为Ile—Asp—Lys—Gin—Ile-，由于采用了大肠杆菌表达系统，因此在N末端第1位多出了1个Met，经12％SDS-PAGE蛋白电泳和凝胶成像系统分析计算，其相对分子量为58．75kD，与理论值56．9kD相比误差在5％之内。MALTI—TOF—MS质谱测定共获得10个与理论预测值相符的肽段，经瑞士生物信息研究所的EXPASY分子生物服务网站的Peptident数据库搜索证明，在分子量为57kD左右的范围内未检索到与上述务件相符的已知蛋白，证明本融合蛋白为全新蛋白，与预测的目的蛋白相符。WB实验显示IL6D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白能与IL-6及PEA抗体特异性结合。MTT生物活性测定表明，该融合蛋白对表达IL-6R的多发性骨髓瘤细胞系U266产生特异性杀伤，而对不表达IL6R的CEM淋巴细胞系无任何杀伤。结论：所研制成功的重组IL6D24-PE40KDL外毒素融合蛋白的确为一全新的具有靶向杀伤生物活性的蛋白质，与设计的完全一致，同时也证实了构建策略的可行性。     

HLA-A*110104新等位基因的克隆与序列分析

目的识别并确认中国人群HLA新等位基因。方法采用基因克隆、测序及生物信息学技术,分析HLA新等位基因与HLA已知基因序列的差异。建立HLA新等位基因序列特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)分型方法,并对1200名HLA-A*11阳性的造血干细胞移植无关供者(包含100名HLA-A*11纯合子个体)进行HLA新等位基因筛选和频率分析。结果HLA新基因与A*110101的差异只是在外显子3区域中279位碱基发生C→T突变,导致93位密码子由CAC变为CAT,但氨基酸未发生变化,并最终被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA-A*110104。该新基因出现在2个无关家系中,分别具有2～3代遗传史。在1200名无关供者中未发现其他带有新基因的个体。其基因频率为0．000 83。结论HLA-A*110104新基因具有稳定的遗传性和一定的普遍性,对无关供者的选择和人类学、遗传学等的研究具有一定意义。     

我国汉族人群HLAⅠ类经典基因单倍型及连锁分析

本研究旨在探讨我国汉族人群HLAI类经典基因座位HIA—A、HLA—B、HIA—Cw位点的基因频率，单倍型频率及连锁特征。采用序列特异性引物（SSP）PCR低分辨基因分型技术对1014例随机选择的无关个体的经典HIAⅠ类位点进行基因分型，并对其相关遗传学参数进行统计学分析。结果发现汉族人群中较为常见的HIA—Ⅰ类基因是A＊02（0．33）、A＊11（0．24）、B＊15（0．14）、B＊13（0．13）、Cw＊03（0．25）、Cw＊07（0．18）；较为常见的单倍型是A＊02-B＊46（0．071）、A＊11—B＊15（0．051）、A＊02-Cw＊01（0．084）、A＊11—Cw＊03（0．079）、B＊46-Cw＊01（0．095）和B＊13-Cw＊03（0．071）等，其中A＊02-B＊46、A＊30-B＊13、A＊30-Cw＊06、A＊02-Cw＊01、B＊46-Cw＊01和B＊58-Cw＊03等单倍型呈现出显著的连锁不平衡；而A＊02-B＊15、A＊02-B＊40、A＊24-Cw＊03、A＊02-Cw＊03、A＊31—Cw＊03等连锁不平衡性相对较低，其中A＊24-Cw＊03在重组事件中较常出现。此外，A＊02-B＊46-Cw＊01（0．075）、A＊30-B＊13-Cw＊06（0．046）、A＊11—B＊13-Cw＊03（0．045）、A＊33-B＊58-Cw＊03（0．044）、A＊11—B＊15-Cw＊08（0．027）、A＊02-B＊38-Cw＊07（0．023）、A＊11—B＊40-Cw＊07（0．022）等为常见扩展单倍型。结论：本研究较系统地分析了我国汉族人群的HIA遗传学分布特点，为群体进化、临床移植及疾病相关研究等提供了有价值的遗传学资料。     

针刺治疗原发性高血压病1例报告

正高血压病是常见的心血管病之一,流行病学调查显示,我国高血压病的患病率高,而知晓率、治疗率和控制率偏低[1],凸显了高血压防治的严峻形势。治疗高血压的目的是通过降压使患者血压维持在正常或接近正常水平,最大限度降低急性脑血管事件的发生及靶器官损害,提高患者生活质量。笔者临床上采用针刺疗法治疗原发性高血压病典型病例1例,疗效较好,现介绍如下。1病案资料患者,男,64岁。主因"间歇性头晕、失眠半年,加重半     

玻璃酸钠联合复方倍他米松注射液治疗膝关节骨性关节炎疗效观察

目的：观察膝关节骨性关节炎患者实施玻璃酸钠联合复方倍他米松注射液治疗的临床效果。方法收集我院肾内科2014年5月至2016年5月收治的50例膝关节骨性关节炎患者,随机数表法分为观察组与对照组各25例,观察组实施玻璃酸钠联合复方倍他米松注射液关节腔内注射治疗,对照组则单纯玻璃酸钠关节腔内注射治疗。治疗结束后评价两组患者的疼痛程度、膝关节功能及临床疗效。结果经疗效判定,观察组与对照组的治疗总有效率分别为92.0%和68.0%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗结束后对两组患者进行膝关节功能HSS评分,观察组的总分为(83.32±10.13)分,明显高于对照组的(68.68±8.35)分,差异有统计学意义(P<0.05);对照组治疗后7 d的疼痛VAS评分为(3.3±0.4)分,明显高于观察组的（2.0±0.5)分,差异有统计学意义(P<0.05)。结论玻璃酸钠和复方倍他米松注射液联合关节腔内注射治疗膝关节骨性关节炎,较之玻璃酸钠单独使用可获得更好的治疗效果,值得临床推广应用。     

晚期宫颈癌经动脉介入治疗的临床护理研究

目的：研究分析晚期宫颈癌经动脉介入治疗的临床护理路径。预防不良反应和并发症的发生。方法：按Selinger法穿刺股动脉，选用研制的5F—Cobra导管行药物灌注治疗。结果：16例晚期宫颈癌经动脉介入治疗，患者阴道分泌物逐渐减少，宫颈菜花样组织呈萎缩状，接触性出血明显减轻，宫旁组织变软，腹水消失，治疗效果显著。结论：经动脉介入治疗和精心的临床护理，有利于延长宫颈癌患者生存期和生活质量，值得在临床上推广应用。