脑创伤早期血清差异蛋白筛选与诊断

目的 应用表面加强激光解吸离子化飞行时间质谱(surface enhanced laser desorptionionization time-of-fight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术筛选重型颅脑创伤(severe traumatic brain injury,sTBI)患者早期血清差异表达蛋白,初步建立sTBI患者早期血清蛋白诊断指纹图谱.方法 获取临床收住院早期未接受药物干预治疗的重型颅脑创伤患者(GCS 3～8分)与健康体检者血清样本,根据从创伤到入住院时间间隔将病人血清分为≤1h、1-3 h和＞3-8 h组,分别混合各组血清样本取消个体差异,利用弱阳离子芯片CM10经质谱分析血清中差异表达蛋白,根据检测结果初步分析建立sTBI病人早期血清蛋白诊断指纹图谱.结果 样品血清中共获得71个有效蛋白质峰,有7个峰与对照组比较有差异,其中m/z 4210、m/z 7116和m/z 7320在3组病人中均显著升高(P＜0.05);m/z 4977和m/z 8719在3组中均显著降低(P＜0.05);m/z 4679的升高出现在1-3 h和＞3-8 h组;m/z 9431的升高只出现＞3-8h 组.结论 应用SELDI-TOF-MS技术可寻找到多种血清差异蛋白表达,这些蛋白可能参与sTBI患者早期分子病理事件,它们的发现将会为临床药物筛选和(或)新药物开发提供重要参考.     

纳米分子PAMAM作为miR药物载体靶向胃腺癌的功能研究

【摘要】目的检测纳米级生物材料聚酰胺-胺（PAMAM）作为微小RNA（miR）基因投递载体对胃腺癌细胞的功能作用,为研发高效小分子靶向投递药物奠定基础。方法透析法制备叶酸（FA）/PAMAM络合物;分别以FA/PAMAM络合物和脂质体为载体转染miR-7至胃腺癌细胞株SGC-7901,荧光显微镜观察络合物转染效率,实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）方法检测miR-7水平;细胞免疫荧光法检测miR-7靶基因表皮生长因子受体（EGFR）、蛋白激酶B（PKB）和细胞增殖活性抗原（PCNA）的表达;Transwell体系检测瘤细胞迁移能力。结果与脂质体相比较,FA/PAMAM络合物可显著提高SGC-7901细胞miR-7表达水平,降低瘤细胞EGFR、PKB和PCNA的水平,降低瘤细胞迁移百分率（均P＜0.05）。结论PAMAM可以作为小分子药物miR的靶向投递载体,有望进一步推动新的基因靶向药物研发。     

siRNA沉默p75神经营养因子受体逆转胶质瘤恶性表型

目的 利用小干扰RNA(siRNA)技术沉默与胶质瘤细胞凋亡和侵袭密切相关的p75神经营养因子受体(p75NTR)基因,观察其逆转胶质瘤恶性表型的治疗效果.方法 设计靶向p75NTR基因的siRNA片段,脂质体转染人U251胶质瘤细胞系,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学方法 检测p75NTR的mRNA和蛋白表达;Transwell细胞侵袭实验检测U251细胞的侵袭力;软琼脂集落形成实验检测细胞集落形成能力;建立裸鼠颅内U251胶质瘤荷瘤模型,原位重复注射siRNA-p75NTR/脂质体复合物3次,MRI检测颅内瘤体积,免疫细胞化学SP法检测p75NTR、神经生长因子(NGF)和细胞周期蛋白(cyclin)D2表达,用TUNEL法做移植瘤细胞原位细胞凋亡检测.结果 转染siRNA基因片段的U251细胞p75NTR mRNA和蛋白质表达水平显著下降(P<0.05),细胞侵袭能力及软琼脂集落形成能力均显著降低(P<0.05);体内实验显示p75NTR的表达程度与NGF的表达呈正相关,与cyclin D2表达及原位细胞凋亡数量呈负相关,MRI示瘤体积增长缓慢,边界轮廓清晰,动物生存期明显延长(P<0.05).结论 靶向p75NTR的siRNA技术可有效降低胶质瘤细胞的侵袭及增殖能力,诱导肿瘤细胞凋亡.     

ts-SV40LT抗原转基因干细胞增殖活性的温度调控机制分析

Objective To study the mechanism of temperature control proliferation of the stem cells modified by ts - SV40LT gene for establishing a basement on stem cells transplantation into injured brain area during hypothermia treatment. Methods After transfecting plasmid containing temperature - sensitive simian virus 40 large T - antigen (ts - SV40LT) into umbilical cord mesenchymal stem cells (UCMSCs), PCR method was used to detect gene integration. Then we cultured these UCMSCs modified by ts - SV40LT in 33℃ and 37℃ incubators respectively. Immumofluorescence was used to detect proliferating cell nuclear antigen (PCNA)activity, telomerase activation analysis by PCR- ELISA telomerase detect kit, and cell cycle by flow cytometry.Then cell cycle regulating proteins, including Cyclin D1, CyclinE, CDK2, CDK4, CDK6, P16 and P21, were detected by westerm blot. The expression of nestin, neurone specific enolase (NSE) and glial fibrillary acidic protein(GFAP) were detected by immunofluorescence method. Results The ts - SV40LT gene was integrated into UCMSCs successfully. When cultured at 33℃ incubator, the new cell line displayed high proliferation activity, as well as its telomerase activation, highly expressed Cyclin D1, CyclinE, CDK2, CDK4 and CDK6, and lowly expressed P16 and P21, meanwhile, highly nestin, lowly NSE and GFAP. But when cultured at 37℃ incubator, the cell line showed a completely converse profile. Conclusion The proliferation of stem cells can be regulated by temperature through effective ts -SV40LT gene transfection, and that supports the clinical application of stem cells transplantation into injured brain area during hypothermia treatment.     

微乳头型肺腺癌类器官的构建及其靶向药物的筛选

目的 建立微乳头型肺腺癌类器官的培养方法,并开展靶向药物的筛选。方法 自确诊为微乳头型肺腺癌患者手术组织样本中提取和培养原代肺癌类器官,动态观察和记录肺癌类器官生长情况;苏木精-伊红(HE)染色法及免疫组化染色法比较肺癌类器官与亲本组织间肿瘤细胞形态及蛋白表达特征;实时荧光定量聚核酶链反应检测肺癌亲本组织和类器官中基因突变情况;基于基因检测结果挑选靶向药物并验证其体外抑瘤效果。结果 成功从微乳头型肺腺癌组织中培养出类球形肿瘤类器官,可传代至少3代。HE染色结果可见类器官中肿瘤细胞形态与亲本组织细胞基本一致;免疫组化染色结果显示肺癌类器官与亲本组织中各基因的蛋白表达水平大致相同;基因突变分析结果显示,肺癌亲本组织和类器官的突变基因结果一致,均体现为原癌基因酪氨酸蛋白激酶受体Ret(RET)融合突变。基于肺癌类器官的靶向药物筛选结果显示,凡德他尼的体外抑瘤效果最佳。结论 基于微乳头型肺腺癌类器官的药筛实验可在短时间内筛选出高效靶向药物,可使微乳头型肺腺癌患者从中获益。     

干细胞在胶质瘤治疗中的研究进展

浸润于正常脑实质的散在瘤细胞是胶质瘤术后复发的主要原因。干细胞具备良好的肿瘤追踪特性和基因载体特性。将目的基因转入干细胞,利用干细胞特异的肿瘤追踪能力可有效抑制或杀死浸润瘤细胞。目前这项研究主要集中于干细胞的趋瘤生长机制、作为目的基因载体治疗胶质瘤的功效及其安全性等几个方面。     

白藜芦醇降低缺氧诱导因子1α蛋白SUMO化抑制皮肤鳞状细胞癌新生血管形成

目的从蛋白质泛素/类泛素化修饰平衡角度探讨白藜芦醇抑制皮肤鳞状细胞癌新生血管形成的内在机制。方法以人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株为研究对象, 分别给予培养基中加入50 μmol/L和100 μmol/L白藜芦醇处理对数生长期A431细胞作为实验组, 以不加白藜芦醇培养基处理为对照组。按照上述实验分组, 培养48 h采用3-(4, 5-二甲基噻唑-2)-2, 5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)实验检测各组细胞增殖活性;采用血管模拟形成实验检测白藜芦醇处理12 h对A431细胞血管拟态形成能力的影响;采用Western印迹检测白藜芦醇处理48 h各组细胞泛素(ubiquitin)、小泛素相关修饰蛋白1(SUMO1)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)相对表达水平。将24只8周龄BALB/c雄性去胸腺小鼠随机均分3组, 于腹股沟皮下接种A431细胞, 治疗组予1 mg/kg或2 mg/kg白藜芦醇腹腔注射给药, 对照组注射相同体积的生理NaCl溶液, 每3天注射1次, 第21天处死小鼠, 解剖肿瘤称重;采用免疫组化检测各组肿瘤组织中CD31的表达。多组间比较采用...     

颅内多发脑室外室管膜囊肿一例报告并文献复习

室管膜囊肿又称神经上皮囊肿,多发生在脑室系统,以第三脑室居多,发生在脑室外如脑实质内及蛛网膜下腔者少见,国内有少量报道[1],但一般为单发.我们曾经诊治1例颅内多发脑室外室管膜囊肿患者,且病情反复发作,治疗困难,现报告如下,并结合文献复习进行讨论.     

miR⁃209下调MEK/ERK信号通路抑制胶质瘤U87细胞增殖、增强放疗敏感性的研究

目的 探讨miR?209下调MEK/ERK信号通路对胶质瘤U87细胞增殖、增强放疗敏感性的影响.方法 采用Real Time PCR的方法检测胶质瘤U87细胞放疗前后miR?209、MEK、ERK mRNA的表达;通过转染技术使U87细胞内过表达miR?209,Western blot、Real time PCR检测细...     

四逆汤在肿瘤治疗中的应用进展

近10年来的实验和临床研究表明,四逆汤作为温里剂的代表方,具有一定的抗肿瘤作用。其作用机制可能与抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,提高机体免疫力有关;同时能够预防肿瘤放化疗引起的副作用和并发症的发生。