人参二醇皂苷对失血性休克-内毒素二次打击大鼠肺组织TLR4与IL-18表达的影响

目的观察失血性休克复合内毒素二次打击所致急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织Toll样受体4(TLR4)及白介素-18(IL-18)表达的变化,探讨TLR4与IL-18在ALI中的作用以及人参二醇皂苷(PDS)和地塞米松(Dex)对其影响。方法利用失血性休克对Wistar大鼠制造第一次打击,之后给予地塞米松(Dex)或人参二醇皂苷(PDS)治疗,再腹腔注入脂多糖(LPS)作为第二次打击。二次打击6h后处死动物,取肺组织,通过RT-PCR检测TLR4和IL-18 mRNA,通过Western blot检测IL-18蛋白的表达。结果与假手术对照组相比,二次打击可使肺组织TLR4 mRNA、IL-18 mR-NA及IL-18蛋白表达水平明显升高(均P<0.01),而Dex或PDS预治疗则能显著降低其含量(P<0.05)。结论失血性休克-内毒素二次打击所致急性肺损伤可能通过增加TLR4功能从而使其介导的信号转导作用加强,导致IL-18等炎症介质的分泌增加引起肺损伤,而PDS通过抑制TLR4介导的信号转导通路,减少IL-18等炎性介质的释放从而减轻肺损伤。     

Survivin-siRNA对裸鼠视网膜母细胞瘤移植瘤的抑制研究

目的构建Survivin-siRNA真核重组质粒,转染裸鼠视网膜母细胞瘤玻璃体腔移植瘤中,探讨其对肿瘤组织中Survivin表达的抑制作用及诱导凋亡情况。方法构建针对Survivin mRNA特异的靶序列的Survivin-siRNA以及对照Scramble-siRNA。将Y79细胞种植至21只裸鼠玻璃体腔内,9d后随机平均分为mock对照组(注射K-PBS);Scramble对照组(注射带有非同源的Scramble-siRNA重组质粒);Survivin实验组(注射特异性Survivin-siRNA重组质粒)。10d后摘除肿瘤组织,利用半定量RT-PCR检测肿瘤组织Survivin mRNA;采用Western blot方法分析Survivin蛋白;HE染色、Survivin及Ki67免疫组化染色;TUNEL法检测肿瘤组织凋亡。结果真核重组质粒及视网膜母细胞瘤裸鼠玻璃体腔移植瘤模型均构建成功。半定量RT-PCR显示Survivin-siRNA在mRNA水平上抑制了Survivin基因转录(P0.01),Scramble组与mock组无差别(P0.05)。Western blot显示与mock组和Scramble组相比,实验组细胞的Survivin蛋白表达显著降低(P0.01)。HE染色普通光镜下观察,实验组与两对照组相比,在瘤组织内可见到较多死亡细胞;实验组移植瘤组织中Survivin蛋白表达与mock组和scramble组相比明显下降;实验组Ki67的表达较对照组下降明显,增殖指数明显下降(P0.01)。TUNEL法显示实验组肿瘤组织内可见大量细胞核染为棕黄色的凋亡细胞,对照组可见少许凋亡细胞,实验组凋亡指数明显高于对照组(P0.01)。结论成功构建的Survivin-siRNA重组质粒可以抑制裸鼠视网膜母细胞瘤移植瘤中Survivin基因转录和蛋白表达,诱导了肿瘤细胞凋亡。     

人参二醇皂苷对内毒素休克大鼠肺CD14和NF-KB表达的影响

目的 :探讨人参二醇皂苷 (PDS)对内毒素休克肺损伤保护作用的分子机制。方法 :Wistar大鼠随机分为实验对照组 (CTRG)、内毒素 (L PS)休克组 (L PSG)、人参二醇皂苷组 (PDSG)和地塞米松组 (DEXG)。以内毒素 (4mg· kg- 1 )复制内毒素休克模型 ,平均动脉压降至基础血压的 2 / 3为休克状态。取肺组织光镜下进行形态学观察 ,提取肺总 RNA和蛋白 ,分别以 RT- PCR检测 CD14和 IκBα m RNA表达 ,应用 Western blotting检测 CD14和 NF- κB的蛋白表达。结果 :1肺组织的病理学变化 ,L PSG可见弥漫性间质炎性改变 ,肺泡壁明显增宽 ,肺泡腔含气量明显减少 ,很多肺泡腔内有渗出液。 PDSG和 DEXG的病变显著轻于 L PSG;2肺组织CD14 m RNA和蛋白质表达丰度以 L PSG最高 ,PDSG与 DEXG均明显低于 L PSG (P<0 .0 5 ) ,而与 CTRG相近(P>0 .0 5 )。 IκBα m RNA表达水平 ,L PSG明显低于 CTRG (P<0 .0 1) ,PDSG与 DEXG明显高于 L PSG(P<0 .0 5和 P<0 .0 1) ,而与 CTRG相近 (P>0 .0 5 )。 L PSG的 NF- κB P6 5蛋白质表达水平明显高于 CTRG,PDSG与 DEXG的 NF- κB P6 5蛋白质表达水平也低于 L PSG(P<0 .0 5 ) ,接近 CTRG(P>0 .0 5 )。结论 :PDS与DEX对内毒素休克肺损伤有类似的保护作用 ,抑制 L PS介导的 CD14 - NF- κB信号     

人参二醇组皂苷对内毒素休克大鼠脑皮质ⅠκBα mRNA表达的影响

目的 :通过观察内毒素休克大鼠脑皮质中 L PO含量、 SOD活力和 κBα m RNA表达及人参二醇组皂苷 (PDS)对其的影响 ,探讨内毒素引起脑组织损伤的分子机制。方法 :Wistar大鼠随机分为对照组、内毒素休克 (L PS)组、地塞米松 (L PS+Dex)组和人参二醇组皂苷 (L PS+PDS)组。大鼠静脉注射内毒素 (4mg· kg- 1 )4 h后测定脑组织中 L PO含量、 SOD活力及 κBα m RNA的表达。结果 :L PS+Dex组和 L PS+PDS组 L PO显著低于 L PS组 (P<0 .0 5 ) ,SOD活力明显高于 L PS组 (P<0 .0 5 )。 L PS+Dex组和 L PS+PDS组 κBαm RNA表达高于 L PS组 (P<0 .0 5 )。结论 :PDS能够上调脑组织中 κBα的表达 ,减轻内毒素引起的组织过氧化反应 ,对中枢神经系统具有保护作用 (P<0 .0 5 )。     

人参二醇皂苷对"失血-内毒素双打击"大鼠肝脏保护作用与机制的研究

目的：探讨人参二醇皂苷对失血-内毒素打击大鼠肝脏LPS介导的信号转导通路的影响，为人参二醇皂苷临床治疗的应用奠定基础。方法：Wistar大鼠（230-250g），随机分为假手术对照组（SCG）；失血-内毒素双打击组，（HIG）；失血-内毒素双打击地塞米松预治疗组（HLDG）；失血-内毒素双打击人参二醇皂苷预治疗组（HLPG）。①应用“失血-回输-内毒素入血”三种因素相继作用机体的方法，复制大鼠“双打击”模型。大鼠失血性休克．1h后，将放出的1／2m液加等容积的生理盐水缓慢回输，再经腹腔注射LPS（2mg／kg），复制二次打击模型，观察6h后处死动物，HLDG和HLPG于睃腔注射IPS前10min腹腔注射地塞米松（2mg／kg）和人参二醇皂苷（45mg／kg）。②取肝脏组织，10％中性福尔马林固定，脱水、浸蜡，常规包埋切片，HE染色，光镜观察。③取肝脏组织，提取mRNA和核蛋白，用RT-PCR和Westein blotting等方法检测肝脏组织CD14，IκBα，NF-κB，TNFα，IL-18的表达。     

前列腺癌PC-3M细胞hmSD活性与细胞凋亡相关性的实验研究

目的：研究前列腺癌PC-3M细胞株hmSD的活性与细胞凋亡的相关性。方法： 应用丁酸钠诱导前列腺癌PC-3M细胞发生凋亡，吖啶橙/溴化乙锭染色检测细胞凋亡率；收集丁酸钠作用后的PC-3M细胞，匀浆后离心取上清，与底物共同孵育，以硫代巴比妥酸（TBA）显色反应检测所生成的唾液酸，计算唾液酸酶活性；将细胞凋亡率与hmSD活性进行相关性分析。结果：丁酸钠诱导PC-3M细胞凋亡的同时显著下调hmSD的活性，凋亡率与hmSD活性呈负相关。结论：hmSD活性变化与前列腺癌细胞凋亡呈相关性。     

Survivin-siRNA对前列腺癌PC-3M细胞增殖的抑制作用

目的：探讨survivin-siRNA对前列腺癌细胞株PC-3M的增殖抑制作用。 方法:构建两个针对survivin siRNA表达载体，与脂质体和空质粒两个对照组一起分别转染前列腺癌PC-3M细胞后，利用半定量RT-PCR和Western blotting分别检测细胞survivin mRNA及蛋白表达水平，MTT法测定细胞的增殖能力，流式细胞术检测细胞周期和凋亡。 结果:转染72 h后，两个实验组细胞的survivin mRNA水平是脂质体组的48%±6% (n=3)和30%±5%(n=3)，蛋白表达水平是脂质体组的38%±4%（n=3）和36%±4%（n=3）。MTT检测实验组细胞的生长速度分别是脂质体组的44.20%±2.08%(n=3)和39.20%±1.93%（n=3），流式细胞术发现实验组G1期细胞比例明显高于两个对照组，而G2期和S期细胞比例减少，细胞出现凋亡。 结论:利用survivin-siRNA可明显抑制前列腺癌PC-3M细胞的增殖，细胞受阻于G1期, 诱导细胞凋亡，为进一步进行动物体内研究奠定了基础。     

人参二醇皂苷对内毒素休克大鼠肝脏IL-18、Fas基因表达的影响

目的：研究人参二醇皂苷（PDS）对内毒素休克大鼠肝脏IL-18、Fas表达的影响。方法：Wistar大鼠随机分为实验对照组（CTRG）、内毒素休克组（麟）、地塞米松组（DEXG）和人参二醇皂苷组（PDSG）。以内毒素（4mg／kg）复制内毒素休克模型,平均动脉压降至基础血压的2／3为休克状态。取肝脏组织提取总RNA和蛋白以RT-PCR检测IL-18、FasmRNA表达,应用Western blotting检测1L-18的蛋白表达。结果：（1）肝脏组织IL-18mRNA和蛋白表达丰度以LIXSG最高,与CTRG、DEXG和PDSG相比差异有显著性（P〈0．01）;DEXG、PDSGIL-18mRNA和蛋白表达丰度高于CTRG（P〈0．01）;PDSGIL-18mRNA和蛋白表达水平与DEXG接近（P〉0．05）。（2）肝脏组织FasmRNA表达丰度以LPSG最高,与CTRG、DEXG和PDSG相比差异有显著性（P〈0．01）;DEXG、PDSG FasmRNA表达丰度仍高于CTRG（P〈0．01）;PDSG FasmRNA表达水平与DEXG接近（P〉0．05）。结论：PDS与DEX预治疗对内毒素休克大鼠肝脏IL-18、FasmRNA和IL-18蛋白过度表达产生了一定的抑制作用,在某种程度上抑制了IL-18通过Fas／FasL途径介导的肝细胞凋亡,削弱了内毒素休克对肝脏的损伤,保护了肝脏组织。     

绿色荧光蛋白和大鼠睾丸AQP7融合蛋白表达载体构建及其表达

目的 :构建真核表达的pEGFP C1与大鼠睾丸AQP7的融合蛋白表达载体。　方法 :RT PCR的方法扩增Wistar大鼠睾丸AQP7cDNA编码区全长序列 ,测序鉴定 ,将AQP7cDNA融合于pEGFP C1基因的下游。以脂质体转染方法将pEGFP C1 AQP7融合蛋白转入中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞 ,应用免疫细胞化学方法和Western印迹技术对转染细胞株进行鉴定。　结果 :①Wistar大鼠AQP7cDNA序列登录到GenBank ,登录号 :AY15 7737;②通过鉴定证明CHO细胞已经稳定表达了pEGFP C1 AQP7融合蛋白 ,其相对分子质量为 5 30 0 0 ;③绿色荧光蛋白作为标记物观察到AQP7在CHO细胞的定位。　结论 :稳定表达pEGFP C1 AQP7融合蛋白的CHO细胞株的建立 ,为AQP7在细胞内定位与功能研究奠定了基础。     

青春型乳腺肿块58例分析

目的提高对青春型乳腺肿块的认识。方法对58例青春型乳腺肿块患者进行临床治疗及随访。结果该组病人经治疗后乳房外形、功能良好,无一例复发。结论纤维腺瘤占青春型乳腺肿块的绝大多数,应尽早手术,效果满意。