丝裂霉素诱发Jurkat细胞DNA损伤修复机制中blm基因的作用研究

本研究通过丝裂霉素(mitomycin C,MMC)诱发Jurkat细胞凋亡,了解Jurkat细胞DNA损伤后blm mRNA水平变化与细胞周期和凋亡之间关系及意义。用流式细胞术检测凋亡率和细胞周期变化;用半定量RT-PCR检测blm mRNA的表达水平。结果表明:0.4 g/L MMC分别诱导Jurkat细胞和正常成纤维细胞后,Jurkat细胞于24小时凋亡率为(11.42±0.013)%,此时(66.08±1.60)%的Jurkat细胞受阻于G2/M期;48小时时Jurkat细胞凋亡率反而下降(8.08±0.27)%,停滞于G2/M期Jurkat细胞下降为(33.96±1.05)%;正常成纤维细胞诱导后24小时与48小时凋亡率变化不明显,G2/M期细胞、G0-G1、S期细胞在24小时和48小时时变化不显著。2组细胞凋亡率和各期细胞所占比例的变化幅度比较显示,其差异显著有统计学意义(p0.01)。Jurkat细胞blm mRNA表达水平不仅明显高于正常成纤维细胞(p0.01),诱导48小时后blm mRNA表达水平明显较诱导24小时后增高,2组细胞间blm mRNA表达水平变化幅度比较差异显著(p0.01)。结论:blm基因在MMC诱发Jurkat细胞DNA损伤修复过程中发挥重要作用,其mRNA表达异常可能是导致白血病耐药的原因之一。     

Attenuation of GVHD for allo-bone marrow transplantation recipient by fasL-fas pathway in an H-2 haplotype disparate mouse combination

Fas (CD95 ) ,atypeⅠtransmembraneproteinoftumornecrosisfactor (TNF)andtumorgrowthfactor (TGF )receptorfamily ,isexpressedonavari etyofhumanorgansandsometumorcellsbesidesac tivatedmatureTcellsandlymphocytestransducedbyhumanTlymphocytevirus (HTLV ) ,humanim…     

Cloning and Expression of the cDNA of a Murine Soluble Fas

Fas/Apo- 1 ( CD95 ) ,a cell surface moleculeexpressed in a variety of cells,can induce cellapop-tosis and plays some important role.The Fas re-ceptor has two isoforms:membrane form and solu-ble form.The membrane form,mainly expressedin activated lymphocytes,hepatocytes,endothelialcells and virus infected cells etc.,plays an impor-tant role in the regulation of the homeostasis of theimmune system and cells.Butnormally the solubleform Fas is excreted into the plasma and broughtinto full play i…     

反义MLL-AF9基因对THP-1细胞增生和凋亡的影响

 目的　研究MLL-AF9融合基因反义寡核苷酸（ASODN）对人类急性单核细胞白血病细胞THP-1增生和凋亡的影响。方法　选择THP-1细胞特有的MLL-AF9融合基因为靶基因,设计并合成靶向MLL-AF9的ASODN及正义核苷酸（SODN）,应用脂质体转染方法,将其转入细胞,RT-PCR法比较转染前后MLL-AF9 mRNA表达水平的变化,Western blotting法鉴定MLL-AF9蛋白表达量,改良MTT法检测细胞增生抑制率,并通过Hoechst33258染色观察ASODN作用于THP-1后细胞出现凋亡形态特征,流式细胞仪检测细胞凋亡水平。结果　与空白对照组、脂质体对照组和SODN组相比,ASODN组细胞中MLL-AF9表达明显降低（P <0.01）,相对应MLL-AF9蛋白水平亦明显下降,同时细胞生长受到抑制,被诱导凋亡产生凋亡小体。ASODN转染THP-1细胞0、24和48 h后,ASODN组凋亡率分别为（10.4±3.0）%、（22.8±2.5）%和（24.7±3.1）%,与对照组相比凋亡率显著增加（P <0.01）且呈时间依赖性。结论　利用ASODN靶向沉默MLL-AF9融合基因的表达能有效抑制THP-1细胞增生并促进其凋亡。     

转染sFas基因骨髓移植阻抑白血病小鼠肿瘤细胞的免疫逃逸

目的探讨骨髓细胞转染小鼠可溶性Fas(sFas)基因后移植能否阻抑白血病小鼠肿瘤细胞的免疫逃逸。方法用AdEasy系统构建携带sFas和EGFP的腺病毒质粒,先按病毒/细胞的感染倍数(MOI)为100的比例分别直接感染呈对数生长期的EL4细胞,培养24h后,采用氚标记胸腺嘧啶掺入法检测其诱导YAC-1细胞凋亡的情况。然后同法以携带sFas和EGFP的腺病毒质粒分别转染雄性C57BL/6小鼠骨髓细胞,每只雌性C57BL/6小鼠(白血病模型)通过尾静脉接受5×106~10×106个转染sFas或EGFP的雄性C57BL/6小鼠骨髓单个核细胞移植。移植后观察受者的造血重建情况、白血病/淋巴瘤的发生及生存率。结果体外实验中,转染EGFP的EL4细胞诱导YAC-1细胞凋亡的情况与非转染的EL4细胞相似,转染sFas基因后,YAC-1细胞的凋亡率明显下降(P<0.01)。接受转染sFas基因的骨髓移植者,移植后8周受者全部存活(16/16),骨髓中未发现EL4细胞,造血功能恢复良好,能检测到Y染色体;接受转染EGFP的骨髓移植者,移植后8周仅1只小鼠(1/16)存活(P<0.01),在死亡和存活的小鼠中均存在EL4细胞,其造血重建情况较转sFas者差。结论转染sFas基因的造血细胞移植可以在体内阻抑肿瘤细胞的免疫逃逸,同时不影响造血重建功能。     

血管内皮细胞生长因子对小鼠CFU-GM、CFU-E、CFU-S生成的影响

目的 :研究血管内皮细胞生长因子 (VEGF)对小鼠骨髓单个核细胞 (MNC)粒 巨噬细胞系集落形成单位 (CFU GM)、红系集落形成单位 (CFU E)、脾集落形成单位 (CFU S)生成数量的影响。方法 :一部分小鼠骨髓MNC样本在加入或不加入外源性hVEGF的体系中预先培养 2 4h ,分别进行体外造血细胞集落培养和小鼠体内CFU S试验 ,计数CFU GM、CFU E、CFU S集落生成数目 ;另外对剩余骨髓样本不经处理直接在含rhVEGF的体系中进行体外CFU GM、CFU E集落培养 ,观察集落培养体系中添加VEGF对集落生成的影响。结果 :CFU GM、CFU E、CFU S数目分别为 33.2 1± 2 .84、72 .0 0± 4 .5 5和 12 .2 0± 1.32 ,显著高于未处理组 (分别为19.6 0± 2 .10、38.86± 2 .77和 6 .10± 1.5 2 ) (P <0 .0 5 ) ,但均低于正常对照组 (分别为 5 1.97± 2 .4 5、16 4 .2 0± 5 .70和 19.5 0± 2 .4 6 )。外源性hVEGF的存在使VEGF组CFU GM、CFU E产率较正常对照组显著提高 (73.12±3.80∶5 1.39± 2 .6 0 ,198.98± 4 .92∶16 4 .4 0± 5 .32 ) (P <0 .0 5 )。结论 :VEGF不仅对造血细胞集落生成能力具有保护作用 ,还具有促进造血细胞集落生成的作用。     

CD80-IgG融合蛋白的表达、纯化与鉴定

目的构建CD80-IgG融合基因表达载体，表达并纯化该融合蛋白，初步探讨其增强抗肿瘤免疫的作用。方法将小鼠CD80分子胞外段和IgG Fc段cDNA串联起来，定向克隆入质粒pcDNA3．0中，使其在哺乳动物细胞中表达。采用免疫亲和层析法纯化，免疫印迹和斑点ELISA鉴定表达的融合蛋白，流式细胞术、MTT法检测其增强白血病细胞CD80分子表达及促进T细胞增殖的功能。结果DNA测序证明两段基因正确插入质粒载体；亲和层析纯化得到浓度为0．1mg／ml，纯度为95％的蛋白质溶液；免疫印迹、ELISA表明该蛋白质即为CD80-IgG融合蛋白；流式细胞术证明其能够提高白血病细胞表面CD80分子的表达。结论成功构建融合基因表达载体，表达并纯化出融合蛋白，该蛋白可增强CD80分子的表达。     

急性单核细胞白血病M5a和M5b的细胞生物学和临床行为比较分析

目的比较急性单核细胞白血病M5a和M5b细胞遗传学和免疫表型差异,并了解其与临床行为之间的相互关系。方法采用骨髓直接法和24h短期培养法制备染色体标本，用G显带技术对58例成人初发急性单核细胞白血病进行核型分析，并用免疫荧光标记法及流式细胞术进行免疫表型检测，同时对其临床资料进行回顾性分析。结果58例患者中正常核型28例，异常核型30例，其中，正常核型在M5b出现率高于M5a（P〈0．01）。异常核型中11q23异常和＋8染色体在M5a中均较M5b常见（P〈0．01）；CD68和CD11b在M5a的表达高于M5b（P〈0．01）；不同患者急性单核白血病细胞的免疫表型呈现一定的异质性，但急性单核细胞白血病M5a、M5b两亚型的临床行为未见显著差异。结论M5a和M5b存在各自较独特的细胞生物学特点。     

8号染色体三体对急性粒、单核细胞白血病细胞生物学和临床特征的影响

为了探讨8号染色体三体(8三体)对急性粒单、单核细胞白血病(M4、M5)细胞生物学及临床特征的影响,应用G显带或R显带技术及流式细胞仪对56例M4、M5患者进行核型及免疫表型检测,并对其临床特征进行回顾性分析。结果表明:56例患者中34例(60.7%)正常核型;10例(17.9%)8三体异常核型,其中3例(5.4%)为单纯8三体核型,余下12例(21.4%)为其他异常核型(不包括8三体)。8三体患者的年龄偏大,外周血原始 幼稚细胞百分比和外周血白细胞(WBC)计数均较低,无病生存期(DFS)较短(P均<0.05)。8三体患者CD34、CD117和CD56的表达频率较高,而CD11b、CD14和CD15则较低(P分别<0.01、0.05、0.05、0.01、0.05和0.005)。结论:8三体的M4、M5患者预后较差,8三体可能与单核细胞分化成熟受抑有关。     

Caspase抑制剂对冻存脐血造血干/祖细胞的保护效应

脐血因其独特的生物学特性、资源优势及临床移植适应证广泛，已成为造血干细胞移植（HSCT）的细胞来源之一。如何将脐血造血干／祖细胞进行有效的保存和复苏，降低其冻存损伤，是HSCT治疗的关键环节之一。随着对低温冻存理论的深入认识，人们发现细胞凋亡参与了细胞冷冻损伤的分子机制，造血干细胞凋亡严重损害其克隆形成能力和移植后的造血重建功能。