HLA-DRB1基因多态性与扩张型心肌病的相关分析

目的探讨扩张型心肌病（IDC）与人类白细胞抗原（HLA）-DRB1基因多态性的关系。方法用聚合酶链反应一序列特异性引物方法检测301例IDC患者（IDC组）与436例正常人（对照组）的HLA-DRB1等位基因分布情况。结果IDC组HLA-DRB1＊11、HLA-DRB1＊12、HLA-DRB1＊14的基因频率明显高于对照组（RR=2．91、4．02、3．78，P〈0．05）；IDC组同时携带HLA-DRB1＊12、DRB1＊14基因型的阳性率亦显著高于对照组（RR=6．24．P〈0．01）。结论HIA-DRB1＊11、DRB1＊12、DRB1＊14与IDC有明显相关性。     

应用抗CD137L单克隆抗体阻断CD137/CD137L信号通路抑制小鼠SGVHD的发生

目的：探讨抗CD137L单克隆抗体阻断CD137/CD137L信号通路在小鼠同基因型移植物抗宿主病（SGVHD）诱导中的作用,以阐明SGVHD的发生机制.方法：用致死剂量的X射线照射受体小鼠后,移植同基因骨髓细胞,从移植的当天开始连续21天腹腔注射环孢素A（CsA）诱导SGVHD.于诱导的第10天起给治疗组小鼠腹腔注射抗CD137L单克隆抗体进行干预治疗.观察各组小鼠的临床症状（体重下降,腹泻）、组织病理学和细胞因子改变.结果：抗CD137L单克隆抗体治疗组小鼠SGVHD的发生率明显低于诱导组小鼠SGVHD的发生率（25% vs 67%）,两者差异具有统计学意义（P＜0.01）.SGVHD小鼠肝脏和结肠组织病理学呈严重炎症细胞浸润,组织中细胞因子IL-12、IFN-γ、TNF-α mRNA水平升高.而抗体治疗组小鼠织病理学呈轻度炎症细胞浸润,组织中细胞因子IL-12、IFN-γ、TNF-α mRNA水平较低或检测不到.结论：单独用抗CD137L单克隆抗体阻断CD137/CD137L信号通路可明显抑制小鼠SGVHD的发生,提示CD137/CD137L信号通路在小鼠SGVHD免疫反应中是较为重要的通路之一.     

Keratinocyte growth factor (KGF) phage model peptides can promote epidermal cell proliferation without tumorigenic effect

Background KGF significantly influences epithelial wound healing. The aim of this study was to isolate KGF phage model peptides from a phage display 7-mer peptide library to evaluate their effect on promoting epidermal cell proliferation. Methods A phage display 7-mer peptide library was screened using monoclonal anti-human KGF antibody as the target. ELISA was performed to select monoclonal phages with good binding activity. DNA sequencing was done to find the similarities of model peptides. MTT assay, immunofluorescence assay and quantitative real-time PCR analysis were employed to evaluate the effect of the phage model peptides on epidermal cells. Results 56.9% (33/58) of the isolated monoclonal phages exhibited high binding activity by ELISA. Ten of fifteen obtained phage model peptides were similar to KGF or EGF. MTT assay data showed that four (No.1-4) of the ten phage model peptides could promote epidermal cell proliferation. The expression of keratinocyte growth factor receptor (KGFR) mRNA in the KGF control group and the two phage model peptide groups (No.1 and No.2) increased. Expression of c-Fos mRNA and c-Jun mRNA in the KGF control group increased, but did not increase in the four phage model peptide groups (No.1-4). Conclusions Four phage model peptides isolated from the phage display 7-mer peptide library can safely promote epidermal cell proliferation without tumorigenic effect.     

缬沙坦联合霉酚酸酯对糖尿病大鼠肾脏TRAIL及NF-κB的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)及其核因子-κB(NF-κB)在糖尿病大鼠肾组织的表达及其联合应用缬沙坦(valsartan)和霉酚酸酯(MMF)对糖尿病大鼠肾组织TRAIL及其NF-κB的影响.方法 采用一侧肾切除腹腔注射STZ(55 mg/kg)建立糖尿病大鼠模型,将80只Wistar大鼠随机分为:对照组(NC)、糖尿病组(DM)、缬沙坦治疗组(DM+V)、霉酚酸酯治疗组(DM+M)、联合治疗组(DM+V+M).取材,检测各项生化指标,并采用荧光实时定量RQ-PCR方法检测肾皮质TRAIL及其NF-κB的mRNA的表达.免疫组织化学测定肾组织TRAIL及其NF-κB蛋白的表达.结果 ①DM组24 h尿蛋白和肾重/体重比均高于NC组(均P＜0.05),并随糖尿病时程延长逐渐增高,于DM12周时达到最大值;血白蛋白在DM8周组开始下降(P＜0.01),并逐渐降低;血肌酐、尿素氮于DM16周组开始下降(P＜0.01).各治疗组与DM8周组相比较,肾重/体重比变小(P＜0.05),24 h尿蛋白总量降低(均P＜0.05),血白蛋白回升(P＜0.05).以联合组最为明显.②荧光定量PCR显示TRAIL在12周前表达降低(均P＜0.01),16周时其表达量明显升高(P＜0.01).各治疗组与DM8周组比较表达增加(P＜0.05),以霉酚酸酯组和联合组最为明显(P＜0.01).DM组NF-κB的mRNA表达随时间延长逐渐增强(P＜0.01),各治疗组与DM8周组比较表达均降低(均P＜0.05),以联合组最为明显.③免疫组化显示TRAIL主要在肾曲小管表达,肾小球和脉管系统没有表达.DM各组在12周前表达均降低(均P＜0.05),差异有统计学意义;16周后表达明显增强(均P＜0.01).各治疗组阳性细胞数明显增加(均P＜0.05).NF-κB在肾小球和肾小管均有表达,DM各组NF-κB表达量随时间逐渐增高,各治疗组可显著降低NF-κB表达.结论 TRAIL作为自身免疫系统的一个重要监控因子,其在糖尿病大鼠肾脏中的表达说明其密切参与了糖尿病肾病的发生发展,机制可能由NF-κB调节.早期缬沙坦和霉酚酸酯联合干预治疗可通过来增强TRAIL的表达,对肾脏产生保护作用.     

人树突状细胞与CD137单抗联合体外抗宫颈癌的实验研究

目的 :研究树突状细胞 (DCs)联合CD137单抗对HeLa宫颈癌细胞系体外生长的抑制作用。方法 :外周血单核细胞体外经细胞因子GM CSF、IL 4的诱导获得DCs ,流式细胞术检测DCs相关表型及协同刺激分子CD137的表达。MTT法分别检测DCs以及DCs联合CD137单抗对HeLa细胞的生长抑制作用。结果 :诱导 5～ 7d后的悬浮细胞具有典型的树突状细胞形态。流式细胞术检测结果显示 ,MHCⅡ类分子HLA DR的表达率为中等水平 ,单核 巨噬细胞系表面标志CD14表达率小于 5 % ;CD137的表达率为 9.77% ,LPS诱导成熟后CD137的表达率增加为 36 .0 6 %。当DCs与HeLa细胞的效靶比为 1.2 5 :1、2 .5 :1、5 :1、10 :1时 ,DCs对HeLa细胞的抑瘤率分别为 6 .17%、5 .75 %、2 3.4 6 %、2 1.4 8% ;当效靶比为5 :1时 ,DCs联合CD137单抗抑制HeLa细胞生长的作用 ,比DCs单独抑制HeLa细胞生长的作用明显增强 ,其抑瘤率由 2 5 .4 4%提高到 5 7.0 7% (P <0 .0 5 )。结论 :DCs联合CD137单抗 ,体外具有显著的抗宫颈癌作用 ,为宫颈癌的防治提供了新思路。     

血清降钙素原对轻度认知障碍诊治的临床意义

目的探讨血清降钙素原(PCT)对轻度认知障碍(MCI)诊治的临床意义。方法 100例MCI患者为观察组,同期100例认知功能正常的体检者作为对照组。测定所有研究对象的血清PCT、C反应蛋白(CRP)、同型半胱氨酸(HCY)、血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平。探讨各指标与简易智力状态检查(MMSE)量表评分的相关性,并采用受试者工作特征(ROC)曲线分析对比相关指标的临床诊断效能。结果观察组MMSE得分、TC、HDL-C和LDL-C水平均显著小于对照组,PCT、CRP、HCY水平均显著高于对照组(P 0. 001)。PCT、CRP、HCY水平与MMSE评分呈负相关(r=-0. 721,P=0. 003; r=-0. 406,P=0. 006; r=-0. 396,P=0. 008),而HDL-C水平与MMSE评分呈正相关(r=0. 371,P=0. 009)。ROC曲线分析结果显示:PCT的曲线下面积(AUC)最大为0. 891,HCY、CRP次之分别为0. 876、0. 834,HDL-C最小为0. 715。结论血清PCT水平测定对MCI诊治具有重要意义。     

尿胞外体亮氨酸氨基肽酶及二肽基肽酶在糖尿病肾病中的变化

目的: 探讨2型糖尿病患者尿液胞外体的亮氨酸氨基肽酶(exosome-LAP)及二肽基肽酶4(exosome-DPP4)的水平变化在糖尿病肾病发展过程中的意义。方法: 选取127例2型糖尿病患者,根据24 h 尿白蛋白肌酐比(UACR)分为糖尿病正常白蛋白尿组(DM, 43 例)、微量白蛋白尿组(DN1, 50 例)和大量白蛋白尿组(DN2, 34 例)。另选健康对照组 34 例。采用特异性的单克隆抗体提纯胞外体,酶联免疫吸附法(ELISA)检测尿液胞外体的 exosome-LAP 和exosome-DPP4 。同时检测糖化血江蛋白(HbA1c)、血胆固醇(CH)、肌酐(CR)、尿素氮(BUN)。应用多元逐步回归方法分析 DPP4 及 LAP 与 HbA1c、CH、UACR、CR、BUN 相关性。结果: DM、DN1、DN2 组 exosome-LAP和exosome-DPP4 水平均显著高于正常组(均P<0.01);与 DM 组比较,DN2 组 exosome-LAP水平显著升高(P<0.01)。尿 exosome-LAP、 exosome-DPP4 与 HbA1c、CH、UACR、CR、BUN 显著相关。逐步多元回归分析显示,CH、UACR 是 exosome-LAP 的独立危险因素(均P<0.01);UACR、HbA1c 是 exosome-DPP4 的独立危险因素(均P<0.01)。结论: Exosome-LAP和exosome-DPP4 水平与糖尿病肾病严重程度密切相关,以上指标对于糖尿病肾病的诊断及预后估计具有一定临床价值。     

银屑病患者的生活质量与病情转归

人的经济生活状态直接影响着人的生存质量和情绪状态,鉴于银屑病与社会心理因素间的密切关系,我们研究了近7年来接诊的银屑病患者经济状态和生活质量在其病情转归中的影响。     

氨甲酰基促红素的制备及其对过氧化氢损伤的SH-SY5Y细胞保护作用的观察

目的 制备氨甲酰基促红细胞生成素并研究其对H2O2损伤的SH-SY5Y细胞的保护作用。方法 将促红细胞生成素与氰酸钾共同作用使其转化为氨甲酰基促红细胞生成素,并通过电泳鉴定。分别选用300、400μmol/L H2O2作用于SH-SY5Y细胞12h后分别加入相同浓度的氨甲酰基促红细胞生成素及促红细胞生成素,作用24h终止培养,分别测定各组的噻唑兰(MTT)、乳酸脱氢酶值,通过Annexin V /PI双染色后经流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用RT-PCR法检测Bcl-2及Caspase-8的表达,比较氨甲酰基促红素及促红素对H2O2损伤的SH-SY5Y细胞的保护作用,并探讨其作用机制。结果 成功将促红素已氨甲酰化为氨甲酰基促红素。经氨甲酰基促红细胞生成素与促红细胞生成素作用后,H2O2损伤的SH-SY5Y细胞的MTT值增高,乳酸脱氢酶降低,细胞凋亡率减少。结论 氨甲酰化促红素对氧自由基损害的SH-SY5Y细胞具有与促红素同样的保护作用,且在一定浓度范围内保护程度随着浓度的升高而增加。     

小鼠CTLA4-Ig融合蛋白的表达、纯化及活性测定

目的:在真核细胞中表达CTLA4鄄Ig融合蛋白,获得纯品并测定其生物学活性。方法:用电转染的方法将真核表达载体pREP7鄄CTLA4鄄IgG2c转染SP2/0细胞,经300μg/ml的潮霉素筛选得到阳性克隆;大量培养后收集含有重组CTLA4鄄IgG2c的细胞培养上清,用rProteinA亲和层析柱纯化CTLA4鄄Ig。用还原和非还原性SDS鄄PAGE和蛋白印迹进行鉴定。采用单向混合淋巴细胞培养(3H掺入法)测定CT鄄LA4鄄Ig对T细胞增殖的抑制效应。结果:阳性克隆大量培养的细胞上清经rPrtoteinA亲和层析后得到纯化CTLA4鄄Ig。还原条件下SDS鄄PAGE和Westernblot的结果显示在55KD出现目的蛋白条带;在非还原条件下SDS鄄PAGE和Westernblot在130KD处出现目的蛋白条带。混合淋巴细胞培养5d的结果显示,CTLA4鄄Ig浓度为10μg/ml时可以抑制T细胞的增殖;20μg/ml时抑制达到最大程度(P<0.05);继续增加CTLA4鄄Ig的浓度,其抑制作用不再增强。3、7d时的抑制作用不明显。结论:在SP2/0中表达了小鼠CTLA4鄄Ig融合蛋白,该融合蛋白能抑制T细胞的增殖。