pcDNA3.1-血管内皮生长因子165质粒局部注射对大鼠软组织缺损修复的影响

背景:目前关于血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)在创伤及整形外科领域主要集中在骨折及组织工程化材料等方面,在软组织损伤方面报道不多.目的:构建的pcDNA3.1-VEGF165质粒,直接注射于大鼠软组织缺损局部,探讨其对软组织缺损修复的影响.设计、时间及地点:于2004-09/2006-01在山东大学动物实验中心和分子生物学实验室完成自身对照观察实验.材料:健康SD大鼠30只.方法:Trizol法提取兔组织中总RNA,反转录合成VEGF165cDNA序列,将此基因片段与pMD18-T构建真核表达载体,双酶切,在T4 DNA连接酶作用下,再与pcDNA3.1载体构建成重组真核表达质粒pcDNA3.1-VEGF165;采用SD大鼠30只,于脊背后部两侧对称部位制备圆形全层皮肤(直径15mm)、肌肉(切除2mm厚肌肉)软组织缺损,两创缘相距4cm;选择一侧为实验组,直接注射0.2mL(含200ng)质粒液,对侧为对照组,以等量生理盐水同法处理.主要观察指标:创面愈合、血管生成及局部胶原表达.结果:30只均进入结果分析.①经赵冬梅等的方法鉴定,pcDNA3.1-VEGF165质粒构建成功.②质粒液局部注射后实验组创面愈合时间早于对照组,差异有显著性意义(P＜0.05);实验组术后7,14d微血管密度高于对照组,差异有显著性意义(P＜0.05).③实验组3d即有Ⅲ型胶原表达,14d达高峰,30d时略有降低.对照组Ⅲ型胶原表达部位和趋势与实验组一致,只是时间延迟.结论:pcDNA3.1-VEGF165质粒局部注射可促进软组织缺损区血管生成和细胞外基质合成,加速创面愈合.     

肿瘤坏死因子-α对A549肺腺癌细胞外来体诱导抗肿瘤作用的影响

肺癌的发病率及病死率较高,传统的治疗方法如手术、放疗及化疗等毒性及不良反应大,疗效不满意,生物免疫疗法是肺癌治疗的重要手段之一.肿瘤细胞来源的外来体含有肿瘤抗原和共刺激分子,能诱导抗肿瘤免疫反应,但其抗肿瘤疗效有待进一步提高.研究结果显示多种细胞因子能调节外来体的分泌和功能,肿瘤坏死因子( tumor necrosisfactor,TNF)-α是多效性的细胞因子,能抑制肺癌、肾癌及黑色素瘤等多种肿瘤[1],但TNF-α对肺癌细胞外来体有无影响尚不明确.我们研究TNF-α对肺癌细胞来源的外来体诱导抗肿瘤作用的影响,为TNF-α联合外来体疫苗抗肿瘤治疗提供理论基础.     

TGF-beta1 phage model peptides isolated from a phage display 7-mer peptide library can inhibit the activity of keloid fibroblasts

Background Transforming growth factor-beta1 (TGF-beta1) is known to have a role in keloid formation through the activation of fibroblasts and the acceleration of collagen deposition. The objective of this current study was to isolate TGF-beta1 phage model peptides from a phage display 7-mer peptide library to evaluate their therapeutic effect on inhibiting the activity of keloid fibroblasts. Methods A phage display 7-mer peptide library was screened using monoclonal anti-human TGF-beta1 as the target to obtain specific phages containing ectogenous model peptides similar to TGF-beta1. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was performed to select monoclonal phages with good binding activity, which underwent DNA sequencing. MTT assay and apoptosis assessment were used to evaluate the biological effects of the phage model peptides on keloid fibroblasts. Immunofluorescence assay was employed to show the binding affinity of the model peptides on phages causing keloid fibroblasts. Quantitative real-time PCR analysis was carried out to detect the expressions of Nuclear factor kappa B (NF-kappa B) mRNA, connective tissue growth factor (CTGF) mRNA and TGF-beta receptor II (TβRII) mRNA in keloid fibroblasts. Results Specific phages with good results of ELISA were beneficiated. Four phage model peptides were obtained. The data of MTT showed that TGF-beta1 and one phage model peptide (No.4) could promote keloid fibroblasts proliferation, however, three phage model peptides (No.1-3) could inhibit keloid fibroblasts proliferation. The results of apoptosis assessment showed that the three phage model peptides could slightly induce the apoptosis in keloid fibroblasts. The data of immunofluorescence assay revealed that the model peptides on phages rather than phages could bind to keloid fibroblasts. The findings of quantitative real-time PCR analysis suggested that the expressions of NF-Kappa B mRNA and CTGF mRNA in the three phage model peptides groups decreased, while the expression of TβRII mRNA slightly increased. Conclusions Three phage model peptides isolated from a phage display 7-mer peptide library can inhibit keloid fibroblasts proliferation and induce the apoptosis in keloid fibroblasts. They can inhibit the activity of keloid fibroblasts by blocking TGF-beta1 binding to its receptor and then regulating the expressions of NF-kappa B, CTGF and TβRII.     

MoCA量表对无症状腔隙性脑梗死患者认知功能评价的临床价值

目的探讨蒙特利尔认知评估量表(MoCA)对无症状腔隙性脑梗死患者认知功能障碍评估的临床价值。方法 2010年2月至2012年2月采用MoCA对无症状腔隙性脑梗死患者的认知功能障碍情况进行评价研究,对量表中的8个认知领域11个项目进行分析比较。结果研究组患者的MoCA评分明显低于对照组,且差异具有统计学意义(t=6.27,P<0.05);其中研究组中轻度认知功能损伤(MCI)发生44例,发生率为84.61%,对照组中MCI发生24例,发生率为48.00%,研究组的MCI发生率明显高于对照组(χ2=15.38,P<0.05)。研究组患者在视空间/执行功能、抽象思维、定向力及注意力和集中等方面的MoCA评分明显低于对照组,且差异具有统计学意义(t=5.12、4.72、3.31、3.29、2.92,均P<0.05)。结论 MoCA可以作为对无症状腔隙性脑梗死患者进行认知功能障碍评估和筛查的良好工具,以便较早发现MCI患者,从而在早期实施具有针对性的干预治疗措施,防止其延缓发展为痴呆。     

冬凌草甲素对人肺癌NCI-H460细胞侵袭和迁移的影响

 目的：研究冬凌草甲素对人肺癌NCI-H460细胞侵袭和迁移的影响。方法：将NCI-H460细胞分为高剂量（HD）组、中剂量（MD）组、低剂量（LD）组和对照（N）组,前3组（实验组）加入不同浓度的冬凌草甲素,N组不加冬凌草甲素,观察细胞生长情况;用MTT法测定细胞增殖;比较细胞侵袭能力和迁移能力;Western blotting检测细胞MMP-2和MMP-9表达。结果：实验组细胞数量低于对照组,细胞增殖受抑制,HD组抑制率为48.94%,MD组为36.17%,LD组为19.15%;实验组穿透滤膜细胞数明显减少,HD组为26.67±5.16,MD组为36.17±5.08,LD组为44.33±5.50;实验组的迁移速率及迁移细胞数均降低;实验组的MMP-2和MMP-9表达水平明显低于N组（P<0.01）。结论：冬凌草甲素能抑制NCI-H460肺癌细胞的侵袭和迁移,其作用与下调MMP-2和MMP-9表达有关。     

济南市0~1岁婴幼儿指血微量元素检测结果分析

目的了解济南市0~1岁婴幼儿血锌、铁、钙、铜、镁、铅水平及其影响因素。方法采用原子吸收分光光度法检测3162例婴幼儿指血锌、铁、钙、铜、镁、铅含量。结果济南市婴幼儿存在不同程度的微量元素缺乏状况,锌、铁、钙三种微量元素缺乏比较普遍,0~6个月婴幼儿缺铁的比例最高,7~9个月缺锌的比例最高,10个月~1岁缺钙的比例最高。结论及时合理地添加辅食、平衡膳食是婴幼儿生长发育的重要因素,选择最佳时段补充微量元素,可以有效防止婴幼儿微量元素的缺乏,避免滥用滥补微量元素的盲目性。     

儿童交替性偏瘫家系ATP1A2基因的检测

目的 对儿童交替性偏瘫(AHC)的家系进行基因检测,查找AHC发病的基因突变点。方法 对1个患儿交替性偏瘫家族的5名成员提取DNA,根据突变区域设计引物,进行PCR扩增,将所得到的DNA产物进行基因测序。结果 用正常ATP1A2基因片段序列和基因测序序列进行比对,基因测序图中在1237c碱基处未见明显双峰,其他位置波形亦无异常双峰,在5个样本中均未发现基因突变点。结论 ATP1A2基因突变与儿童交替性偏瘫发病的联系还有待进一步证实。     

应用噬菌体随机七肽库筛选人角质细胞生长因子模拟肽

目的 应用噬菌体随机七肽库生物淘选人角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)噬菌体模拟肽. 方法 以人KGF单克隆抗体为靶,对噬菌体随机七肽库进行4轮生物淘选,测定噬菌体滴度.随机挑取单克隆噬菌体行ELISA检测其结合力,对结合活性较好的单克隆噬菌体提取噬菌体DNA,测序,并应用Basic BLAST系统行序列相似性和同源性分析. 结果 经过4轮生物淘选获得的噬菌体滴度逐渐升高,特异性噬菌体模拟肽获得了富集,行ELISA检测的单克隆噬菌体滴度均可达到2.0×1014 pfu/mL.取吸光度值显示与特异性抗体具有较好结合性的单克隆噬菌体进行测序,共获得26个与促进分裂、生长有关的碱基序列,其中有2个序列与人KGF相似;同源序列分析显示26个碱基序列的共同序列与人KGF的部分序列相似. 结论 从噬菌体随机七肽库中可淘选到与人KGF DNA序列相似或相关的噬菌体模拟肽,有望改善人KGF性能,促进创面愈合和改善组织工程皮肤替代物的性能.     

网络药理学联合分子对接研究藏药六味木香丸治疗胃癌的分子作用机制＊

目的 通过网络药理学和分子对接的方法预测藏药六味木香丸治疗胃癌的主要活性成分和作用靶点。方法 采用文献检索与TCMSP数据库收集藏药六味木香丸组成药材木香、豆蔻、余甘子、荜茇、巴夏嘎、余甘子的主要化学成分和作用靶点，从GeneCards、OMIM、PharmGkb、TTD、DrugBank五大疾病数据库共查找胃癌对应的靶点，将成分靶点和疾病靶点构建韦恩图。并通过GO和KEGG通路富集这些获得的交集靶点。在软件Cytoscape中构建“药物-活性化合物-靶点”网络，通过Cytoscape插件-CytoNCA筛选藏药六味木香丸治疗胃癌的核心化合物和核心靶点并绘制其关系网络。依据AutoDock Vina软件和Perl脚本对核心化合物与核心靶点进行分子对接。结果 TCMSP数据库和文献查阅显示六味木香丸共有42个活性化合物映射301个靶点。从GeneCards、OMIM、PharmGkb、TTD、DrugBank数据库共获得胃癌相关疾病靶点8953个，成分靶点和疾病靶点取交集共获得271个交集靶点。GO功能富集分析表明主要涉及氧化胁迫响应、营养水平响应、细胞膜、DNA-结合转录激活活性、丝氨酸/苏氨酸激酶活性等过程。KEGG通路富集分析显示涉及PI3K/Akt、MAPK、AGE/RAGE等信号通路。分子对接发现槲皮素和木犀草素与MAPK1、JUN，山奈酚、β-谷甾醇与JUN，（-）-儿茶素-3-没食子酸与MAPK1、MAPK3、JUN、STAT3都有很好的结合能力。体外细胞实验发现六味木香丸能够有效抑制人胃癌细胞SGC-7901 增殖，并显著抑制STAT3蛋白的表达。结论 本研究证实六味木香丸具有多成分、多靶点、协同调节的特点，通过网络药理学预测了六味木香丸治疗胃癌的可能机制，为其活性成分研究和试验研究提供理论依据。     

西宁地区老年糖尿病肾病患者同型半胱氨酸水平及检测意义

目的探讨高海拔地区老年糖尿病肾病患者同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)的水平,探讨血清Hcy升高的意义。方法采用随机对照方法,根据不同程度的糖尿病肾病患者(早期肾病、临床肾病、尿毒症期)及无肾病的糖尿病患者,比较分析160例老年人Hcy的水平。结果糖尿病肾病患者的Hcy的水平增高,3组不同尿白蛋白排泄率(UAER)糖尿病病人间的Hcy水平,差异有统计学意义(P﹤0.05);Hcy与UAER呈显著正相关(P﹤0.01)。结论 Hcy的水平和糖尿病肾病患者的肾功能损害程度相关,对高Hcy血症的干预治疗,可延缓糖尿病肾病的进展。