Cx43转基因自体成肌细胞移植治疗心肌梗死的实验研究

目的观察间隙连接蛋白43(Cx43)基因转染自体骨骼肌成肌细胞(SMCs)后心肌内细胞移植对犬急性心肌梗死(AMI)后心功能和心肌结构的影响。方法构建真核表达质粒载体pLenti6／V5-DEST-Cx43,利用慢病毒表达包装系统将目的基因Cx43 cDNA转染入体外培养的SMCs,并经克隆筛选后得到Cx43基因高表达的SMCs (Cx43-SMCs)。将24只AMI模型制备成功的杂种犬采用计算器随机法分为SMCs移植组、Cx43-SMCs移植组和对照组等3组(n=8),于犬AMI后4周分别在各组心肌梗死区进行细胞移植:SMCs移植组注入用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记的SMCs、Cx43-SMCs移植组注入用BrdU标记的Cx43-SMCs、对照组注入等量的细胞培养液。分别在AMI前1天、AMI后4周和细胞移植4周后,用超声心动图(UCG)测量左室射血分数(LVEF)、左室舒张末期内径(LVDD)和左室收缩末期内径(LVSD);同时进行病理组织学检查和应用免疫组织化学技术检测BrdU标记移植细胞的存在情况;并通过透射电子显微镜观察移植区细胞的超微结构和缝隙连接形成情况。结果实验杂种犬在AMI前、AMI后4周(即移植前)、移植后4周均获得良好UCG图像。AMI前UCG检查显示犬的左室形态和收缩功能均正常,建立AMI模型4周后,与对照组相比,SMCs移植组和Cx43-SMCs移植组各实验犬的左心室腔扩大,左室前壁变薄,收缩活动减弱至消失,LNEF降低,LNDD和LVSD均增加(P<0．05),为成功的AMI模型。移植后4周,与移植前AMI时比较,SMCs移植组和Cx43-SMCs移植组的LVEF升高,LNDD和LVSD则减少(P<0．05),心功能趋于恢复,其中Cx43-SMCs移植组较SMCs移植组为显著(P<0．05)。病理组织学检查显示在细胞移植组心肌瘢痕区及其边缘均发现了植入的移植细胞;免疫组化检测结果显示心肌瘢痕区边缘有BrdU阳性细胞存在和分布,移植细胞的颜色呈棕褐色,与正常原位心肌细胞不同,其中Cx43-SMCs移植组植入的Cx43-SMCs在宿主心肌组织内排列有序,基本与宿主心肌的排列方向一致;电子显微镜观察到SMCs移植组可见骨骼肌样细胞(核偏、线粒体较小),有少部分移植细胞呈现闰盘(缝隙连接)形成初期;Cx43-SMCs移植组则见到有“心肌样”肌细胞分布在宿主心肌移植区中,且各细胞之间形成缝隙连接．结论Cx43基因转染自体SMCs后自体心肌移植能够在宿主体内生长、增殖,并可在一定程度上改善心肌梗死后心肌结构和心功能。     

生物瓣失功用再次换瓣的临床实践

生物瓣替换术后的衰败使病人面临再次换瓣手术,与第1次手术相比,再次换瓣操作困难,并发症和死亡率明显增多.现报告我们为62例生物瓣失功病人再次换瓣的临床体会.     

炫速双源CT在法洛四联症诊断中的应用

目的 探讨炫速双源CT诊断法洛四联症(TOF)的应用价值.方法 对比分析42例法洛四联症患者的术前双源CT、超声心动检查资料和术中主肺动脉(PA)、左肺动脉(LPA)、右肺动脉(RPA)、右室流出道(ROVT)及主动脉骑跨率测量值,以术中测量结果为基准.结果 42例患者术中共发现心脏畸形232处,其中心内畸形145处,心脏大血管连接处畸形53处,心外畸形34处.术前炫速双源CT发现心脏畸形204处,其中心内畸形130处,心脏大血管连接处畸形21处,心外畸形53处;超声心动检查发现224处,其中心内畸形145处,心脏大血管连接处畸形31处,心外畸形48处;确诊率分别为88％(204/232处)和97％(224/232处).炫速双源CT检查结果和术中两组测量值相比较差异无统计学意义(P＞0.05).超声心动检查结果和术中测量值相比,PA、LPA和RPA差异有统计学意义(P＜0.05),ROVT和主动脉骑跨率相比较差异无统计学意义(P＞0.05).超声心动检查和炫速双源CT相比较,差异无统计学意义(P＞0.05),二者具有很好的一致性.结论 超声心动检查诊断心腔内结构畸形优于炫速双源CT.诊断心外大血管畸形,尤其是评估TOF患者肺动脉发育情况,炫速双源CT具有其独特的优势,两种方法结合对TOF患者的诊断有明显的互补作用.     

肺移植后OB动物模型的研究进展

肺移植（lung transplantation,LT）已成为治疗终末期肺疾病患者生命的一个重要手段。细支气管闭塞综合征（bronchiolitis obliterans syndrome,BOS）作为LT术后的一种并发症广泛存在,其特征性病理表现为闭塞性细支气管炎（obliterative bronchiolitis,OB）：细支气管周围有淋巴细胞浸润,最终导致纤维瘢痕的形成和细支气管闭塞。理想的动物模型有助于研究的进一步开展。目前,研究肺移植缺少一种理想的动物模型。了解肺移植后闭塞性细支气管炎的发病机制,有助于改善肺移植病人的生活质量,延长肺移植后患者生存率。本研究23将就肺移植后的闭塞性细支气管炎模型做一综述。     

犬成年骨骼肌成肌细胞的培养纯化、鉴定及生长特性的研究

目的建立简便、有效的成年犬骨骼肌成肌细胞（skeletal myoblast cells，SMCS）体外分离培养、纯化和鉴定的方法，并观察犬SMCs的生长特性。方法采用机械分解法与IA型胶原酶和胰蛋白酶的二步酶消化法相结合，分离消化法培养获取犬SMCs，用DMEM培养液培养，以Ficoll梯度液纯化，进行Desmin免疫组化鉴定，并观察细胞形态、生长特性。结果犬SMCs培养后经台盼蓝检查成活率达95％以上，在接种后4～5d增殖达高峰，细胞生长旺盛；Fiooll分离纯化的SMCs纯度较高；Desmin免疫细胞化学染色有97％的SMCs胞浆呈阳性反应。结论改良方法获得的SMCs具有良好的增殖、分化能力；采用FicollU纯化以血清培养，即可获得高产量高纯度的SMCs。     

Genistein预处理对体外循环MIRI的保护作用

目的 通过建立猪体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)模型,探讨染料木黄酮(Genistein)预处理对CPB MI/RI损伤后时相的心肌保护作用.方法 将16只成年家猪随机分为对照组(Con)和实验组(Gen)(n=8).常规建立CPB模型,主动脉阻断同时灌注改良St.Thomas停搏液.每组于CPB前、CPB结束时、主动脉开放后2 h检测冠状静脉窦血肌钙蛋白(TnT)含量,外周血中IL-6、IL-8、TNF-α浓度;并于相应时间点监测心功能变化;分别于CPB前和主动脉开放后2 h取左心室心肌,进行心肌组织cNOS、iNOS活性测定.结果 (1)和对照组相比,实验组心功能指标明显改善(P＜0.05);(2)对照组的TnT以及炎症因子明显高于实验组(P＜0.05).(3)和对照组相比,实验组iNOS和cNOS活性显著增高(P＜0.05).结论 CPB前Genistein预处理能够引发心肌缺血再灌注损伤模型的后时相心肌保护作用,其中cNOS、iNOS扮演了重要角色.     

大鼠心肌成纤维细胞体外培养的生物学特性及转基因研究

目的观察大鼠心肌成纤维细胞(CFs)体外培养的生长增殖情况及肌肉转录调节因子(MyoD)基因转染对其生物学特性的影响。方法采用改良的差速贴壁法培养大鼠CFs,利用携带MyoD cDNA的真核表达载体pLenti6/V5-DEST-MyoD转导培养的大鼠CFs,用稻瘟菌素筛选2周,挑选转基因单克隆细胞,传代培养,进行细胞形态观察、生长曲线以及细胞免疫化学鉴定。结果成功建立高纯度大鼠CFs的细胞培养模型,且具有良好的细胞形态、正常的生长增殖等生物学功能。转染细胞的MyoD cDNA基因表达阳性,其下游抗α-肌动蛋白(α-actin)呈阳性表达,胞质呈棕黄色,并且含有与细胞纵轴平行排列的肌丝,细胞核用苏木素复染后呈淡蓝色。在2.0×10~5/mL细胞密度的CFs接受转MyoD基因后,抗α-actin阳性率为(27.04±9.41)%。结论真核表达载体成功介导MyoD cDNA转导入体外培养的大鼠CFs,诱导其转化为具有潜在功能的类骨骼肌细胞,CFs可成为心血管疾病基因治疗的靶细胞。     

体外循环围术期监测心肌肌钙蛋白T、超敏C反应蛋白、细胞因子及补体变化的临床意义

目的 探讨在体外循环（cardiopulmonary bypass,CPB）下心脏手术围术期动态检测血清心肌肌钙蛋白T（cTnT）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、细胞因子（CK）和补体C3、C4水平的临床意义。方法 选择20例行CPB和10例非CPB心脏手术患者．分别于术前、术后即刻、24h、48h和72h测定其血清cTnT、hs-CRP、促炎CK（TNF-α、IL-6、IL,8）和抗炎CK（IL-2、IL-10）以及补体C3、C4的水平;同时记录机械通气时间、ICU在室时间及术后住院时间。结果 对照组和CPB组术前cTnT和hs-CRP的测定结果均在正常范围内。CPB组术后即刻、24h、48h和72h各时相cTnT均显著性增高,其中以术后即刻增高最为显著（P〈0．01）,术后72h以后趋于正常;hs-CRP于术后24h开始显著性增高,至72h后逐渐降低（P〈0．01）。CPB组患者血清补体C3水平在术后即刻显著低于术前水平,术后48h恢复并显著高于术前水平（P〈O．01）;血清补体C。水平在术后即刻显著低于术前水平．术后72h恢复并显著高于术前水平（P〈0．01）。CPB组患者血清TNF-α水平于术后即刻明显增加并持续到术后24h,而后逐渐下降至术后48h恢复到术前水平;血清IL-6水平在术后24h出现高峰,术后48h后降至术前水平;血清IL-8于术后即刻明显增加．术后24h达高峰,并持续到术后72h;血清IL-2水平于CPB术后即刻明显增加,于术后24h基本恢复至术前水平;血清IL-10水平亦于CPB术后即刻逐渐升高,至术后24h达峰值．在术后48h仍较高。结论 CPB围术期动态监测cTnT、hs-CRP、促炎和抗炎CK、补体C3、C4水平的变化,对加强CPB术后病人的监护具有十分重要的指导意义。     

吸入和静脉应用盐酸戊乙奎醚对油酸诱导大鼠急性肺损伤的影响

目的观察雾化吸入和静脉应用盐酸戊乙奎醚对油酸诱导大鼠急性肺损伤(ALI)的影响。方法采用静脉注射油酸复制ALI大鼠模型。将40只SD大鼠随机均分为四组:空白对照组(Ⅰ组)、ALI组(Ⅱ组)、盐酸戊乙奎醚雾化吸入组(Ⅲ组)和盐酸戊乙奎醚静脉注射组(Ⅳ组)。每隔60分钟记录大鼠BP、肺动脉压(PAP),并检验动脉及混合静脉血气。注射油酸240min后检测支气管肺泡灌洗液(BALF)蛋白定量、肺髓过氧化物酶(MPO)活性。结果Ⅲ、Ⅳ组较之Ⅱ组能够缓解由注射油酸引起的PAP升高和PaO2/FiO2下降,Ⅲ组缓解更为明显(P<0.05)。Ⅲ、Ⅳ组BALF蛋白定量、白细胞计数和肺MPO活性均比Ⅱ组降低,Ⅲ组降低更为明显(P<0.05)。结论盐酸戊乙奎醚雾化吸入较静脉注射更能缓解油酸引起的ALI。     

V肠道菌群失调在心力衰竭中的作用研究进展

肠道菌群是人体肠道内共生的微生物群落,多项研究证明肠道菌群失调与多种疾病密切相关。近年来肠道菌群失调在心力衰竭发生和发展中的作用日益受到关注。富含胆碱和三甲胺的食物在肠道菌群酵解作用下生成的代谢产物氧化三甲胺促进心力衰竭的进展,肠道菌群失调也可以升高血清中氧化三甲胺的水平,因此肠道菌群成为心力衰竭防治的新靶点。