食蟹猴疟原虫B株配子体对不同龄斯氏按蚊的感染性

试验表明,食蟹猴疟原虫B株配子体,对不同龄斯氏按蚊的感染性存在着差异.随着蚊日龄的增长,感染度下降,尤其在不佳感染时间血餐者,这种差异更为明显.在疟疾试验研究中,以选择3～8日龄斯氏按蚊作为媒介为佳.     

约氏疟原虫感染对大劣按蚊PPO4基因转录与卵囊内Ca2+的影响

目的观察约氏疟原虫感染对大劣按蚊前酚氧化酶(prophenoloxidase, PPO)基因转录的影响与卵囊黑化期间囊内Ca2 的变化,探讨疟原虫感染不易感蚊种时卵囊黑化的相关机制.方法分别在大劣按蚊吸血感染约氏疟原虫前与感染后1、2、3和5 d抽提蚊总RNA进行RT-PCR,PCR扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳后扫描进行凝胶图像分析,并对所得数据进行统计学处理.在吸血感染后5、7、11和15 d解剖分离按蚊中肠,以荧光染料Fluo-3/Am作为卵囊内Ca2 指示剂,利用共聚焦扫描显微镜观察不同时期约氏疟原虫卵囊内Ca2 的分布及变化.结果吸血感染约氏疟原虫前大劣按蚊PPO4基因的RT-PCR扩增产物较少,但感染后明显增加(P<0.01),尤其在感染后1 d与2 d最为明显;约氏疟原虫未黑化卵囊内Ca2 为(137.15±7.02) nmol/L,完全黑化卵囊内Ca2 为(18.44±1.75) nmol/L、并在囊壁出现明显的钙沉着.结论吸血感染约氏疟原虫后大劣按蚊PPO4基因转录比感染前明显增强,黑化卵囊内Ca2 较未黑化卵囊明显减少,并有外排现象.     

斯氏按蚊黑化包被约氏疟原虫卵囊时血淋巴蛋白的二维电泳分析

目的以斯氏按蚊-约氏疟原虫为模型,用二维电泳技术分析比较约氏疟原虫感染后雌性斯氏按蚊吸饲硝喹蔗糖水和蔗糖水蚊血淋巴蛋白差异.方法用挤压法分别收集吸硝喹糖水3 d、吸感染血和吸蔗糖水雌斯氏按蚊成蚊血淋巴,Bradford法检测血淋巴蛋白浓度,继而对血淋巴进行双向电泳,凝胶考马斯亮蓝染色,ImageMaster VDS-CL对二维电泳凝胶蛋白斑点扫描和用ImageMaster 2D Elite软件进行蛋白质斑点自动分析.结果用药组血淋巴蛋白浓度总是低于吸感染血组和吸糖水组,用药组蚊血淋巴蛋白点有101个,对照组有115个,有51个蛋白点相同.50个仅在用药组中检测到,64个仅在对照组中检测到;蛋白点的分子量和等电点主要位于(40～60)×103和碱性端.结论二维电泳技术可直接反映蛋白质的差异,其蛋白浓度和白点的差异与硝喹诱导疟原虫卵囊黑化有关.     

大劣按蚊差异表达蛋白与约氏疟原虫卵囊黑化关系的研究

目的探讨大劣按蚊差异表达蛋白与约氏疟原虫卵囊黑化的相互关系.方法将雌大劣按蚊成蚊分为吸糖水组、正常小白鼠血组和约氏疟原虫感染血组,以挤压法收集各组的血淋巴,解剖中肠并利用超声波提取其蛋白,继而对血淋巴和中肠蛋白进行SDS-PAGE分离,Western blot检测丝氨酸蛋白酶和前酚氧化酶的表达差异,并利用免疫组织化学进行血细胞丝氨酸蛋白酶与前酚氧化酶的定位检测.结果 SDS-PAGE显示吸糖水大劣按蚊有34条蛋白带,而吸正常小鼠血和吸感染血蚊血淋巴有35条蛋白带,而且在分子量约160×103和66×103的蛋白差异带显著,吸正常血及感染血后表达增强.吸糖水和吸正常小白鼠血组血淋巴丝氨酸蛋白酶呈现2条带,分子量分别约160×103和150×103,3组蚊血淋巴前酚氧化酶呈现1条带,分子量约66×103,吸正常小鼠血和吸感染血组蚊1 d后血淋巴丝氨酸蛋白酶和前酚氧化酶表达均显著上调,尤其疟原虫感染后表达最强.感染1 d后中肠前酚氧化酶带型明显增宽.免疫酶化学显示,丝氨酸蛋白酶和前酚氧化酶在血细胞内均呈颗粒状分布,血细胞外血淋巴液内有少许散在颗粒分布.结论约氏疟原虫卵囊黑化期间,大劣按蚊血淋巴丝氨酸蛋白酶和前酚氧化酶表达增强,提示二者可能参与了卵囊黑化包裹反应.     

重庆地区人体蠕形螨感染情况初步调查

有关蠕形螨对人体感染和致病的研究，国外已有不少报道。近年来国内据不完全统计已有北京、上海、天津等十余个省、市、地区的报告，人体蠕形螨感染率在0.8～70.03％之间。重庆地区尚未见报道，为进一步开展防治研究，我们自1987年12月至1988年2月对本地区各类人员1165人进行了调查。     

大劣按蚊AdS7基因的克隆及分析

目的克隆AdS7基因cDNA序列,为大劣按蚊基因定量研究提供内参照.方法采用RT-PCR扩增、TA克隆技术获得AdS7 cDNA部分序列,标记地高辛AdS7探针,从大劣按蚊cDNA文库中筛选得到AdS7全长克隆,以半定量RT-PCR方法研究血餐和约氏疟原虫感染对其表达水平的影响.结果从大劣按蚊cDNA克隆得到长464 bp的AdS7基因cDNA部分序列,从大劣按蚊cDNA文库筛选获得了长871 bp的AdS7基因全长克隆,大劣按蚊吸血和感染约氏疟原虫后24 h,AdS7表达水平没有显著变化.结论 AdS7基因可作为大劣按蚊基因定量研究的内参照.     

培福新对感染约氏疟原虫斯氏按蚊产卵和寿命的影响

实验并分四组，三组为感染约氏疟原虫的斯氏按蚊（阳性蚊），一组为阴性蚊，即：（1）实验组A（阳性蚊）一饲养糖水中加入100μ／ml培福新。（2）实验组B（阳性蚊）-饲养糖水中加入10μg／ml培福新。（3）对照组A（阳性蚊）一饲养糖水中无培福新。（4）对照组B（阴性蚊）一饲以糖水。四组的2日平均产卵数分别为49．5，48．2，51．6和42．5／蚊；幼虫孵化率分别为80．0，84．7，80．0及82．0％；蚊吸血后第20日存活率分别为89．8，87．0，83．5及88．5％。此外，实验组A、B及对照组A阳性蚊胃卵囊感染率分别为100，95．0及100％；每只蚊胃平均卵翼数分别为147．5，137．0及165．6。结果提示培福新对感染约氏疟原虫的斯氏按蚊产卵、幼虫孵化、卵囊的形成无明显影响，而吸食培福新糖水的斯氏按蚊死亡率较吸食单纯糖水的对照组A有所下降。     

斯氏狸殖吸虫抗原分析和血清学诊断方法的研究

[目的 ]分析斯氏狸殖吸虫囊蚴、童虫和成虫各期抗原和建立特异性抗原的斯氏狸殖吸虫病血清学诊断方法。 [方法 ]用SDS PAGE分离斯氏狸殖吸虫的各虫期抗原 ,经免疫印迹识别成虫期特异性诊断抗原。采用电洗脱技术分离 10～ 30kDa蛋白组分 ,建立纯化抗原的dot ELISA血清学诊断斯氏狸殖吸虫病。 [结果 ]斯氏狸殖吸虫病患者血清与成虫抗原的 10～ 30kDa显示较多免疫识别带 ,主带为 2 2、2 4和 2 6kDa。与血吸虫病和华支睾吸虫病患者血清的交叉反应带出现于 6 0～ 90kDa。斯氏狸殖吸虫成虫 10～ 30kDa抗原的dot ELISA与成虫粗抗原的ELISA检测 2 8例疑诊病人血清 ,两法阳性率间差异无显著性。而检测 38例感染其它吸虫和肺部疾病患者血清 ,粗抗原的ELISA交叉反应率为 13 2 % (5 /38)。 [结论 ]斯氏狸殖吸虫成虫 10～ 30kDa抗原的dot ELISA为斯氏狸殖吸虫病高度特异和敏感的血清学诊断方法。     

复方硝喹的毒性作用及其防治的实验研究

小白鼠口服抗疟药复方硝喹,ED_(50)为0.18±0.01mg/kg,与已知几种抗疟药的比,疗效最高,化疗指数最大(1911)。狗服复方硝喹对肾上腺皮质的毒性反应与服单方相仿,但血中高铁血红蛋白含量则服复方硝喹后有明显升高。服较大的中毒剂量(50mg/kg/日×3)时同时肌注叶酸或甲酰四氢叶酸钙可明显降低狗的死亡率和腹泻发生率,病理组织学检查,小肠病变明显减轻,粘膜上皮杯状细胞显著增多。提示用叶酸或甲酰四氢叶酸钙后能保护复方硝喹对小肠的破坏,因而会大大减轻其临床毒性反应。     

接种大剂量约氏疟原虫子孢子对大鼠肝脏超微结构的影响

目的：研究大剂量接种子孢子悬液后宿主肝脏的早期急性细胞反应。方法：观察一次大剂量接种９×１０６个约氏疟原虫子孢子悬液，３０ｍｉｎ后的肝脏超微结构。结果：枯否氏细胞吞噬活性增加，胞浆内可见许多大小不等的吞噬复合体；肝窦内皮细胞受损；血小板肿胀、粘集，形成微血栓；部分肝实质细胞受损，线粒体空泡化，胞浆内形成灶性溶解性坏死。结论：子孢子接种３０ｍｉｎ肝脏即有急性炎症细胞反应，有部分子孢子被枯否氏细胞杀伤，肝细胞线粒体退变是引起部分原虫退变的原因之一。