转基因动物突变研究模型及其在遗传毒理学中的应用

转基因动物突变研究模型及其在遗传毒理学中的应用黎怀星傅继梁第二军医大学基础部生物学教研室上海２００４３３１前言基因突变与肿瘤发生、发育畸形、遗传性疾病、衰老以及进化等医学和生命科学问题均有密切的关系,因此对人和哺乳动物体内基因突变机理的研究是生命科学...     

应用PCR检测原发性肝癌患者外周血中CD44v mRNA的临床意义

我们通过合理的PCR引物设计，采用套式PCR方法检测了15例原发性肝癌患者术晨外周静脉血液中游离肿瘤细胞CD44vmRNA表达情况（此15例患者的新鲜肝癌切除标本CD44vmRNA表达均为阳性），并检查了与侵袭转移相关的病理指标（肿瘤包膜穿破、缺乏；门静脉癌栓；瘤周卫星灶），同时结合近2年（20～22个月）随访的13例病例情况，研究了检测外周血CD44vmRNA表达的临床意义。结果发现13例随访回报的病例中阳性表达9例，阴性表达4例，前者侵袭转移病理指标重于后者；复发率前者（100％）高于后者（25％，P＜0．005）；生存率前者（11．11叭）…     

原发性肝癌CD44v mRNA表达与抑癌基因DCC mRNA表达,癌细…

目的：探讨原发性肝癌中ＣＤ４４ｖ表达与抑癌基因ＤＣＣ表达、癌细胞ＤＮＡ含量之间的关系。方法：应用ＲＴ－ＰＣＲ法检测３０例原发性肝癌中ＣＤ４４ｖ ｍＲＮＡ和ＤＣＣ ｍＲＮＡ的表达情况取２０例标本（阴性及微弱表达者１０例为Ｉ组；高度表达者１０例为Ⅱ组）检测其癌细胞ＤＮＡ干系水平。结果：３０例受检标本中，ＣＤ４４ｖ ｍＲＮＡ中度以上表达２３例（７６．６７％），ＤＣＣ ｍＲＮＡ表达缺失者１８例（６０％），     

穿梭质粒pZH32的构建

以pS189、pSV_2gpt、pMCi5为材料,构建了以EB病毒为基础,以酪氨酸tRNA琥珀突变校正基因SupF为靶基因,以黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因Eco gpt为选择标记基因的穿梭质粒pZH32。pZH32长9.4kb,克服了以SV40为基础的穿梭质粒自发突变率高以及宿主范围局限的缺点。SupF基因遗传背景清楚,长度126bp,便于进行序列分析。gpt基因使转化克隆的筛选更加方便。有利于建立一种化学诱变剂的分子检测系统,研究基因突变的类型和突变机制。     

转移相关的CD44剪接变异体mRNA在早期肝癌中表达的临床意义

目的研究早期肝癌中转移相关的ＣＤ４４剪接变异体ｍＲＮＡ（ＣＤ４４ｍＲＮＡ）表达的临床意义。方法用敏感的ＲＴ—ＰＣＲ法检测手术切除的８例早期肝癌新鲜癌组织标本。表达的强度通过ＩＢＡＳⅡ型图象分析系统对杂交图象进行分析而获得。同时，分析肿瘤转移的病理证据。结果所有的受检标本都检测出了ＣＣＤ４４ｍＲＮＡ的表达。其表达的强度与肿瘤转移的证据（肿瘤包膜的缺如，肿瘤包膜的破坏，门静脉癌栓以及瘤周卫星结节等指标）呈正相关（Ｐ＜０．０５）。结论早期肝癌的侵袭转移潜能可能与ＣＤ４４ｍＲＮＡ表达有关。ＣＤ４４ｍＲＮＡ的表达可能是评估早期肝癌侵袭转移潜能的有效指标。     

口腔粘膜鳞癌发生发展过程中P53基因,P53蛋白及PCNA抗原…

两两多元相关分析发现，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析异常、Ｐ５３染色阳性与ＰＣＮＡ指数之间无论是在口腔粘膜癌前损害、口腔粘膜癌原发灶或淋巴结转移灶中，均有明显的相关关系；将患者的性别、年龄共同引入进行多元判别分析，获得利用指标进行口腔粘膜癌前损害量的分度、膜鳞癌病理分级、以及判定口腔粘膜鳞癌患者是否淋吉转移的多元判别方程初步的判别结果显示其判别准确率分别达８２．５％，７８％，８０％，说明这些方程已具备了临床     

口腔粘膜癌变过程中p53基因突变与P53蛋白异常表达的关系

为探讨口腔粘膜鳞状细胞癌发生发展过程中，ｐ５３基因突变与口腔粘膜癌前损害发生发展过程中Ｐ５３蛋白异常表达的关系，采用微波煮沸脱交联代替胰酶消化的ＡＢＰＡＰ染色法，对正常口腔粘膜至转移性口腔粘膜鳞状细胞癌全过程中组织的Ｐ５３蛋白染色及其染色阳性率与ｐ５３基因突变的关系进行了对照研究。结果显示：正常口腔粘膜及口腔粘膜单纯性上皮增生组织中无Ｐ５３蛋白阳性出现，而９０％（２７／３０）的口腔粘膜癌前损害组织、６１％（３０／４９）的口腔粘膜鳞癌标本和８６％（１３／１５）的淋巴结转移灶中出现Ｐ５３蛋白染色阳性，且所有阳性反应均定位于细胞核，但蛋白的阳性染色反应与基因的突变检出率之间存在差异，此点在口腔癌前损害组更是如此。对此，作者除从方法学等角度加以分析外，还用口腔癌前损害细胞异质的观点予以了解释     

转移基因体内表达的时空特异调控

转移基因体内表达的时空特异调控黄长晖，傅继梁转基因小鼠作为一种在活体内研究特定基因功能的有用工具在发育遗传学、免疫学和医学遗传学等生命科学领域的应用愈来愈广泛，关于转移至体内的外源基因（简称转移基因）在特定组织或器官中的特异性表达，以及发育过程中特定...     

中国仓鼠V79细胞系的oua^R和oua^S细胞蛋白质组分的双向电泳..

In the sense of gene expression, the primary and direct change in mutant cells should be involved in the protein component. Two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis has been used to compare the protein components of ouabain resistant mutant cells (ouaR) and sensitive wild type cells (ouaS) of chinese hamster lung cell line V79. The procedure is based on O'Farrell's method and we have made some modifications. In order to make the study reliable, we took twenty polypeptide spots as a reference marker. These marker spots could always be reproduced in a series of parallel experiments with both mutant and wild cells. In addition, these markers covered different small areas, representing different isoelectric point (pI) and molecular weight (MW) on the electrophoretogram. With reference to these marker spots, some polypeptide spots showed variations in their position, size and density. It is notable that the changes appeared in the small area 4 (pI/MW:5.0/28-30kd) and the small area (pI/MW:6.3/39kd) is highly reproducible and significant, so that these changes might be specific to ouabain resistant mutant of V79 cells. Since the level of genetic polymorphism of mammalian cells on two-dimensional gel electrophoresis is quite low, these specific changes might reflect the differences in gene structure and expression. This primary study should enhance the usefulness of two-dimensional gel electrophoresis for mutagenesis research with cultured mammalian somatic cells.