细粒棘球绦虫66kDa抗原基因在成虫吸盘上的表达

目的　观察细粒棘球绦虫自原头蚴向成虫的生长发育过程中 6 6kDa抗原基因在虫体吸盘上和其它部位表达水平的变化。方法　用重组抗原的抗血清对原头蚴及成虫等不同发育时期的虫体进行免疫组化分析。结果　免疫组化分析显示细粒棘球绦虫 6 6kDa抗原位于各期虫体的皮层和皮下肌层 ,在虫体的表面也发现该抗原的荧光颗粒 ;在经培养 2 0h后的原头蚴和成虫的吸盘上该抗原的含量显著高于虫体的其它部位 ,但在棘球蚴内的原头蚴吸盘上该抗原含量与虫体其它部位一致 ,处于较低的表达水平。结论　原头蚴在向成虫的生长发育过程中当顶突和吸盘翻出时 6 6kDa抗原在吸盘上开始大量产出 ,提示该蛋白质可能与吸盘的吸附功能有关 ;因此该抗原有可能是一有希望的成虫疫苗候选分子。     

硒代蛋氨酸对小鼠巨噬细胞增殖及硒蛋白K的影响

目的探究硒代蛋氨酸(Selenomethionine,Se-Met)对小鼠巨噬细胞的增殖及巨噬细胞中硒蛋白K(Selenopro-tein K,Sel K)的影响,并观察Sel K在小鼠巨噬细胞中的定位。方法加硒代蛋氨酸(Se-Met)培养巨噬细胞,用CCK-8法检测巨噬细胞的增殖活力,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹技术检测Se-Met对小鼠巨噬细胞中Sel K m RNA和Sel K蛋白表达的影响;用细胞免疫荧光法观察Sel K在巨噬细胞中的位置。结果 Se-Met能促进巨噬细胞的增殖,其中浓度为1μmol/L Se-Met在处理巨噬细胞24 h和48h后,能显著性地促进巨噬细胞的增殖(P0.01);1μmol/L Se-Met能使巨噬细胞中Sel K的m RNA含量显著增加(24 h处理组,P0.05;48 h处理组,P0.01),另外,Sel K蛋白的含量也有所增加(48 h处理组,P0.05)。浓度为100μmol/L Se-Met在处理巨噬细胞48 h后,能极显著性地抑制巨噬细胞增殖(P0.01)。结果还显示Sel K蛋白与内质网标志物KDEL都存在于巨噬细胞内的相同位置上。结论 Se-Met在促进巨噬细胞增殖的同时,使存在于内质网上的Sel K增加。     

沉默信息调节因子相关酶类1/核因子κB信号通路与2型糖尿病的关系

2型糖尿病是一种年龄、肥胖及炎症相关性疾病。随着年龄增长以及脂肪组织的积聚,炎性细胞激活以及炎性因子释放导致胰岛素靶细胞敏感性下降,形成胰岛素抵抗,即2型糖尿病前期。沉默信息调节因子相关酶类1(SIRT1)是一种组蛋白脱乙酰化酶,在哺乳动物糖脂能量代谢和生命活动中扮演重要角色;核因子κB可诱导多种炎性细胞因子,是炎性反应和细胞生存的枢纽环节。该文主要讨论SIRT1通过调节核因子κB的表达作用于2型糖尿病的发病,为2型糖尿病的预防以及治疗提供更多理论基础。     

阴道毛滴虫RRas基因的cDNA克隆和原核表达

目的克隆和表达阴道毛滴虫RRas(TvRRas)基因,以便进一步探讨其组织定位及功能。方法应用PCR方法从构建的阴道毛滴虫cDNA表达文库中扩增TvRRas基因片段,克隆至pGEM-T载体,经PCR、酶切和测序鉴定后亚克隆至原核表达载体pET-41a,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21,经异丙基硫代--βD-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,镍-硝基三乙酸(Ni-NTA)柱纯化表达产物后用SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行分析鉴定。结果从阴道毛滴虫cDNA表达文库中扩增的TvRRas基因片段长522bp,酶切及DNA测序证实pET-41a/TvRRas重组质粒构建正确,表达融合蛋白分子量约为45000u。结论成功构建重组原核表达质粒pET-41a/TvRRas,并能在大肠埃希菌内表达,所表达的融合蛋白分子量大小与预期一致。     

阴道毛滴虫衰老生物学标志分子β-半乳糖苷酶基因克隆和蛋白表达

目的:克隆并分析阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis,Tv)衰老生物学标志分子β-半乳糖苷酶(β-gal)同源基因,表达β-GAL重组蛋白。方法:从Tv cDNA表达文库中分离获得Tv β-gal同源基因的cDNA克隆,测序和序列分析。将cDNA部分片段亚克隆到原核表达载体(pQE-80L),转化宿主菌E.coli SG13009,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析鉴定。结果:在Tv cDNA文库中获得1株2445 bp的cDNA克隆。序列分析表明,该序列开放读码框有2415 bp,推测肽链具有804个氨基酸,等电点为5.4;该肽链与多种来源的β-GAL同源蛋白均具有较高同源性。用PCR扩增了该cDNA序列中的2277 bp片段,构建了pQE-80L/Tv β-gal,所表达重组蛋白产物的相对分子质量为82 ku。结论:推测该克隆是Tv β-gal的同源基因,Tv β-gal基因可以在E.coli中得到表达,为进一步研究其细胞内定位和蛋白功能奠定了基础。     

芪苈强心胶囊治疗慢性心力衰竭大鼠的实验研究

目的 观察芪苈强心胶囊对慢性心力衰竭大鼠心功能及凋亡蛋白caspase-3的影响,探讨治疗慢性心力衰竭的作用机制. 方法 结扎大鼠冠状动脉左前降支,建立AMI模型,存活者随机分为模型组、芪苈强心胶囊高、中、低剂量组(简称高、中、低剂量组)和卡托普利组,另设假手术组.芪苈强心胶囊组术后予药粉1.2g/(kg·d)、0.6g/(kg·d)、0.3g/(kg·d)治疗,卡托普利组予卡托普利25mg/(kg·d)治疗,模型组和假手术组仅予等体积生理盐水,治疗4周后对相关指标进行检测. 结果 与模型组相比,芪苈强心胶囊能有效降低各治疗组体重(BW)、心脏质量指数(HMI)、左心室质量指数(LVMI)及左心室舒张末压(LVEDP),有效增加左心室收缩末压(LVSP)左心室最大压力上升及下降速度(±dp/dtmax),以高剂量组较为明显;模型组caspase-3蛋白表达较假手术组显著增加,芪苈强心胶囊治疗高、中剂量组较模型组显著降低. 结论 芪苈强心胶囊治疗能明显改善AMI心力衰竭大鼠心功能,下调caspase-3蛋白表达水平,有效抑制心力衰竭后心肌细胞凋亡.推测芪苈强心胶囊能有效改善心功能的作用机制可能与其抑制心肌重构及心肌细胞凋亡有关.     

阴道毛滴虫硫氧还原蛋白过氧化物酶的cDNA克隆及序列分析

目的获取阴道毛滴虫硫氧还原蛋白过氧化物酶的cDNA克隆,研究其还原烷基氢过氧化物和氢过氧化物的抗氧化作用,以及调节由氢过氧化物介导的信号转换. 方法提取阴道毛滴虫的总RNA,用λTripIEx2噬菌体载体构建cDNA表达文库,阳性质粒cDNA克隆进行测序,并用生物软件RPS-Blast,NCBI Blast和ClustalW等对6个读码框架进行序列分析. 结果获得一株开放阅读框为588对碱基的cDNA克隆,推测肽链有196个氨基酸.序列分析表明,该肽链与衣滴虫过氧化物氧化还原酶(Prx1蛋白)及人的自然杀伤增强因子B分别有56%和61%的同源性;除了两个高度保守的半胱氨酸作用基序外,还有蛋白激酶C磷酸化和酪氨酸激酶磷酸化作用基序,N-豆蔻酰化作用位点,脂质运载蛋白信号位点等. 结论该蛋白有＞56%的可能性位于胞浆,和典型2-Cys Prx亚家族有很高(56%～62%)的同源性,很可能是其中的一个新成员.     

包虫病免疫预防浅谈

包虫病是由棘球绦虫的幼虫感染引起的一种人兽共患病 ,在我国以囊性包虫病为主 ,主要在我国西部和北部的新疆、甘肃、青海、宁夏、陕西、西藏、四川和内蒙古等 8省 (自治区 )的牧区流行。但近年的报道资料显示包虫病呈现由牧业区向农业区和城区扩散 ,由我国的西部和北部向东部和南部蔓延的趋势。除上述 8省 (区 )外 ,原发性包虫病例也在云南、山西、河南、河北、黑龙江、山东、天津、安徽、湖北、湖南、贵州和广东等 12省 (市 )出现 ;至今有病例报告的省、市、自治区已达 2 5个 [1,2 ]。至 1992年全国报道的手术病例数已达 2 7716例 [3 ] ,…     

细粒棘球绦虫EgA31疫苗的分子生物学特征

免疫预防是控制棘球蚴病经济、快速且有效的方法。近年来棘球蚴病的免疫学和疫苗研制方面均取得了很大进展，分子疫苗成为预防包虫病流行较理想的方法。其中细粒棘球绦虫EgA31疫苗是一有希望的疫苗候选分子，本文从EgA31抗原的基因结构和免疫特性等方面介绍了其分子生物学特征。