广东人群MSX1编码区（G267C和P278S）突变与非综合征性唇腭裂相关性研究

目的探讨MSX1基因编码区突变G267C和P278S与广东人群非综合征性唇腭裂（NSCL/P）发病的相关性。方法收集广东籍NSCL/P患儿100名及健康对照者91名的外周血,提取基因组DNA,应用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱技术（MALDI-TOF-MS）对MSX1基因编码区G267C和P278S突变进行研究。结果 G267C（799G〉T）和P278S（832C〉T）的突变在本次研究的广东人群中并未发现。结论 MSX1基因编码区G267C和P278S突变与中国广东人群NSCL/P没有明显的相关性。     

弓形虫RH株微线体蛋白MIC3基因的克隆与表达

目的 克隆和表达弓形虫微线体蛋白MIC3基因。方法 从弓形虫RH株分离总的RNA,反转成cDNA.根据MIC3基因序列,设计合成一对引物,用聚合酶链式反应(PCR)方法从弓形虫cDNA中扩增MIC3基因片段,插入pGEM-T载体,并转化大肠杆菌Top10,经PCR、双酶切、测序验证后,将MIC3基因片段定向亚克隆到载体pET-28a中构建原核表达重组质粒pET-28a-MIC3,重组子在E.coli BL21中经IPTG诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果 从弓形虫RH株cDNA中扩增出792bp大小的MIC3基因片段并诱导表达27 300 Mr的重组MIC3蛋白。结论 成功构建和表达了弓形虫pET-28a-MIC3重组质粒,为弓形虫病诊断抗原和疫苗的研究莫定了基础。     

血管新生对动脉粥样硬化斑块稳定性影响的研究进展

斑块内血管新生由低氧和炎症等因素诱导形成,在动脉粥样硬化斑块的发生发展中发挥了重要作用。一方面通过加剧炎症反应和诱发斑块内出血,影响斑块的稳定性,从而诱发死亡率极高的急性冠状动脉综合征;另一方面可缓解斑块内低氧状态,减少细胞坏死,为斑块内有害物质的移出提供通道。抗血管生成治疗虽已投入临床应用,但在动脉粥样硬化方面进展甚小。本文就斑块内新生血管形成发生机制、血管新生对动脉粥样硬化斑块稳定性的影响及其相关临床应用进展作一综述。     

槲皮素对大鼠卵巢发育和卵巢寿命的影响

背景:研究发现一些植物雌激素可改变生殖系统发育,并可能最终影响生殖衰老的年龄.槲皮素是一种黄酮类物质,具有微弱的雌激素效应,但对卵巢卵泡发育和卵巢衰老进程究竟有无影响还不清楚.目的:观察槲皮素对大鼠卵巢卵泡发育和卵巢寿命的影响.方法:健康成年SD大鼠30只雌雄按2:1合笼所生的新生雌鼠,分为3组:母鼠灌胃组,对孕10.5 d母鼠槲皮素灌胃,1次/d,直至分娩,取1,2,4 d新生雌鼠;腹腔注射组,对正常出生后12 h内新生雌鼠槲皮素腹腔注射,1次/d,取2,4 d新生雌鼠:空白对照组:不进行任何干预的1,2,4 d新生雌鼠;观察新生鼠卵巢发育情况.另取12月龄雌性大鼠22只,以数字表法随机分为实验组和对照组:实验组用槲皮素灌胃4个月/1次/d.对照组灌胃给予生理盐水.对灌胃前和灌胃期间12月龄雌性大鼠行阴道涂片,观察大鼠动情周期模式:灌胃结束后,计算卵巢和子宫系数,苏木精一伊红染色观察各期卵泡发育情况和卵泡总擞变化.结果与结论:用槲皮索干预1,2 d龄新生大鼠未装配的卵泡均减少,而发育更晚期阶段的卵泡即原始卵泡或发育卵泡有所增加.灌胃前大部分大鼠动情周期已经不规则,用药后,随着大鼠年龄的增长,实验组与对照组显示了相似的动情周期变化:规则的动情逐渐消失,周期变得延长或不规则,灌胃结束时均以不规则动情为主.灌胃4个月后,实验组大鼠卵巢大部分由闭锁卵泡组成,另外可见少许原始卵泡、发育卵泡以及窦状卵泡和黄体,实验组窦状卵泡较对照组增加(P<0.05),两组卵巢和子宫系数及体质量增加无差异.提示槲皮素可能具有一定促进卵巢卵泡发育和成熟的作用,但不影响卵巢寿命.     

肥胖通过抑制SIRT1信号加速大鼠卵泡的发育与消耗

目的：研究肥胖与能量限制（CR）对大鼠卵泡发育和卵巢寿命的影响及其作用机制。方法：雌性SD大鼠随机分为对照（NC）组（自由取食）、高脂（HF）组（自由取食添加20%猪油的标准饲料）、CR组（摄食NC组70%的饲料）,每周测重,每天检测进食量和阴道涂片观察大鼠动情周期;苏木精-伊红染色观察卵泡发育和各级卵泡计数,Western blot检测SIRT1和其下游靶分子FOXO3a蛋白表达水平。结果：HF组体质量、内脏脂肪和卵巢质量均高于NC和CR组（P〈0.05）。HF组存活卵泡总数与NC组比无统计学意义,但原始卵泡数（22.1±0.7）及比例（10.3%±0.2%）相对于NC组（43.6±0.6,23.0%±0.2%）显著减少（P〈0.05）,而发育卵泡数（106.8±2.5 vs 81.0±1.8;P〈0.01）、闭锁卵泡数（79.2±0.9 vs 63.6±1.0;P〈0.01）和黄体数（36.1±1.4 vs 20.5±1.8;P〈0.05）均增多。CR组存活卵泡总数（138.9±1.2）、黄体数（28.6±1.5）和原始卵泡数（62.8±1.4）及比例（32.7%±0.4%）均显著增加,闭锁卵泡数（53.2±0.9）及比例（27.4%±0.3%）均减少。Western blot结果显示HF组卵巢SIRT1和FOXO3a蛋白表达低于NC组（P〈0.05）,而CR组SIRT1和FOXO3a表达高于NC组（P〈0.05）。结论：肥胖可能通过抑制SIRT1信号加速卵巢卵泡的发育与消耗,从而导致卵巢早衰;相反CR可能通过激活SIRT1信号抑制原始卵泡的发育启动以及各级卵泡的发育与闭锁,保持卵巢中卵泡的储备量,以此延长卵巢寿命。     

氧化性低密度脂蛋白对肝细胞脂肪积累及SIRT1-LXR信号通路的影响

目的探讨氧化性低密度脂蛋白（αLDL）对肝细胞内脂肪积累及SIRT1-LXR信号通路的影响。方法实验分为对照组、高脂（HF）组、αLDL组、HF＋αLDL组和能量限制（CR）组。将HepG2细胞培养于DMEM培养基中,培养48h后用油红O染色法定性观察和测定各组OD值、细胞内脂肪积累,并用RT—PCR法检测各组SIRT1、肝x受体（LXR）及其靶基因ATP结合盒转运蛋白G1（ABCG1）的表达水平。结果与对照组比较,HF组、αLDL组和HF＋αLDL组细胞内脂肪含量均增加（P〈0．05）,CR组脂肪含量下降（P〈0．05）。αLDL组与对照组比较,SIRT1、LXRct和ABCG1mRNA表达均增加,其中SIRT1和LXRα差异有统计学意义：HF组SIRT1和LXRα表达与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）,而ABCG1显著降低（P〈0．05）;HF＋αLDL组LXRα和ABCG1表达均显著降低（P〈0．05）,而SIRT1与对照组比较差异无统计学意义;CR组LXRα和ABCG1表达均显著增加（P〈0．05）,然而SIRT1与对照组比较差异无统计学意义。结论αLDL可能会促进脂肪肝的形成。     

短期能量限制对成年雌性大鼠生殖寿命的影响

目的：探讨短期能量限制对雌性大鼠生殖寿命的影响。方法：21只8周龄雌性sD大鼠随机分为对照组和能量限制组,并监测大鼠体质量及动情周期变化,8周后取大鼠卵巢,其切片由苏木精．伊红染色,观察存活卵泡数和不同发育阶段的卵泡比例。结果：对照组体质量持续上升,能量限制组较平缓。能量限制组健康卵泡（135．3．4±11．7）比对照组（90．7±7．1）多（P〈0．05）,原始卵泡数（57．7±7．7）与对照组（19．4±4．0）比显著增多（P〈0．001）,原始卵泡比例（41．9±2．9）比对照组（20．5±3．5）要多（P〈0．01）,而发育和成熟卵泡比例与对照组比则降低。结论：短期能量限制可能通过抑制卵泡发育启动、减少每个周期成熟卵泡的个数来降低卵泡消耗,有益于生殖寿命延长。     

一个含有25 bp内含子的阴道毛滴虫Rab1-like新基因

目的 克隆和鉴定一个新的阴道毛滴虫Rab1-like基因(TvRab1-like)及其内含子.方法 我们从一阴道毛滴虫cDNA表达文库中分离出一个cDNA克隆,它与各物种的Rab家族蛋白有较高的同源性,因此我们进一步用BLASTP、RPS-BLAST、ClustalW和MEGA3等分析软件对该cDNA克隆进行了序列分析和进化树分析;用PCR和RT-PCR等技术分别对该基因组和mRNA进行了扩增和测序分析.结果 序列分析结果表明该cDNA克隆长705 bp,开放阅读框具603 bp,推测肽链含有200个氨基酸.序列比较分析结果提示该cDNA克隆所推测的蛋白质是一个Rab1亚家族的亚型.进化树分析也表明它属于阴道毛滴虫Rab1亚家族.基因组PCR扩增和测序分析表明该基因包含一个25 bp的内含子,该内含子具有阴道毛滴虫和其它真核生物较大内含子所具备的典型的5'GT-AG-3'和分支位点基序.RT-PCR产物及其测序分析表明在该基因的转录本中存在着未剪切和剪切后的mRNA,说明确实有内含子的存在.结论 TvRab1-like基因属于阴道毛滴虫Rab1亚家族,该基因含有一个25 bp的内含子.该内含子是至今发现的最小的阴道毛滴虫基因内含子之一,很可能也是真核生物中最小的内含子.对诸类最低等真核生物内含子的研究将有助于我们理解真核生物内含子的起源和进化.     

阴道毛滴虫两个Sir2同源基因的克隆和功能

目的探讨寄生性原虫阴道毛滴虫细胞生长和衰老的相关基因。方法从阴道毛滴虫的cDNA表达文库中分离出两个与酵母沉寂信息调节因子（Sir2）有较高同源性的cDNA克隆,分别命名为TvSir2和TvSir2-like,它们的编码框分别长915bp和1116bp。结果序列分析显示这两个cDNA克隆与酵母Sir2同源性很高,其氨基酸序列中含有Sir2p及其同源蛋白三个特征性保守结构域。分别从这两株cDNA克隆中扩增出表达片段植入表达载体pET-41a,转化宿主菌E.coli BL21并用IPTG（isopropylthio-β-D-galactoside）诱导表达到大量融合蛋白。用亲和层析法纯化的融合蛋白分别免疫豚鼠,获得的抗血清用Western-blot法识别到滴虫虫体全蛋白中大小为34000Mr和42000 Mr的条带。免疫荧光法检测TvSir2和TvSir2-like蛋白位于细胞核外的内质网和高尔基复合体区域。结论TvSir2和TvSir2-like克隆是酵酶Sir2的同源基因,为TvSir2和TvSir2-like在模式生物阴道毛滴虫的功能研究奠定了基础。     

几种化疗药物杀原头蚴的效果比较

离体试验0.062～0.25％新洁尔灭,0.125～O.25％醋酸,O.1～O.2％安替福民和0.05～0.2％麝香草酚溶液均具有较强的杀原头蚴作用。均在5～10分钟内可达到100％杀死原头蚴的效果,作用迅速可靠,毒性小。原头蚴与药液接触后可在2～3分钟内出现皮层起泡、起刺、皮层分离、溶解及虫体发暗、钙粒减少等形态结构变化,原头蚴经药液处理10分钟后,给小白鼠腹腔接种,均未发育成棘球蚴。原头蚴经10％甲醛和3％双氧水溶液处理10分钟,死亡率(染色法的着色率)分别为5.2％和O,用5％甲醛和1.5％双氧水溶液处理原头蚴10分钟后接种小鼠腹腔其感染率分别为16.6％和22.2％。