应用抑制性消减杂交在阴道毛滴虫筛选热卡限制相关差异表达基因

热卡限制能使众多实验动物的寿命延长,而且它是唯一延缓哺乳动物衰老的途径.我们用原生动物阴道毛滴虫建立了热卡限制模型.在此研究体系中,该原生动物细胞周期在热卡限制的培养条件下较糖充足的培养条件下延长80%.本研究运用抑制性消减杂交的方法,以期筛选在两种培养条件下差异表达的基因,并从2个cDNA消减杂交文库中分离到15个克隆.经序列分析表明,有9个未知基因,6个已知基因.     

转录因子YY1对口腔鳞癌细胞ITGB6基因表达的影响

 目的：研究肿瘤相关转录因子YY1 对口腔鳞癌细胞整合素β6（integrin β6, ITGB6）基因表达调控的影响。方法：用生物信息学方法预测分布在ITGB6启动子区域的转录因子YY1潜在的结合位点,构建萤光素酶报告基因质粒,利用双萤光素酶报告基因系统检测ITGB6启动子片段的转录活性;利用染色质免疫沉淀技术检测在天然染色质条件下转录因子YY1与ITGB6启动子的结合情况;采用定点突变方法检测YY1结合位点对ITGB6启动子活性的影响;利用RT-PCR方法检测过表达转录因子YY1对口腔鳞癌细胞ITGB6 mRNA表达水平的影响。结果：ITGB6启动子-421~-150 nt区域存在多个转录因子YY1潜在的结合位点。在口腔鳞癌细胞的天然染色质中,转录因子YY1结合于ITGB6启动子-421~-150 nt区域;定点突变YY1潜在结合位点对口腔鳞癌细胞中ITGB6启动子活性无显著影响。另外,过表达的YY1对口腔鳞癌细胞ITGB6 mRNA的表达水平也无影响。结论:转录因子YY1在口腔鳞癌细胞中结合于ITGB6基因启动子-421~-150 nt区域,但对ITGB6基因的基础转录水平无影响。     

哺乳类沉默信息调节因子1激活剂可上调肝X受体α-趋化因子受体7泡沫细胞移出信号和抑制炎症信号通路

目的：研究哺乳类沉默信息调节因子（SIRT）1参与调控单核细胞（U937）源性泡沫细胞从动脉粥样硬化斑块移出信号通路及其机制。方法：在体外模拟限制泡沫细胞移出的条件下检测泡沫细胞中SIRT1、肝X受体（LXR）α、趋化因子受体（CCR）7和转录核因子（NF）-κb的蛋白表达。结果：在SIRT1激动剂SRT1720激活下,SIRT1、LXRα和CCR7的蛋白表达水平上调,而NF-κb表达下调。SIRT1抑制剂尼克酰胺可阻断SRT1720的调节作用。结论：SIRT1可能通过上调LXRα-CCR7信号和抑制NF-κb炎症信号通路正向调节泡沫细胞的移出作用。     

合成衣原体属特异LPS决定簇糖结合物的抗原性分析

合成衣原体属特异脂多糖（ＬＰＳ）的四糖链α－２－酮基－３－脱氧辛酸（ＫＤＯ）（２→８）－α－ＫＤＯ（２→４）－α－ＫＤＯ（２→６）－β－ＧｌｃＮＡｃ与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）共价结合，制成糖－ＢＳＡ结合物抗原，用其免疫小鼠所制备的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）经间接血凝试验、血凝抑制试验、ＥＬＩＳＡ、免疫荧光试验和免疫印渍等试验分析，结果把这些ＭｃＡｂ分为两组：一组与衣原体ＬＰＳ和Ｒｅ型ＬＰＳ有交叉反应；另一组为衣原体特异性抗体，其中ＫＤＯ３特异抗体与衣原体原体ＭｃＡｂ有共同决定簇特异性，但亲和力却高于后者１００多倍。表明合成糖－ＢＳＡ结合物与衣原体ＬＰＳ有相似的抗原性。     

一种新的阴道毛滴虫铁氧还蛋白基因

目的 铁氧还蛋白系铁硫蛋白，在多种反应体系中起着传递电子的作用，也参与抗滴虫药物甲硝咪唑杀虫作用的激活。本研究旨在克隆和分析阴道毛滴虫铁氧还蛋白基因，以便进一步探讨其生理功能。方法 构建阴道毛滴虫cDNA表达文库，分离cDNA进行克隆、测序及序列分析。结果 在分离出的cDNA克隆中发现一个新的铁氧还蛋白基因。该基因读码框全长312bp，相应蛋白质序列具103个氨基酸；在该蛋白质前体的N端带有10个氨基酸残基的氢酶体靶片段(MLSQCSPLRF)。序列分析显示该铁氧还蛋白(TvFd2)与已报道的阴道毛滴虫铁氧还蛋白(TvFd)有高度同源性(69％)；TvFd2与铁氧还蛋白(2Fe-2S)的两大亚类(氧化酶铁氧还蛋白和光合铁氧还蛋白)均具较低的同源性；可与(2Fe-2S)结合的4个半胱氨酸排列成典型的铁氧还蛋白保守序列(-C-X5-C-X2-C-Xn-C-)。结论 分析表明TvFd2是一新的阴道毛滴虫铁氧还蛋白，其功能有待进一步研究。     

长期能量限制对成年雌性大鼠生殖寿命的影响

目的探讨长期能量限制对成年雌性大鼠生殖寿命的影响。方法 6月龄雌性SD大鼠30只,分为正常饮食组、能量限制(CR)20%组和CR40%组,记录正常饮食(NC)组每日摄食量,并将此摄食量的80%和60%分别喂养CR20%组和CR40%组大鼠,监测大鼠体重及动情周期变化,12个月后取大鼠卵巢。卵巢组织切片由苏木精-伊红染色,观察卵泡储备数量和不同发育阶段的卵泡比例。结果 NC组体重持续上升,而CR20%组体重小幅增加,CR40%组体重持续下降。CR40%组大鼠的卵泡储备数量(105.7±9.5)和原始卵泡数(55.0±6.8)与NC组(51.2±5.4,18.3±3.7)相比差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.001),原始卵泡比例(52.1%±2.9%)与对照组(35.8%±5.5%)相比差异有统计学意义(P<0.001),而成熟卵泡比例(6.8%±1.9%)和发育卵泡比例(41.2%±3.0%)与NC组(15.6%±6.2%,48.9%±4.2%)相比差异亦有统计学意义(P<0.001,P<0.05)。CR20%组卵泡储备数量和不同发育阶段的卵泡比例与NC组相比差异无统计学意义。结论长期能量限制可能通过抑制卵泡发育启动、减少发育卵泡和成熟卵泡的数量,从而减少卵泡的消耗,有益于生殖寿命延长。     

能量限制条件下SIRT1和SIRT2的表达变化

目的研究不同程度的能量限制(CR)下,大鼠脑组织中SIRT1和SIRT2的表达变化。方法 60只大鼠随机分成四组:正常对照组、75%CR组(喂养食物为正常对照组的75%),55%CR组(喂养食物为正常对照组的55%)和高脂组,喂养8周。免疫组织化学检测大鼠脑组织中SIRT1和SIRT2的表达与定位。RT-PCR及Western-blot检测各实验组中SIRT1、SIRT2的表达。结果在大鼠脑组织中发现SIRT1可于细胞浆和细胞核中表达,且主要于细胞核中表达;SIRT2主要在细胞核中表达。能量限制下,与对照组相比SIRT1表达升高;高脂食物条件下,SIRT1表达相对于对照组增高,但是比CR组减少。75%CR与55%CR相比,后者中的SIRT1的表达增加更多。与对照组相比,55%CR增加SIRT1的表达差异有统计学意义(P<0.05),而75%CR和HFa增加SIRT1的表达差异无统计学意义。SIRT2在CR和HFa下表达无明显变化。结论 CR能增加SIRT1而不增加SIRT2的表达,重度CR比中等程度CR对SIRT1表达的影响更大。     

染料木素对成年及老年大鼠卵巢发育的影响

目的 探讨染料木素对中年、早期老年大鼠卵泡发育的影响.方法 用染料木素对4和10个月龄大鼠进行灌胃[160 mg/(kg·d)],连续用药4周后处死,分别取染料木素灌胃组(试验组)和对照组大鼠双侧卵巢,用苏木素-伊红(hematoxylin-eoxin,HE)染色观察不同发育阶段卵泡比例,同时对9～10个月龄大鼠行阴道涂片,观察其动情周期变化,连续6周.结果 在染料木素灌胃组的4个月龄大鼠卵巢内原始卵泡、次级卵泡的比例升高,窦状卵泡、闭锁卵泡的比例下降;在染料木素灌胃组的10个月龄大鼠卵巢内原始卵泡、次级卵泡的比例升高,闲锁卵泡的比例下降,且灌胃组的10个月龄大鼠维持着规则的动情周期.结论 染料木素能延迟中年、早期老年期大鼠卵巢内原始卵泡发育启动,抑制各级卵泡闭锁,而可能有益于延长卵巢的生殖寿命.     

广东人群MSX1编码区（G267C和P278S）突变与非综合征性唇腭裂相关性研究

目的探讨MSX1基因编码区突变G267C和P278S与广东人群非综合征性唇腭裂（NSCL/P）发病的相关性。方法收集广东籍NSCL/P患儿100名及健康对照者91名的外周血,提取基因组DNA,应用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱技术（MALDI-TOF-MS）对MSX1基因编码区G267C和P278S突变进行研究。结果 G267C（799G〉T）和P278S（832C〉T）的突变在本次研究的广东人群中并未发现。结论 MSX1基因编码区G267C和P278S突变与中国广东人群NSCL/P没有明显的相关性。     

弓形虫RH株微线体蛋白MIC3基因的克隆与表达

目的 克隆和表达弓形虫微线体蛋白MIC3基因。方法 从弓形虫RH株分离总的RNA,反转成cDNA.根据MIC3基因序列,设计合成一对引物,用聚合酶链式反应(PCR)方法从弓形虫cDNA中扩增MIC3基因片段,插入pGEM-T载体,并转化大肠杆菌Top10,经PCR、双酶切、测序验证后,将MIC3基因片段定向亚克隆到载体pET-28a中构建原核表达重组质粒pET-28a-MIC3,重组子在E.coli BL21中经IPTG诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果 从弓形虫RH株cDNA中扩增出792bp大小的MIC3基因片段并诱导表达27 300 Mr的重组MIC3蛋白。结论 成功构建和表达了弓形虫pET-28a-MIC3重组质粒,为弓形虫病诊断抗原和疫苗的研究莫定了基础。