能量限制诱导的Sirt1高表达对胰岛β细胞的寿命及胰岛素分泌功能的影响

目的:研究能量限制(CR)对大鼠胰岛及胰岛β瘤细胞(NIT-1细胞)寿命和胰岛素分泌功能的影响,为2型糖尿病(T2DM)的发病机制及防治提供实验依据和理论基础。方法:①18月龄健康雄性SD大鼠12只随机分为CR组和对照组,饲养6个月后取胰尾组织进行实验,用免疫组化染色检测胰岛中Sirt1和insulin表达水平,β-半乳糖苷酶(-βGal)染色反映胰岛细胞衰老情况;②NIT-1细胞亦分为对照组和CR组;用RT-PCR、免疫细胞化学染色检测Sirt1的表达变化,用放射免疫及免疫细胞化学检测胰岛素的分泌及表达量的变化,用细胞计数法检测细胞倍增周期的变化。结果:①Sirt1在SD大鼠胰岛及NIT-1细胞的胞浆胞核中均有表达,CR组Sirt1表达量均增加;②CR可使大鼠胰岛-βGal染色阳性率下降、NIT-1细胞倍增周期延长;③CR可使大鼠胰岛及NIT-1细胞胰岛素表达量明显减少,NIT-1细胞胰岛素分泌量亦明显减少。结论:CR通过上调Sirt1基因的表达而延缓β细胞的衰老,CR还通过减少胰岛素的表达及分泌从而减少胰岛素信号的刺激,减轻β细胞的负荷并改善胰岛素的分泌功能,因此CR有利于防止T2DM的发生发展。     

阴道毛滴虫衰老生物学标志分子β-半乳糖苷酶基因克隆和蛋白表达

目的:克隆并分析阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis,Tv)衰老生物学标志分子β-半乳糖苷酶(β-gal)同源基因,表达β-GAL重组蛋白。方法:从Tv cDNA表达文库中分离获得Tv β-gal同源基因的cDNA克隆,测序和序列分析。将cDNA部分片段亚克隆到原核表达载体(pQE-80L),转化宿主菌E.coli SG13009,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析鉴定。结果:在Tv cDNA文库中获得1株2445 bp的cDNA克隆。序列分析表明,该序列开放读码框有2415 bp,推测肽链具有804个氨基酸,等电点为5.4;该肽链与多种来源的β-GAL同源蛋白均具有较高同源性。用PCR扩增了该cDNA序列中的2277 bp片段,构建了pQE-80L/Tv β-gal,所表达重组蛋白产物的相对分子质量为82 ku。结论:推测该克隆是Tv β-gal的同源基因,Tv β-gal基因可以在E.coli中得到表达,为进一步研究其细胞内定位和蛋白功能奠定了基础。     

细粒棘球绦虫66kDa抗原基因在成虫吸盘上的表达

目的　观察细粒棘球绦虫自原头蚴向成虫的生长发育过程中 6 6kDa抗原基因在虫体吸盘上和其它部位表达水平的变化。方法　用重组抗原的抗血清对原头蚴及成虫等不同发育时期的虫体进行免疫组化分析。结果　免疫组化分析显示细粒棘球绦虫 6 6kDa抗原位于各期虫体的皮层和皮下肌层 ,在虫体的表面也发现该抗原的荧光颗粒 ;在经培养 2 0h后的原头蚴和成虫的吸盘上该抗原的含量显著高于虫体的其它部位 ,但在棘球蚴内的原头蚴吸盘上该抗原含量与虫体其它部位一致 ,处于较低的表达水平。结论　原头蚴在向成虫的生长发育过程中当顶突和吸盘翻出时 6 6kDa抗原在吸盘上开始大量产出 ,提示该蛋白质可能与吸盘的吸附功能有关 ;因此该抗原有可能是一有希望的成虫疫苗候选分子。     

一个新的阴道毛滴虫Ras同源cDNA克隆的分离及其特征分析

Ras超家族是由一群具有保守氨基酸基序的GTP结合蛋白组成,作为双向分子开关对细胞的多种功能具有调节重要的作用。本文报告分离得到一个新的阴道毛滴虫Ras cDNA克隆,命名为TvRasC。TvRasC cDNA编码一个194氨基酸的蛋白,与其它Ras亚家族成员蛋白序列的一致性在46 %到52 %之间。序列分析表明,该蛋白序列拥有Ras亚家族保守的结合GTP结构域。进化树分析发现该基因与人类的Rit基因位于同一亚群。由于Rit家族成员不含有CAAX异戊烯化基序,而TvRasC在羧基末端有一个典型的CAAX异戊烯化基序,因此TvRasC不属于Rit家族成员。在TvRasC的效应结构域内,与位于HRas第33位的天冬氨酸对应的氨基酸残基是天冬酰胺,有研究表明这种变化将大大削弱Ras基因家族与下游效应分子Raf的结合能力。因此我们预测TvRasC可能只有低水平的GTP酶活性,这种替换有可能使Raf失去与Ras结合域相互作用,并可能导致有活性有丝分裂蛋白激酶没有刺激效应。有关TvRasC在寄生性阴道毛滴虫原虫中的作用有待进一步研究。     

Sirtuin基因家族与心血管疾病

随着人口老龄化的到来,心血管疾病成为目前全世界最常见的疾病之一,探索预防和治疗这一年龄相关的慢性疾病的新方法越来越引起人们的重视。哺乳动物sirtuin基因家族,具有烟酰胺腺苷酸核酸(nicotimideadenosine dinucleotide,NAD)依赖的组蛋白/非组蛋白脱乙酰基酶活性及二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)核糖转移酶活性,能够直接和间接影响心血管系统,因而被认为是心血管疾病治疗的一个激动靶点。随着对sirtuin研究的深入,人们将逐渐揭示sirtuin家族在心血管系统中的作用,有望开发出sirtuin特异性激动剂并将运用于心血管疾病的预防和治疗中。     

不同月龄大鼠胰岛细胞衰老及胰岛素表达的研究

目的：探讨不同月龄大鼠胰岛细胞衰老的情况及胰岛素的表达。方法：40只大鼠分为4组：新生大鼠组、1个月大鼠组、6个月大鼠组、24个月大鼠组,取大鼠胰腺,行β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色并检测胰岛内p16的表达以反映胰岛细胞衰老,检测胰岛内胰岛素的表达。 结果:随年龄增长,胰岛内p16表达增加,分别为:新生组0;1月组0.00267±0.01534;6月组0.05290±0.01787;24月组 0.24526±0.03191(P<0.01)。β-Gal 染色阳性(阳性率、着色面积、着色深浅程度)增加也与增龄相关,新生组大鼠胰岛β-Gal染色均为阴性,其它各组阳性率1月组为2%,6月组为15%,24月组为100%（P<0.01）。着色面积1月组为0.040,6月组为0.218,24月组为2.118。着色程度1月组为0.04,6月组为0.18,24月组为2.41。结论:随年龄增长,胰岛细胞衰老增加,胰岛素表达减少。     

白藜芦醇-Sirt1 Foxo1调控通路对缺氧心肌细胞的保护作用

目的 研究白藜芦醇-Sirt1-Foxo1调控通路对缺氧心肌细胞的保护作用。方法 将大鼠心肌细胞株H9C2培养48 h后,随机分为5组,即20 μmol/L白藜芦醇(resveratrol,Res)干预组、二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）对照组、40 mmol/L尼克酰胺（nicotinamide,Nam）干预组、Nam空白对照组及正常对照组。培养24 h后终止培养,用RT-PCR法和免疫细胞化学染色法检测Sirt1、Foxo1、p27、Bim mRNA及其蛋白表达水平的变化;用TUNEL法及流式细胞仪（flow cytometer,FCM）分析细胞凋亡和细胞周期。结果 20 μmol/L Res干预组可使Sirt1 mRNA及SIRT1蛋白表达的水平增加。Sirt1可通过抑制Foxo1 mRNA的转录活性而调节其下游基因p27及Bim的表达。SIRT1的高表达可使细胞周期延长,细胞凋亡减少。结论 Res干预可使SIRT1表达增加。Sirt1可能通过对Foxo1及其下游基因Bim、p27的调控,延长心肌细胞的细胞周期,减少其凋亡。     

长期能量限制对成年雌性大鼠生殖寿命的影响

目的探讨长期能量限制对成年雌性大鼠生殖寿命的影响。方法 6月龄雌性SD大鼠30只,分为正常饮食组、能量限制（CR）20%组和CR40%组,记录正常饮食（NC）组每日摄食量,并将此摄食量的80%和60%分别喂养CR20%组和CR40%组大鼠,监测大鼠体重及动情周期变化,12个月后取大鼠卵巢。卵巢组织切片由苏木精-伊红染色,观察卵泡储备数量和不同发育阶段的卵泡比例。结果 NC组体重持续上升,而CR20%组体重小幅增加,CR40%组体重持续下降。CR40%组大鼠的卵泡储备数量（105.7±9.5）和原始卵泡数（55.0±6.8）与NC组（51.2±5.4,18.3±3.7）相比差异均有统计学意义（P〈0.001,P〈0.001）,原始卵泡比例（52.1%±2.9%）与对照组（35.8%±5.5%）相比差异有统计学意义（P〈0.001）,而成熟卵泡比例（6.8%±1.9%）和发育卵泡比例（41.2%±3.0%）与NC组（15.6%±6.2%,48.9%±4.2%）相比差异亦有统计学意义（P〈0.001,P〈0.05）。CR20%组卵泡储备数量和不同发育阶段的卵泡比例与NC组相比差异无统计学意义。结论长期能量限制可能通过抑制卵泡发育启动、减少发育卵泡和成熟卵泡的数量,从而减少卵泡的消耗,有益于生殖寿命延长。     

能量限制下SIRT1高表达对大鼠卵巢生殖寿命的影响

目的观察能量限制后成年大鼠卵巢SIRT1高表达对卵巢功能和寿命的影响。方法 24只10周龄雌性SD大鼠,随机分为35%能量限制组和对照组。对照组不给予特殊处理自由取食,能量限制组予对照组食量的65%,每日调整饲料量,每周称体重。HE染色卵巢组织形态学观察及卵泡分类计数,免疫组织化学法观察SIRT1蛋白定位,Western blot检测SIRT1蛋白表达。结果能量限制组大鼠摄入能量少,体重的增长速度要低于对照组(P0.05),腹部脂肪明显少于对照组(P0.01);卵巢外观形态与对照组无异,原始卵泡数明显多于对照组(P0.01),窦状卵泡少于对照组(P0.01);SIRT1蛋白表达定位于卵母细胞的胞核,弱表达于胞浆,免疫印迹检测显示能量限制诱导大鼠卵巢组织SIRT1高表达,灰度值扫描与对照组有显著性差异(P0.05)。结论内源性SIRT1高表达可能是抑制原始卵泡的转化和发育,能量限制诱导SIRT1高表达可能对于延长卵巢的生殖寿命及提高卵巢的储备有积极作用。     

节肢动物媒介与生物武器

节肢动物作为传播媒介可传播许多种疾病，曾给人类带来巨大灾难。节肢动物作为生物武器的载体在战争中使用的历史非常久远，使用生物武器的目的在于使人和动物发病或破坏农作物及经济作物的生产。由于这类武器制作简单且不易察觉，也受到一些恐怖组织的青睐。中国曾是生物武器的最大受害国，了解生物武器的历史，关注生物武器的发展和现状，时刻保持高度的警惕和充分的准备，是医学及军事医学的一个重要课题。