Pokemon基因siRNA逆转录病毒重组表达质粒的构建及鉴定

目的针对Pokemon基因对于许多肿瘤抑制基因和原癌基因上游的作用，将其作为RNAi的靶基因，构建表达这些siRNA的重组逆转录病毒表达质粒。方法利用Ambion公司的网上设计工具设计针对Pokemon肿瘤基因的4条siRNA序列，并化学合成4对互补的siRNA的DNA片段。将此双链DNA片段克隆到pSilencer 5．1-H1 Retro vector的Bam HⅠ和HindⅢ位点，构建其逆转录病毒重组表达质粒。结果表达人类Pokemon基因的siRNA逆转录病毒重组表达质粒构建成功。结论我们成功构建了人类Pokemon基因的重组逆转录病毒重组表达质粒，为下一步Pokemon基因的RNA干扰提供了实验依据，并且开辟了肿瘤基因治疗的新思路。     

B细胞刺激因子受体融合蛋白改善BXSB狼疮鼠病变的研究

目的 观察腹腔注射B细胞刺激因子受体融合蛋白(BAFF-R-IgG4mut)对狼疮鼠病变的影响.方法 100μl的磷酸盐缓冲液(PBS)、200 μg人IgG4和100 μg BAFF-R-lgG4mut融合蛋白分别经腹腔注入10周龄BXSB狼疮鼠,每周注射3次,共注射5周.分别检测狼疮鼠外周血BAFF水平、外周血和脾脏组织中B220~+CD5~-B细胞、CD3~+CD4~-CD8~+T细胞和CD3~+CD4~+CD8~-T细胞的表达,检测尿蛋白、IgG型抗双链DNA(dsDNA)抗体、肾脏病理损伤指标和狼疮鼠的存活率.以方差分析和X~2检验进行数据统计.结果 实验组9、10、12、15周龄鼠外周血BAFF水平分别是(2.0±1.6)ng/ml、(4.1±2.2)ng/ml、(3.7±1.9)ng/ml、(3.9±1.8)ng/ml,较对照组下降(P<0.01);外周血、脾脏组织中B220~+CD5~-细胞比率较埘照组下降(P<0.01),蛋白尿、IgG型抗dsDNA抗体产生减少,IgG在肾组织沉积及肾组织病理损伤较对照组明显减轻(P<0.01),存活率较对照组延长(P<0.01). 结论 BAFF-R-IgG4mut融合蛋白改善BXSB狼疮鼠病变.     

鼠Ⅲ型肝炎病毒H-2K~K限制性CTL表位的初步鉴定

目的预测和初步鉴定鼠Ⅲ型肝炎病毒(MHV-3)的CTL表位,为基于慢性肝炎病毒抗原表位的免疫治疗奠定理论基础。方法利用超基序、量化基序及人工神经网络方案相结合预测MHV-3 S蛋白的H-2K~K限制性CTL表位;用分子模拟对候选表位肽做进一步筛选;人工合成相关待测表位肽,利用T2-K~K细胞株测定各肽与H-2K~K分子的结合力。结果结合超基序、量化基序、人工神经网络预测结果及分子模拟结果,预测出了4条候选表位肽。MHC亲和力实验表明,在候选的4条表位肽中,IEPYNGVI(141-148)、YELSGYTV(306-313)与H-2K~K呈中等亲和力结合,荧光系数分别为1.25及1.04。结论表位预测的结果与亲和力分析结果一致性较好,两者联合应用初步认为IEPYNGVI(141-148)及YELSGYTV(306-313)为MHV-3 S蛋白H-2K~K限制性CTL表位的可能性最大,为下一步体内鉴定及基于小鼠肝炎病毒抗原表位的免疫治疗奠定基础。     

天蓝淡红链霉菌SIPI 1482及其突变株的研究：I.发酵过程中 …

用光学显微镜和透射电子显微镜，研究天蓝淡红链霉素ＳＩＰＩ １４８２及其突变株ＳＩＰＩ １４８２－ＮＳ－４在发酵过程中细胞形态和超微结构的变化。发现两者最大的不同在于：亲株能合成柔红霉素，产抗期细胞内含物丰富，但脂肪颗粒较少；突变株不能合成柔红霉素，细胞中含有丰富的脂肪颗粒。由于柔红霉素的生物合成与脂肪酸的合成密切相关，提示超微结构中脂肪颗粒的变化可能与柔红霉素的合成有关。     

APL提高H2-D~b限制性天然CTL表位HPV-16E7_(49-57)免疫效应

HPV-16E7_(49-57)是H2-D~b限制性免疫显性CTL表位,是治疗HPV-16相关病变的理想靶标,研制HPV-16多肽疫苗可以参考表位为基础.但天然表位HPV-16E7_(49-57),的肿瘤免疫效果并不理想.对表位进行氨基酸置换修饰,筛选出免疫原性强的修饰多肽配体(APL),对构建HPV-16多肽疫苗有重要的意义.     

学习任务驱动的医学实验课程教学设计

在医学生的实验课程教学中,教学设计多是以教师为主导的单一实验主题的模拟实验技术操作学习,这种被动技能性学习设计方式,影响了学生在实践性教学中的知识抽象化和学习迁移。本文从提高知识认知程度的角度出发,以学习任务驱动学习动机,构建以目标的行动计划模式和以概念图实现理论与实验知识结构化的实验课程教学设计。     

SSX基因家族HLA-A2．1限制性CTL表位预测及其MHC-I亲和力分析

目的 通过对肿瘤基因SSX家族不同成员进行CTL表位预测，并对其与MHC-I亲和力进行分析，为探索基于SSX肿瘤基因家族的免疫治疗奠定基础。方法 利用基于超基序结合量化基序方案开发的HLA-A2．1限制性CTL表位预测软件，对SSX基因家族不同成员进行CTL表位预测，然后合成SSX相关待测表位肽P1（AMTKLGFKA）、P4（AMT-KLGFNV）、P5（AMTKLGFKV）和P6（VMTKLGFKV），再对这些合成肽与MHC-I结合亲和力及其结合物稳定性进行实验分析。结果与实验阳性肽（HBcAg，18～27）相比，除P1外，P4、P5、P6均显示较高的结合亲和力；而结合稳定性实验（DC50）结果显示，P1、P4与阳性对照肽（HBcAg，18～27）DC。均大于8h，而P5和P6的DC50介于2～4h之间。结论 计算机软件预测的CTL表位肽，经过体外亲和力与结合稳定性实验筛选到2条理想的表位肽，为该表位的下一步体内鉴定奠定基础。     

系统性红斑狼疮外周血单个核细胞中铁死亡相关关键基因筛选分析

目的通过生物信息学的方法分析系统性红斑狼疮(SLE)患者PBMCs的差异表达基因, 筛选并分析铁死亡相关关键基因, 从转录水平探索铁死亡参与SLE发病的可能机制。方法从美国国家生物技术信息中心(NCBI)的子数据库基因芯片公共数据库(GEO)检索出符合筛选标准的健康对照组(HC组)和SLE患者(SLE组)的数据集和样本信息, 利用GEO2R、R语言及相关软件包进行分析获得差异表达基因、基因本体论(GO)富集分析和京都基因和基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析结果。利用STRING、Cytoscape等工具分析差异基因的蛋白交互作用网络(PPI), 探索关键基因与通路, 寻找潜在作用靶点。此外, 通过实时荧光定量反转录PCR(RT-qPCR)验证关键基因在SLE中的表达。采用Mann-WhitneyU秩和检验比较2组PBMCs中关键基因的表达差异;采用Spearman秩相关分析探索其与SLE疾病活动度的关系。结果研究纳入了6个数据集, SLE组和HC组的差异基因中与铁死亡相关的基因合计166个。差异基因主要在肺泡巨噬细胞、中性粒细胞、CD49+细胞和CD31+细胞等免疫细胞中特异性...     

蛋白酶体与MHIC—I类抗原的加工呈递

蛋白酶体是普通存在于所有被检测过的细胞中的一种保守的蛋白酶复合物,有着广泛的功能。它在MHC-1类抗原的加工呈递过程中起着非常重要的作用,而MHC-I类抗原的加工呈递效率对肿瘤和胞内感染性疾病的防治特别重要。因此,本文对蛋白酶体的结构、MHC-I类抗原加工呈递的作用及其作用的分子机制研究进展作一综述。