B/T淋巴细胞间抑制信号研究进展

B7-CD28家族共刺激信号分子在T淋巴细胞激活、抑制机体耐受及产生理想的T细胞免疫应答等方面起着关键作用。B7-CD28家族共信号分子已经被集中的研究,并且引起免疫调控领域充分的重视。CD80/CD86/CD28/CTLA-4经典途径的新功能的发现以及这一家族包括B7-H1/B7-DC/PD-1,B7-H2/ICOS,B7-H4和BTLA的新途径的确定,都拓宽了我们对T细胞介导的免疫应答和免疫耐受调控的理解。本文就CTLA-4、PD-1和BTLA对T细胞应答的负性调节以及在维持外周耐受中起作用的研究进展作一综述。     

脊柱神经外科的现状及展望

 神经外科是诊断及治疗中枢、周围、自主神经系统及其骨质、供血结构疾病的医学。神经外科包括颅脑外科、脊柱神经外科、脊髓神经外科和周围神经外科四部分,脊柱神经外科是其中重要的组成部分。国际上最早的腰椎间盘及颈椎间盘突出手术都是由神经外科医师完成。脊柱作为脊髓和神经根的支撑系统,其复杂性及疾病的多样性远超颅骨;再加上人类直立行走的特殊性,脊柱随着年龄的增长发生渐进的退行性改变,故脊柱疾病的发生率很高。脊柱疾病的大部分症状都是脊髓或者脊神经及其分支受累而产生的,无论是减压、融合还是固定,其目的都是解除神经压迫、重建脊柱稳定性、恢复神经功能。脊柱和脊髓不能分成两个问题来处理,须兼顾,不能有所偏颇。因此,神经外科医师应该在脊柱脊髓疾患的诊疗中发挥更大的作用。     

血红素加氧酶和CO在维持CD4+CD25+调节性T细胞介导的外周耐受中的作用

在过去几十年里，人们对共同表达CD4^＋和CD25^＋的调节性T细胞进行了大量研究。Treg的特征性表型在于其能有效地维持外周免疫耐受和改变天然免疫的能力。但是，到目前为止，Treg的作用机制以及它和其他细胞间相互作用以提供免疫调节的机制仍然不清楚。最近的研究表明，血红素加氧酶-1（HO-1）有调节免疫反应的作用，并且HO-1催化产生的副产物一氧化碳，也被证实在Treg抑制性作用中有重要功能。因此，现结合这些研究新进展，对Treg的作用机制作一综述，为Treg的未来研究方向提出新的思路。     

HPV16 CTL表位E749-57以HSP110为分子伴侣的免疫原性研究

目的 探讨以mHSP110为分子伴侣的HPV16 CTL表位E749-57的免疫原性。方法 将mHSP110基因克隆、原核表达和纯化,SDS-PAGE和Western blot鉴定。在热休克状态与E749-57结合形成复合物,高压液相色谱（HPLC）鉴定其结合程度。用mHSP110-E749-57复合物免疫小鼠,IFN-γ胞内染色、MTT法检测小鼠脾细胞中特异CTL。结果 克隆mHSP110片段经DNA序列测定与基因库中其CDS一致,长度为2577 bp;经SDS-PAGE和Western印迹证实mHSP110表达、纯化成功,HPLC分析E749-57能够与mHSP110形成复合物。复合物免疫小鼠的脾淋巴细胞中CD8+IFN-γ+ T细胞的频率、脾淋巴细胞增殖活性明显高于E749-57组、HSP110组和PBS组。复合物免疫小鼠可明显抑制TC-1肿瘤的生长。结论 mHSP110-E749-57复合物能诱导产生特异性CTL并产生抗肿瘤效应。     

颗粒性肽-DNA复合疫苗抗肿瘤免疫的研究

诱导有效的抗肿瘤免疫应答是肿瘤免疫治疗的主要目标 ,由于肽疫苗和DNA疫苗具备较高的安全性和实用性 ,因而成为肿瘤疫苗学领域中发展最为迅速的肿瘤免疫治疗方案之一。但是这两种疫苗形式仍然具有各自的缺点 ,其抗原呈递动力学存在显著差异 ,提示这两种疫苗可能存在互补性。本研究对多肽疫苗和DNA疫苗进行综合 ,设计出新型肽 DNA复合疫苗 ,并以P815A为模式抗原 ,证实了该种新型疫苗激发抗肿瘤免疫的有效性     

十肽表位HPV-16E711-20氨基酸置换修饰的研究

目的 采用氨基酸置换对人乳头状瘤病毒16型口抗原的人白细胞抗原A2分子限制性细胞毒性T细胞表位HPV-16E7 11-20进行修饰和鉴定。方法 运用量化模体方案对置换后的多肽与人白细胞抗原A2分子的结合系数进行比较，以分子模拟方法确定合成序列，采用标准Fmoc方案进行合成与纯化多肽以及标准^51 Cr释放试验检测特异性细胞毒性T细胞诱导活性。结果 修饰多肽符合人白细胞抗原A2分子限制性细胞毒性T细胞的表位要求，十肽YLLDLQPEVT具有特异性细胞毒性T细胞诱导活性。结论 修饰表位YLLDLQPEVT具有更好的结合力和较强的抗原性，可以代替原有序列E7 11-20（YMLDLQPEIT）作为人乳头状瘤病毒感染治疗性肽疫苗分子设计的新表位。     

BTLA蛋白胞外区片段的制备及鉴定

目的克隆人的BTLA蛋白分子的基因胞外区片段(Extracellular region of BTLA，exBTLA)，并在Flp-In CHO系统表达、纯化，用于单克隆抗体的制备或直接进行功能研究。方法用RT-PCR方法制备exBTLA基因，以哺乳细胞高效表达质粒载体pSec／WG为载体构建重组融合exBTLA-Ig Fe／pSec／WG质粒。重组体经双酶切鉴定后，再通过测序鉴定克隆的正确性。采用脂质体法将重组质粒转染Flp-In CHO细胞，G蛋白亲和层析法纯化蛋白。用Western blotting检测BTLA基因胞外区表达的特异性。结果正确构建了exBTLA／pSec／WG重组质粒，并在转染细胞所分泌的上清液中检测出了蛋白片段的表达。利用亲和层析法成功纯化出特异的exBTLA蛋白。结论成功地构建了exBTLA／pSec／WG重组质粒，纯化出exBTLA蛋白，为下一步mAb制备及其功能研究提供实验依据。     

变性高效液相色谱法在FALS突变位点检测中的应用

目的检测一个肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)家系的铜、锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn su-peroxide dismutase,SOD1)基因的突变位点,同时观察变性高效液相色谱法(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)的实用价值.方法对PCR-SSCP检测阴性的外显子,应用DHPLC法及DNA直接测序技术,再次进行SOD1基因的突变位点检测.结果经DHPLC检测,家系成员Ⅲ1SOD1基因的第4外显子有突变峰,DNA直接测序证实存在杂合子,发生了GAA→GGA错义突变,使编码的氨基酸由谷氨酸变为甘氨酸.结论DHPLC技术与PCR-SSCP相比有更高的敏感性,可作为大样本筛查突变位点的一种便捷可靠手段.     

PD-L1蛋白的表达、纯化与鉴定

目的克隆人PD-L1的基因,纯化Flp-In CHO系统表达PD-L1蛋白.方法用RT-PCR方法制备PD-L1基因,以哺乳细胞高效表达质粒载体pSec/WG为载体构建重组PD-L1/pSec/WG质粒,重组体用载体上的通用引物为测序引物,鉴定克隆的正确性.再将鉴定过的重组质粒用脂质体法转化转染Flp-In CHO细胞收集上清,G蛋白亲和层析法纯化蛋白.用免疫印迹法鉴定转化细胞所分泌上清的PD-L1基因的表达.结果正确构建了PD-L1/pSec/WG重组质粒,并且在转化细胞所分泌的上清中检测出了PD-L1基因的表达.亲和层析法成功纯化出PD-L1蛋白,分子量为40×10 3.结论成功地构建了PD-L1/pSec/WG重组质粒,纯化出PD-L1蛋白,可进行下一步mAb制备,进一步研究其功能.     

SARS-CoV S1蛋白在甲醇营养型酵母中表达及鉴定

目的获得保持生物学活性、易于纯化、高产量的严重急性呼吸道综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndrom coronavirus,SARS-CoV)S1蛋白,以便进一步研究S1蛋白及其抗体的功能.方法将SARS-CoV S1基因重组入酵母表达载体pMETαA,经过酶切和测序鉴定后,通过电穿孔法将重组质粒S1-pMETαA转化入宿主酵母菌株PMAD11,使其在甲醇的诱导下表达目的蛋白.最后用覆盖分析法对重组转化子初步分析,SDS-PAGE和Wesntern blotting法鉴定目的蛋白的表达和特异性.结果酶切鉴定和测序结果证实了S1基因成功地克隆到pMETαA载体中;覆盖分析、SDS-PAGE和免疫印迹法证实S1基因得到正确的表达.结论利用酵母表达系统,成功地克隆和表达了SARS-CoV S1蛋白,为进一步纯化该蛋白和研究其功能奠定了基础.