军队医学院校本科生医学免疫学教学体会

<正>医学免疫学是一门研究免疫系统的组织结构和生理功能的科学,它从不同的角度和水平揭示免疫系统识别并消除有害生物及其成分的应答过程和规律,并应用这些规律来阐明疾病发生发展的机制,达到防治疾病的目的。免疫学是生命科学领域发展迅速的前沿学科,其与基础医学及临床医学各个学科的关系极为密切,学员对《医学免疫学》课程的学习,将为其他医学课程的学习,以及从事与疾病诊断和防治有关的工作奠定坚实的基础[1,2]。     

肿瘤抗原MAGE-A亚家族共同B细胞表位预测及分析

目的预测肿瘤抗原MAGE-A亚家族的B细胞表位,为基于多靶点的肿瘤疫苗设计提供依据。方法基于MAGE亚家族各成员蛋白质序列,采用Kyte-Doolittle的亲水性方案,Emini方案,Karplus方案和Jameson-wolf抗原指数方案,并辅以MAGE蛋白的二级结构柔性区域分析,预测MAGE基因家族的B细胞共同表位。结果共预测出了5条共同表位,且部分B细胞表位高度相似或一致。结论二级结构与B细胞表位相结合的预测方法为一种高效、准确的表位预测方法,可为肿瘤治疗性疫苗的设计提供实验依据。     

IL-12对小鼠肥大细胞瘤基因疫苗的免疫学作用

目的 研究小鼠肥大细胞瘤P815基因疫苗和鼠IL-12对该疫苗的免疫学作用。方法 将小鼠肥大细胞瘤P815特异抗原基因P1A克隆到真核表达质粒pCI-neo中；用P815细胞对DBA/2小鼠右腹侧皮下注射，构建P815小鼠肿瘤模型；以重组基因疫苗单独或与鼠IL-12真核表达质粒一起肌肉注射，观察肿瘤的消长，特异细胞毒T淋巴细胞激活和抗全的生成情况。结果 重组基因疫苗在体外有很好的表达，注射后CTL的杀伤效率为40%，IL-12共注射的CTI，杀伤效率达到60%，免疫后，30%小鼠的肿瘤出现消退；同IL-12共注射则有50%的小鼠的肿瘤出现消退，2种情况下都不能检测到任何特异抗体的产生。结论 重组P1A肿瘤疫苗能有效激活机体的肿瘤特异免疫应答；基因疫苗对小鼠P815肿瘤的治疗作用主要归因于细胞免疫；IL-12有增强这种免疫应答的作用。     

基于人／鼠嵌合模型的人黑色素瘤mage-3基因疫苗的免疫学作用

目的：利用人／鼠嵌合模型评价人黑色素瘤基因mage-3基因疫苗的免疫效果。方法：建立并鉴定Trimera动物模型，并用重组质粒mage-3／pCI-neo作为基因疫苗对其进行免疫。检测免疫动物脾细胞CTL的杀伤活性和血清中mage-3特异性抗体。结果：构建的Trimera模型脾脏和腹腔中出现了大量的人淋巴细胞。接种后，Trimera模型体内出现了效价为1：256的mage-3特异抗体。免疫动物CTL体外杀伤实验显示，注射基因疫苗的Trimera小鼠脾脏淋巴细胞对靶细胞LB373的最大杀伤率为50％左右。而对照小鼠只有10％以下的杀伤水平。结论：mage-3是一种理想的肿瘤疫苗，在人源化动物模型中能激发出特异的细胞和体液免疫，对共享mage-3抗原的各种肿瘤细胞的临床治疗提供了实验依据。     

构建重组肿瘤基因疫苗对肿瘤进展及生存率影响的实验结局

目的：利用P815肿瘤动物模型观察IL-12对肿瘤动物模型抗肿瘤作用的效应。方法：将小鼠肥大细胞瘤P815特异抗原基因P1A克隆到真核表达质粒pCI—neo中；用P815细胞对DBA／2小鼠右腹侧皮下注射，构建P815小鼠肿瘤模型；以重组基因疫苗单独或与鼠IL-12真核表达质粒一起肌肉注射，观察肿瘤的消长、特异细胞毒T淋巴细胞激活和抗体的生成情况。结果：重组基因疫苗在体外有很好的表达，注射后细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的杀伤效率为40％，IL-12共注射的CTL杀伤效率达到60％。免疫后，30％小鼠的肿瘤出现消退；同IL-12共注射则有50％的小鼠的肿瘤出现消退。两种情况下都不能检测到任何特异抗体的产生。结论：长期存在的IL-12可以持续刺激机体细胞免疫，使肿瘤的生存环境持续恶化，从而达到治疗肿瘤的目的。     

质粒介导的RNAi抑制SARS-CoV复制和感染

目的研究RNAi作为治疗SARS-CoV感染新策略的可能性。方法选择并克隆针对SARS-CoV编码基因的共同前导序列非结构蛋白-1(Non-structureprotein1,NSP1)的siRNAs;RT-PCR和FACS法检测所选取的siRNAs对NSP1基因抑制的特异性和有效性;利用MTT法检测选取的siRNAs对病毒感染的细胞生存率的影响;空斑形成实验证实在siRNAs存在下病毒量减少情况;RT-PCR和Western-blot法进一步证实感染细胞中S和N基因在mRNA和蛋白水平的表达情况。结果结果显示重组质粒衍生的靶向SARS-CoVNSP1的siRNAs能特异地抑制靶序列表达;在体外培养的VeroE6细胞中能显著抑制SARS-CoV的复制与繁殖。感染1d后,RT-PCR和Western-blot结果显示,同对照组相比,SARS-CoV的S和N基因的mRNA和蛋白质表达均显著减少。结论NSP1序列是SARS-CoV的RNAi策略的有效靶标,这些siRNAs很可能广泛地抑制了SARS-CoV亚基因组的合成及随后的蛋白质表达。     

中和性马抗体对SARS-CoV感染的防治作用

目的探讨马抗SARSCoV中和性抗体是否对SARSCoV感染有防治作用。方法用SARSCoV(BJ01株)免疫马匹,从免疫马血清中制备IgGs及其F(ab’)2片段。通过细胞病变法(CPE)、MTT法和空斑形成实验(PFU)等方法,在体外培养的VeroE6细胞中检测F(ab’)2片段对SARSCoV感染的预防性和治疗性作用。再在Balb/c小鼠体内模型中,用CPE法和定量RTPCR方法检测该抗体的保护性效应。结果CPE、MTT和PFU三种方法证实来自三匹马的血清F(ab’)2的中和滴度均达到1∶1600以上。体内实验证实,50μg的F(ab’)2片段可以完全中和1×104TCID50SARSCoV。结论马抗SARSCoV抗体在体内外均能有效地中和SARSCoV和预防其感染宿主细胞,为马抗体将来在大的灵长类动物或人体内进行实验提供实验依据。     

美国疼痛医学专科医师培训

概述 在过去的30年间,疼痛医学逐渐成为最活跃的一个领域.最近一份来自医学院的报告称,在美国受疼痛困扰的人数高达1亿,尽管每年医疗费用约为5600-6350亿美元,但患者仍然得不到很好的治疗.已知的一个原因就是疼痛医学并未被官方承认,也未发展为一项医学专科,而只是被当作一系列零散的亚专科,因而患者得不到整体的治疗.被美国医学专科学会(ABMS)认证为疼痛医学,将是开展这个新学科的重要因素,并且很大程度上可以增加在业界同仁和大众心中的声望. 目前的培训系统首先包括由三个现存的基础学会认证的一个亚科目,然后是在一个核心专科常规的住院医师培训后接受一年的专业从业人员培训.这个安排有一些缺点,包括缺乏其它专科对于处理疼痛治疗的培训;缺少一个规范化疼痛治疗和培训的专业组织的领导;延长了培训时间但极少接触疼痛医学,这些使得这个方案花费和浪费极大.即使将专业从业人员培训时间延长为2年也无法解决上述问题.     

Alzheimer病Aβ_(1-42)肽和IL-4双基因表达质粒的构建和表达鉴定

目的　构建Alzheimer病Aβ1 - 42 基因和小鼠IL 4共表达质粒 ,探讨其作为Alzheimer病特异疫苗的可能性。方法　全基因合成Aβ1 - 42 基因片段并克隆入pMD18 T载体中 ,再从Aβ1 - 42 pMD18 T重组质粒中切下Aβ1 - 42 基因并克隆入TA CE5真核双表达载体中 ,构建重组质粒Aβ1 - 42 TACE5。从pUMMV mIL4质粒中切下mIL 4并克隆到重组质粒Aβ1 - 42 TACE5中 ,构建双表达重组质粒Aβ1 - 42 mIL 4 TACE5测序鉴定克隆基因的正确性。脂质体试剂Lipofectamine 2 0 0 0体外转染Aβ1 - 42 mIL 4 TACE5重组质粒于BHK 2 1细胞中 ,用ECL Western blot方法鉴定mIL 4和Aβ1 - 42 能在该细胞中共表达。结果　正确构建了Aβ1 - 42 mIL 4 TACE5双表达重组质粒 ,并且在转化此质粒的BHK 2 1细胞中检测出了Aβ1 - 42 和mIL 4的表达。结论　双表达重组质粒Aβ1 - 42 mIL 4 TACE5基本可以满足其作为Alzheimer病特异的候选DNA疫苗的要求 ,为下一步的基因疫苗转基因动物体内免疫学实验提供了实验依据     

医学免疫学实验技术课程MCAI模式探讨

从实验技术课程教学设计和计算机软件工程学的设计理念出发 ,对医学免疫学实验技术课程的教学设计与多媒体学习平台的结构进行探讨 ,并在此基础上提出以培养学生三维知识建构能力为目的 ,运用网络结构进行MCAI软件平台开发为手段 ,从而对实验技术课程进行优化教学的MCAI模式