MAGE-12的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞表位肽的预测及其三维结构构建

[目的]从理论上分析预测肿瘤抗原MAGE- 12(melanoma antigen- 12)的HLA-A2(histocompatility leukocyte antigen-A2)限制性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位肽并构建其三维结构.[方法]以肿瘤特异性抗原MAGE-12为研究目标,采用超基序法、量化基序法、多项式法、延展基序法与三维结构构建相结合的CTL表位预测方法.[结果]预测出的MAGE-12的表位中有4个符合HLA-A2限制性CTL表位要求.[结论]预测出的4个HLA-A2限制性CTL表位为MAGE-12的表位的可能性较大,经后续实验筛选、鉴定后,可用于基于MAGE-12的肿瘤治疗性多肽疫苗的设计研究.     

太钢三所医院医院感染现患率调查报告

本文对太钢三所医院医院感染现患率进行了调查,共调查住院患者837例,实查率98.59％(837/849),查出医院感染36例,现患率为4.30％。本文还结合三所医院消毒工作质量及企业职工医院的特点等对现患率的影响进行了分析。     

重组α-病毒的制备和鉴定

目的 探讨从DNA水平制备重组α-病毒的新途径，寻找更简便的制备重组α-病毒疫苗的新方法。方法 将表达β-半乳糖苷酶的载体和包装载体用磷酸钙法共转染BHK包装细胞，收集并纯化上清中的病毒。再用该病毒在体外感染BHK细胞，鉴定所制备病毒滴度和目的基因的表达情况。结果 用本方法制备出了较高效价的重组病毒，并能在哺乳细胞中很好地表达。结论 从DNA水平可以制备出较高滴度的重组α-病毒，这种方法可以扩展用于基因治疗和疫苗的制备。     

MAGE-12 mRNA在肺癌中的表达及其意义

目的　探讨肺癌组织中MAGE 12mRNA的表达及其意义。方法　采用RT PCR技术 ,检测了MAGE 12在 5 0例临床病人肺癌标本中mRNA水平的表达。结果　 5 0例临床肺癌标本中有 17例表达 (17 5 0 ,3 4% ) ,且肺鳞癌 (15 3 3 ,45 5 % )与肺腺癌 (2 17,11 8% )有显著差异 (P <0 0 5 )。结论　MAGE 12基因在肺癌有较高的表达率 ,基于MAGE 12基因及其产物作为新的疫苗可能是一个有前途的治疗肺癌的免疫治疗方法     

基于重组α-病毒的基因疫苗对小鼠肥大细胞瘤P815的防治作用

目的 :探讨基于α 病毒的基因疫苗的免疫学效应作用 ,寻找更好的基因疫苗形式。方法 :用磷酸钙法共转染表达质粒P1A/pSMART2a和包装质粒helper到 2 93细胞中 ,制备高水平的重组α 病毒P1A/SFV。鉴定病毒及其表达后 ,用其免疫小鼠 ,测定免疫动物体内抗体生成情况和特异CTL的杀伤效应。在预防性和治疗性实验中 ,测定该重组病毒免疫动物后6 0d内动物的无瘤率和生存率。结果 :该重组病毒疫苗在体外培养细胞中有很好的表达。用其免疫动物后 ,P1A/SFV能激发比对照组强得多的CTL杀伤效应。在E/T比为 10 0∶1时 ,P1A/SFV组CTL的杀伤率为 75 %。抗体在所有组别中均未见产生。在保护性和治疗性实验中 ,于 6 0d实验期限内 ,P1A/SFV的效果最好。保护性实验第 6 0天时 ,P1A/SFV组动物的无瘤率达到 6 0 % ;而P1A/ pCI neo组只有2 0 %。在治疗性实验第 6 0天 ,P1A/SFV组小鼠的存活率达到 5 0 %左右 ;而其他对照组都只有 10 %左右。结论 :相对于普通基因疫苗 ,基于重组α 病毒的基因疫苗效果最好 ,为临床肿瘤的基因治疗提供了新的思路     

Pokemon基因siRNA逆转录病毒的制备及其对Hela细胞增殖的影响

目的 针对多种肿瘤细胞高表达Pokemon基因的特性,制备表达针对Pokemon基因的siRNA的逆转录病毒,研究其对感染肿瘤细胞中Pokemon基因沉默情况,探讨肿瘤防治的新方法.方法 首先利用siRNA预测软件得到4条siRNA编码DNA序列,再构建重组逆转录病毒siRNA表达质粒;利用RT-PCR技术筛选出高表达Pokemon基因的肿瘤靶细胞.然后,将重组质粒转染靶细胞,利用实时定量RT-PCR和MTT等方法筛选出沉默效果最佳的siRNA.利用逆转录病毒包装细胞制备重组病毒,鉴定病毒滴度及其对体外培养细胞中Pokemon基因的沉默效应.结果 通过酶切鉴定和测序等方法证实了预测出的四条siRNA编码DNA片段成功地构建到逆转录病毒表达载体pSilencer 5.1-H1中.通过将这些重组质粒转入高表达Pokemon基因的Hela肿瘤细胞中,抗生素压力筛选出相应表达各种siRNA的细胞株,再从中筛选出了1个有50%以上沉默效应的候选siRNA.利用这一条siRNA表达质粒,在逆转录病毒包装细胞中制备出了滴度为105cfu/mL的重组病毒.此重组病毒感染Hela细胞后能显著降低其中Pokemon基因的表达.结论 成功制备了表达人Pokemon基因siRNA的重组逆转录病毒,并且在体外实验中证实了该病毒能对肿瘤细胞Hela的增殖产生明显的抑制作用,为下一步的体内抗肿瘤研究提供了有力的佐证.     

SSX基因家族研究进展

SSX基因家族由9个成员组成，其中SSX-1、SSX-2和SSX-4经常出现在滑膜肉瘤t(X：18)染色体易位的SYT-SSX融合基因中。SSX基因家族可编码肿瘤，睾丸抗原，在睾丸以外的正常组织中，除甲状腺微弱表达外，没有发现它们的存在。HOM-MEL-40是最早用重组cDNA表达库血清学分析技术确定的由SSX-2基因表达的抗原。近来的研究发现蛋白SSX-2 41-49是CD8^ ctl免疫识别的优势表位，而SSX-2 37-58和SSX-2 19-34分别是CD4^ T细胞识别相关的HLA-DR及HLA-DP限制表位。日本学也发现SYT-SSX基因融合蛋白断裂点衍生肽是MHC Ⅰ分子HLA-A24和HLA-B7限制的CTL识别的表位。所有这些研究，证明SSX基因家族编码蛋白是肿瘤免疫治疗有前景的靶标之一。     

SARS-CoV S1蛋白基因克隆及其在Vero E6细胞中的表达

目的：克隆表达SARS-CoV S1蛋白，构建SARS基因疫苗。方法：从SARS病毒的cDNA中以PCR方法扩增编码人SARS-CoV S1蛋白的编码序列，将该序列克隆入真核表达载体pVAX1，构建重组表达载体。采用脂质体法转染Vero E6细胞，用Western blot检测S1蛋白的表达。结果:PCR方法扩增出2000bp左右的基因片段，插入pVAXl构建重组表达载体后，经序列测定证实扩增的片段为SARS-CoV Tor2株S1蛋白编码序列。将重组子转染Vero E6细胞，收集细胞总蛋白，Western检测获得特异蛋白带。结论：成功克隆并表达了SARS-CoV S1蛋白，为其作为SARS基因疫苗研究打下基础。     

非洲爪蟾TGF-β5和小鼠TRP-2联合免疫诱导抗原特异性CTLs

目的 研究非洲爪蟾转化生长因子一β5(aFGF-β5)基因免疫是否能增强肿瘤治疗性DNA疫苗诱导抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞的能力。方法 构建编码小鼠肿瘤抗原酪氨酸酶相关蛋白2(mTRP-2)的真核表达质粒，与aTGF-β5真核表达质粒联合免疫C56BL/6小鼠，采用标准^51Cr释放试验检测抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞的诱导。结果 aTGF-β5和mTRP-2联合免疫可在体外诱导H-2K^b限制的mTRP-2aa180-188特异性细胞毒性T淋巴细胞产生。结论 aTGF-β5免疫能有效提高肿瘤治疗性DNA疫苗诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞的能力。     

人血小板TGFβ的提取纯化及鉴定

目的 建立一种快速、简单、实用的从人血小板提纯化生长因子β（ＴＧＦβ）的方法。方法 改良的白膜回浆法提取人血小板,酸醇抽撮裂解法提取血小板中的ＴＧＦβ及２次凝胶过柱法纯化ＴＧＦ－β。所有提取及纯化步骤均在酸性条件下进行以防止管壁对ＴＧＦβ的吸附和生物活性的影响;使用了易挥发的溶媒和缓冲液便于冻干时去除。结果：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ 泳及薄层分析显示纯化后的ＴＧＦβ纯度达到８９．３８％,在ＥＧＦ参与下１０