人可溶性肿瘤坏死因子受体1基因转染对肿瘤坏死因子α诱导肝细胞凋亡的影响

TNFα能诱导肝细胞凋亡,其过度表达是肝衰竭发生发展过程中的一个重要因素。可溶性TNFα受体1（sTNFR1）可中和TNFα的部分毒性作用。为有效抑制TNFα诱导的细胞凋亡以及治疗肝衰竭,我们拟构建sTNFR1的真核表达载体,并将重组质粒pcDNA3-1（-）sTNFR 1瞬时转染QSG7701细胞,研究其对TNFα诱导细胞凋亡的抑制作用。[第一段]     

氧化苦参碱治疗慢性重度乙型肝炎的临床研究

【目的】观察氧化苦参碱注射液治疗慢性重度乙型肝炎(CHB)的临床疗效。【方法】将80例CHB患者分为两组:治疗组40例,用氧化苦参碱注射液600mg静脉滴注;对照组40例,以古拉定1.2g静脉滴注,疗程8周,治疗前后检测肝功能、乙型肝炎病毒复制标志物HBV DNA和HBeAg,同时观察患者的症状、体征的变化及药物的不良反应。【结果】HBV复制指标HBeAg滴度、HBV DNA拷贝数下降水平治疗组明显高于对照组,有显著性差异(P<0.05);HBV复制指标HBeAg、HBV DNA的转阴率治疗组明显高于对照组,有显著性差异(P<0.05)。治疗结束后AST、ALT、TBil治疗组明显低于对照组,有显著性差异(P<0.05)。【结论】氧化苦参碱对乙型肝炎病毒有抑制作用,是治疗CHB较为有效的中药制剂。     

干扰素α抗乙型肝炎病毒作用的体外实验研究

目的 探讨干扰素的体外抗乙型肝炎病毒作用。方法 以HepG22，2，15为细胞模型，实验共观察9d，于第3、6、9d收集培养上清行HBsAg定量检测；收集细胞提取总RNA，行RT-PCR及荧光实时定量PCR测细胞内乙肝病毒mRNA水平。结果 实验第3d及第6d，对照组和各实验组之间HBsAg及病毒mRNA水平无显著性差异；实验第9d，各实验组HBsAg及病毒mRNA水平均较对照组明显降低，α干扰素浓度为500 IU／ml抑制作用达最大。结论 干扰素在实验浓度下可抑制HepG22，2，15细胞内乙肝病毒基因的转录和表达，具有直接抑制乙肝病毒复制作用。     

丙型肝炎病毒5′端非编码区和NS3蛋白酶共调控外分泌性碱性磷酸酶表达细胞模型的建立及意义

目的构建丙型肝炎病毒5′端非编码区(HCV 5′NCR)和NS3丝氨酸蛋白酶共调控外分泌性碱性磷酸酶(SEAP)表达细胞模型,并分析其用于抗HCV药物筛选和评价的可行性.方法用聚合酶链反应技术扩增HCV 5′NCR和NS3/4A片段,定向克隆至表达质粒pSEAP2-Control的SEAP基因上游,构建含HCV 5′NCR-NS3/4A-SEAP嵌合基因的重组表达质粒pNCR-NS3/4A-SEAP.将重组质粒转染至肝细胞株QSG7701,用化学发光法检测SEAP的表达,并观察HCV 5′NCR区对应的反义寡聚核苷酸(ASODN)和丝氨酸蛋白酶抑制剂TPCK对SEAP表达的影响.结果重组质粒pNCR-NS3/4A-SEAP有高强度SEAP表达,5 μmol/L、10 μmol/L ASODN和100μmol/L TPCK对SEAP表达有显著抑制作用(f值分别为4.315、6.985、6.949,P值均＜0.01).结论重组质粒pNCR-NS3/4A-SEAP的SEAP表达受HCV 5′NCR和NS 3蛋白酶共调控,建立的细胞模型可用于以H CV 5′NCR和NS 3蛋白酶为靶位点的药物筛选和评价.     

人可溶性肿瘤坏死因子受体1基因真核表达载体的构建

目的构建人可溶性肿瘤坏死因子受体1基因(sTNFR1)的真核表达载体,为进一步研究打下基础。方法以Hela细胞的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增人sTNFR1全编码区基因片段,构建含有目的片段的T载体克隆及真核表达载体pCDNA3.1(-)重组质粒亚克隆,并用酶切分析和序列测定进行鉴定。结果经酶切鉴定和测序证实,人sTNFR1基因被正确克隆入真核表达载体pCDNA3.1(-)。结论真核表达质粒pCDNA3.1(-)-sTNFR1的构建为今后的研究打下了基础。     

人工肝支持系统对重型肝炎血清PCT水平及临床转归的影响

目的通过观察人工肝支持系统对重型肝炎血清降钙素原（PCT）水平支持系统治疗的重型肝炎患者（第一组）及35例未行人工肝支的影响，探讨PCT水平改变对重型肝炎临床转归的影响。方法测定46例经人工肝持系统治疗（仅行基础治疗）的重型肝炎患者（第二组）治疗前后、39例慢性乙型肝炎患者（第三组，即对照组）血清PCT水平，并对结果进行统计分析。结果3组患者治疗前均检测了PCT，PCT阳性率：第一组为91．30％，第二组为85．71％，第三组为7．69％；第一组与第二组比较，差异无显著性（x^2=1．89，P〉0．05）；第一组、第二组分别与第三组比较，差异均有显著性（x^2分别为6．82与5．89，P均为0．01）。第一组经人工肝支持系统治疗后PCT阳性率为54．35％，与治疗前91．30％比较，差异有显著性（x^2=4．82，P〈0．05）。治疗好转率：第一组为54．35％，第二组为40．00％，两组比较，差异有显著性（x^2=3．87，P〈0．05）；两组好转患者PCT阳性率分别为24．00％、21．43％，差异无显著性（x^2=2．65，P〉0．05）。结论人工肝支持系统治疗能降低重型肝炎患者PCT水平，PCT可以作为观察重型肝炎治疗效果的指标之一。     

(英文)HBx基因诱发肝细胞癌的实验研究及其机制

目的:在裸鼠体内转入HBx基因的QSG7701细胞株形成移植瘤,并探讨裸鼠成瘤的可能机制.方法:利用已成功构建的高表达HBx基因的pCMVX/QSG7701细胞株作为实验组,以pRcCMV2/QSG7701细胞株和QSG7701细胞株为对照组接种于裸鼠皮下,观察裸鼠能否成瘤.HE染色研究移植瘤的组织形态学特征,以RT-PCR法检测移植瘤组织、pCMVX/QSG7701细胞、pRcCMV2/QSG7701细胞及QSG7701细胞的p53基因和c-Myc基因表达情况.结果:接种pCMVX/QSG7701细胞株的裸鼠在第2周开始出现移植瘤生长,周围器官和组织未发现转移灶.对照组至接种后第35天无移植瘤生长.HE染色证实移植瘤为肝细胞癌组织.移植瘤和pCMVX/QSG7701细胞中突变型p53和c-Myc mRNA的表达量较pRcCMV2/QSG7701细胞和QSG7701细胞明显增高(P＜0.01).结论:HBx基因表达可以直接导致肝细胞癌变;HBx能上调移植瘤和pMVX/QSG7701细胞中突变型p53和c-Myc的表达,并可能通过这一机制导致肝细胞癌变.     

HBx基因缺失型突变体HBx—d382与HBx—d431原核表达载体的构建和鉴定

目的为探讨HBx基因缺失型突变体HBx—d382和HBx—d431在临床上应用的价值,构建HBx基因缺失型突变体HBx-d382和HBx-d431原核表达载体。方法以pGM—T／HBx—d382和pGM—T／HBx-d431质粒为模板．PCR扩增含EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的HBx基因片段。HBx基因PCR扩增产物与载体pET-28a（＋）经双酶切、连接,形成重组DNA后转化到大肠杆菌BL21（DE3）中,经卡那霉素筛选、酶切鉴定和DNA序列测定,筛选出重组HBx基因缺失型突变体原核表达载体。结果成功构建了重组pET-28a（＋）／HBx-d382和pET-28a（＋）HBx-d431原核表达载体,重组前后HBx基因片段序列一致。结论pET-28a（＋）／HBx-d382和pET-28a（＋）／HBx-d431原核表达载体构建成功,为HBx基因缺失型突变体HBx—d382和HBx—d431蛋白的免疫原性和临床应用的研究奠定了基础。     

杀菌性/通透性增加蛋白的研究进展

内毒素是革兰氏阴性菌败血症、感染性休克发生和发展的主要因素,因此,抗内毒素治疗是治疗败血症、感染性休克的重要环节.杀菌性/通透性增加蛋白有较强的杀菌和中和内毒素作用,在抗内毒素治疗中有很好的应用前景.     

苦参碱治疗慢性乙型肝炎的临床研究

目的观察苦参碱注射液治疗慢性乙型肝炎的临床疗效。方法将84例慢性乙型肝炎患者分为两组:治疗组42例,用苦参碱注射液600mg静脉滴注;对照组42例,以阿拓莫兰1.2g静脉滴注,疗程8周,治疗前后检测肝功能、乙型肝炎病毒复制标志物HBVDNA和HBeAg,同时观察患者的症状、体征的变化及药物的不良反应。结果HBV复制指标HBeAg滴度、HBVDNA拷贝数下降水平治疗组明显高于对照组,有显著性差异(P<0.05);HBV复制指标HBeAg、HBVDNA的转阴率治疗组明显高于对照组,有显著性差异(P<0.05)。治疗结束后AST、ALT、TBil治疗组明显低于对照组,有显著性差异(P<0.05)。结论苦参碱对乙型肝炎病毒有抑制作用,是治疗慢性乙型肝炎较为有效的中药制剂。