蛋白酶激活受体激活对A549细胞IL-28和IL-29 mRNA表达的影响

目的用蛋白酶和蛋白酶激活受体激动肽(PAR-AP)刺激A549细胞后检测细胞中白细胞介素IL-28和IL-29 mRNA表达情况以分析蛋白酶激活受体激活对人肺上皮细胞IL-28和IL-29基因表达的影响。方法用最佳工作浓度的凝血酶、胰蛋白酶、类胰蛋白酶及蛋白酶激活受体-1,2,3,4的激动肽刺激A549细胞后,分别在第2、8、16h收集细胞,用实时定量逆转录聚合酶链式反应(q-RT-PCR)方法分析A549细胞内IL-28和IL-29 mRNA表达。结果凝血酶作用A549后,细胞内IL-29 mRNA表达增强,高达对照组9.6倍;而细胞内IL-28 mRNA表达无明显变化。胰蛋白酶作用A549细胞后,细胞内IL-29和IL-28 mRNA表达增强,分别为对照组6.1倍和4.4倍。类胰蛋白酶作用A549细胞后,细胞内IL-29和IL-28 mRNA表达增强分别高达对照组的3.1倍和2.1倍。弹性蛋白酶作用A549细胞后,细胞内IL-29 mRNA表达增强高达对照组5.1倍而IL-28 mR-NA无明显变化。PAR-1AP(SFLLR)作用后,A549细胞内IL-29 mRNA表达增强为对照组1.7倍而IL-2...     

银屑病患者血液嗜酸性粒细胞中IL-18、IL-18结合蛋白和IL-18受体的表达变化及其相关性研究

目的：检测银屑病（psoriasis）患者血液嗜酸性粒细胞群中白介素-１８（interleukin-18,IL-18）、IL-18结合蛋白（binding protein,BP）和IL-18受体（receptor,R）的表达变化,并分析其相关性。方法：收集17例银屑病患者和18例健康人血液,用蒿草花粉、尘螨和梧桐花粉粗提液刺激,流式细胞术检测嗜酸性粒细胞富集群中IL-18、IL-18BP及IL-18R的表达,SPSS分析其相关性。结果：静息状态下,银屑病患者血液嗜酸性粒细胞富集群中IL-18+、IL-18R+ 细胞比例较正常人分别升高了3.7倍和4.1倍（Z=-3.070,P=0.002;Z=-4.753,P=0.000）,而IL-18BP+ 细胞降低了87%（Z=-4.556,P=0.000）;尘螨过敏原刺激银屑病患者血液后,嗜酸性粒细胞富集群中IL-18+ 细胞比例升高约1.5倍（Z=-3.548,P=0.000）;梧桐花粉刺激银屑病患者血液后,嗜酸性粒细胞富集群IL-18BP+ 细胞升高约1.1倍（Z=-3.445,P=0.000）。此外,静息状态下银屑病患者血液嗜酸性粒细胞群中IL-18BP+细胞比例和IL-18+ 细胞比例均呈高度相关,Spearman相关系数分别为r=0.587,P=0.013。结论：上述结果提示嗜酸性粒细胞表达的IL-18、IL-18BP和IL-18R极可能参与银屑病。抗IL-18制剂和IL-18R阻断剂可能是治疗银屑病的潜在靶点。     

过敏性鼻炎患者血液嗜酸性粒细胞FcεRI和CD63表达研究

目的：检测过敏性鼻炎（allergic rhinitis,AR）患者外周血嗜酸性粒细胞FcεRI和CD63的表达。方法：收集AR患者和健康人（healthy controls,HCs）的外周血,用蒿草花粉和尘螨过敏原粗提液刺激,流式细胞仪检测嗜酸性粒细胞富集群中FcεRI和CD63的表达情况。结果：静息状态下,AR患者[0.92%（0.70%~1.64%）]相比于HCs[0.71%（0.43%~0.97%）]嗜酸性粒细胞比例上调（Z=-2.050,P=0.041）;AR患者[6.19%（3.05%,8.19%）;1 462（1 164,1 720）]FcεRI+嗜酸性粒细胞的比例和平均荧光强度（mean fluorescence intensity,MFI）比HCs[3.16%（1.55%,4.53%）;808（524,1308）]增加（Z=-2.102,P=0.036）;AR患者[2 031 （1 725,3 338）]CD63+嗜酸性粒细胞的MFI比HCs[1 491（1 297,1 613）]升高36%（Z=-3.192,P=0.002）。0.1 μg/mL蒿草过敏原粗提液[2 618（2 131,3 315）]和1.0 μg/mL蒿草过敏原粗提液[3 108（2 317,3 792）]能诱导AR患者CD63+嗜酸性粒细胞的MFI上调（Z=-2.667,P=0.008;Z=-2.845,P=0.004）。结论：嗜酸性粒细胞表达的FcεRI和CD63参与AR发病。过敏原特异性嗜酸性粒细胞激发试验检测CD63的表达,可能成为AR诊断的补充实验。     

建立慢性阻塞性肺疾病动物模型方法的研究进展

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种重要的慢性呼吸系统疾病,主要包括慢性支气管炎和肺气肿,患病人数多,病死率高,由于其缓慢进行性发展,严重影响患者的劳动能力和生活质量.为此,国内外许多学者近年来对COPD的发病机制进行了大量的研究工作,但是到目前为止,COPD的研究进展仍然十分缓慢,其主要原因是COPD病因太多,发病机制复杂.本文旨在将国内外有关COPD的实验动物模型进行一次总结,并对各种模型的优缺点给予客观的评价.     

一种高效、快速的大肠杆菌感受态细胞制备及质粒转化方法

目的：建立一种高效、快速的大肠杆菌感受态细胞制备及质粒转化的方法。方法：质粒DNA加入感受态细胞，经短暂冰浴和热休克后，直接涂布预热至37℃的平板。以大肠杆菌DH5α为受体菌，研究CaCl2溶液浓度、感受态细胞的存放时间、转化时间及转化后的培养时间等对质粒转化效率的影响。结果：以100mmol／L CaCl2溶液制备感受态细胞，冰浴转化5min，经42℃热休克作用908后直接涂平板筛选转化子，获得与常规转化方法相当的转化效率。CaCl2溶液浓度和感受态细胞的存放时间对转化效率有明显的影响，而转化时间和转化后的振荡培养时间对转化效率的影响不明显。结论：成功地建立了一种高效、快速的感受态细胞制备及质粒转化的方法。     

人呼吸道粘液分泌体外实验方法的建立

目的建立研究人类呼吸道粘液分泌的体外实验方法。方法直径小于3mm的小支气管组织(HSBT)剪碎后被均匀地放入24孔培养板中。分别记录基础粘蛋白分泌量(BM)和激发粘蛋白分泌量(SM)，SM用超过BM的百分率表示。在含50nmol／L视黄酸的BEGM与DMEM(1：1)混合液中进行支气管粘膜上皮的原位培养，在带半透膜的插入培养板中培养正常人支气管上皮细胞(NHBE)。MUC5AC粘蛋白ELISA以其多克隆抗体为一抗，绵羊抗兔IgG为二抗，邻苯二甲酰胺显色。酶连二花葙豆凝集素(DBA)试验(ELDBAA)以DBA铺盘以便与粘蛋白结合，用过氧化物酶标记的DBA识别被捕捉的粘蛋白。结果MUC5AC ELISA的敏感性为10ng／ml，而ELDBAA为30ng/ml。经过3h培养，HSBT的基础MUC5AC和DBA粘蛋白分泌量分别为11和19ng／mg组织。原位培养的支气管粘膜上皮细胞3h积聚的粘蛋白分泌量分别为MUC5AC粘蛋白793-1868ng／孔和DBA粘蛋白290-2675ng／孔。NHBE细胞在气液界面形成后的第6d，3h积聚的基础DBA粘蛋白分泌量为22ng／孔。结论:上述组织和细胞培养以及粘蛋白测量方法的建立为呼吸道粘液分泌的研究奠定了良好基础。