OY-TES-1在肝细胞癌中的表达及抗体血清学分析

目的:了解OY-TES-1在肝细胞癌(HCC)中的表达及其抗体出现情况,探讨将OY-TES-1用于肿瘤免疫诊疗的可能性.方法:利用实时定量PCR和免疫组织化学技术,从mRNA和蛋白质两个水平研究OY-TES-1在HcC中的表达特点;采用酶联免疫吸附实验检测HCC患者及正常人血清中相应的抗体,并对其临床意义做初步的分析.结果:经实时定量PCR检测,HCC中OY-TES-1mRNA阳性率为73.21%(41/56),癌旁阳性率为64.86%(24/37),有17对HCC及配对癌旁组织均表达阳性,OY-TES-1mRNA在HCC及癌旁组织两者的表达阳性率无差异(P>0.05);在37对HCC及配对癌旁组织中,HCC中OY-TES-1mRNA水平明显高于对应的癌旁组织,其差异与病理分级有关CP<0.05).HCC中OY-TES-1蛋白阳性率为40%(4/10).血清学检测未发现76例正常人和17例肝硬化患者血清中有相应抗体,HCC患者血清抗体阳性率为20%(12/58),OY-TES-1血清抗体的出现与HCC患者的年龄、性别等临床资料无相关.结论:OY-TES-1在HCC中有较高的表达频率及表达水平,该蛋白具有较强的免疫原性,他有望作为用于HCC辅助诊断及免疫治疗的肿瘤抗原.     

经kinectin融合蛋白刺激的人B细胞诱导效应T细胞对肝癌细胞的杀伤

目的:探讨经人动力素(kinectin)融合蛋白刺激的人外周血B细胞诱导效应T细胞杀伤肝癌细胞的效果.方法:取健康人外周血,分离出单个核细胞,加B细胞刺激因子及kinectin麦芽糖融合蛋白进行体外培养,尔后用尼龙毛柱分离T细胞,将其与肝癌细胞株7404混合培养.用乳酸脱氢酶法检测杀伤肝癌细胞的活性.结果:T细胞对肝癌细胞的杀伤率:空白对照组:3.40%±0.27%;实验组:38.48%±2.64%;阴性对照组:13.03%±2.38%.经统计软件分析,实验组杀伤率与其他组有明显差异.结论:经kinectin融合蛋白刺激的人外周血B细胞诱导的效应T细胞在体外对肝癌细胞株7404有杀伤的作用.     

三种MAGE基因在广西肝细胞癌中的表达

目的检测癌-睾丸抗原(CTA)基因MAGE-1、-3和-4在广西地区肝细胞癌(HCC)中的表达,探讨CTA作为疫苗对HCC治疗的可行性.方法用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对25例广西HCC患者癌组织中MAGE-1、-3和-4基因mRNA的表达进行检测;随机选择MAGE-1、-3和-4阳性的RT-PCR产物各2例进行DNA序列测定.结果 MAGE-1和-3表达率均为40%(10/25),MAGE-4表达率为16%(4/25).DNA测序结果表明RT-PCR产物为MAGE-1、-3和-4基因.统计学分析显示MAGE-1、-3和-4基因的表达与HCC组织分化程度及临床分期无相关性(P>0.05),与HBV感染有相关性(P<0.05);此外,MAGE-1和-3的表达与肿瘤大小及AFP水平均存在相关性(P<0.05).在所检测的标本中,56%的标本至少表达上述1种MAGE,24% 的标本至少表达2种MAGE;16% 的标本表达3种MAGE.结论 MAGE-1和-3在广西HCC中有一定频率的表达,能否用于HCC的免疫治疗值得深入探讨.     

专业英语选修课互动教学的探索与实践

选修课是本科生拓宽知识面的必要形式,在我校已实行多年,但开设专业英语选修课却是近年新的尝试。本科医学生的教学要逐步实现专业课程双语教学。这既是教育部对医学院校的要求,也是我校的努力方向。要从现行的全中文教学过渡到双语教学,开始试行时肯定有不少的困难,无论是教师方面还是学生方面。因此,开设专业英语选修课将是有益的尝试,这样可以让学生逐步适应专业学习的双语教学要求,减少推行双语教学所引起的学生在学习上的困难。在我国的英文教学模式(当然目前已有很大的改进)下,许多大学生学了多年英语,只能阅读普通英文文章,即便在完成学业后,对所学的专业英文资料、文献、论著等不能阅读或一知半解,对专业英文单词不懂发音,把专业性英文文献视为“天书”,“听不懂、讲不出、写不通”的那种“尴尬英语”的奇怪现象,更谈不上与外国人作学术交流。多年学习英语,多数人出现“尴尬英语”的奇怪现象,究其原因可谓多种多样:语言环境的缺乏、应试制度的制约、个人努力的程度不同……。我们都知道,语言的学习需要一种环境和氛围,创造一个良好的语言环境和氛围,可以大大地促进语言学习的效果。目前我国的医学本科教学基本上使用中文,在教学过程中,穿插一些专业英文名词,学生接触...     

新生昆明小鼠胰腺巢蛋白阳性细胞的自然分化

背景：胰腺干细胞在常规培养条件下易于分化,难以获得足够数量的种子细胞。 目的：探讨体外培养条件下小鼠胰腺内、外分泌部的巢蛋白阳性细胞的分化情况。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2006-08/2007-08在广西医科大学基础医学院中心实验室完成。 材料：SPF级新生昆明系小鼠25只,由广西医科大学实验动物中心提供。 方法：以Ⅳ型胶原酶消化小鼠胰腺组织,采用Percoll不连续密度梯度法分离单个细胞混悬液,分别从第1界面(磷酸盐缓冲液/1.068 g/L Percoll液)、第2界面(1.068 g/L Percoll液/1.096 g/L Percoll液)、第3界面(1.096 g/L Percoll液/ 1.118 g/L PercolI液)收集细胞,添加角质细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的低糖DMEM培养基进行体外连续培养。 主要观察指标：双硫腙染色判断各界面细胞的来源,免疫组织化学检测各界面细胞巢蛋白、胰十二指肠同源盒基因蛋白1、角蛋白19的表达。 结果：从第1,2界面收集到的细胞80%~90%双硫腙染色后胞质呈铁红色,表明主要来源于胰腺的内分泌部;从第3界面收集到的细胞双硫腙染色后胞质不染色,表明来源于胰腺的外分泌部。从胰腺的内、外分泌部均可分离出大、圆、单个核的细胞,巢蛋白染色呈阳性表达。随着体外培养时间的延长,来源于胰腺内分泌部的巢蛋白阳性细胞形态保持不变,呈集落样生长,表达胰十二指肠同源盒基因蛋白1,有向胰腺内分泌部β-细胞分化的趋势;来源于胰腺外分泌部的巢蛋白阳性细胞呈铺路石样形态,表达细胞角蛋白19,出现向导管上皮细胞分化的趋势。 结论：新生昆明小鼠胰腺的内分泌部和外分泌部均存在巢蛋白阳性的细胞,前者具有分化为β-细胞的能力,后者具有分化为导管上皮细胞的能力。     

Tumstatin肽对视网膜微血管内皮细胞增生和迂移的影响

目的探讨Tumstatin肽对视网膜血管内皮细胞增生和迁移的影响,了解其抑制血管生成的途径。方法采用MTT比色法观察1mg·L-1、5mg·L-1、10mg·L-1、20mg.L-1和40mg·L-1的Tumstatin肽(T8肽)对恒河猴视网膜血管内皮细胞(RF/6A细胞)增生的影响;采用流式细胞仪检测20mg·L-1的T8肽对RF/6A细胞细胞周期的影响;采用划痕修复实验观察0mg·L-1、5mg·L-1、10mg·L-1和20mg·L-1的T8肽对RF/6A细胞迁移的影响。结果5mg·L-1以上浓度的T8肽对RF/6A细胞增生有抑制作用且呈剂量依赖性,1mg·L-1、5mg.L-1、10mg·L-1、20mg·L-1和40mg·L-1浓度的T8肽抑制率分别为(2.69±1.10)%、(6.58±1.91)%、(16.77±3.05)%、(31.60±7.57)%和(40.05±8.43)%,各组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。未加入T8肽时,RF/6A处于G0～G1期、S期和G2～M期的细胞比例分别为(43.66±1.37)%、(44.13±0.99)%和(12.21±0.39)%,而加入20mg·L-1的T8肽后则分别为(55.27±0.63)%、(28.51±0.68)%和(16.23±1.00)%,细胞凋亡率也由原来的0增加到(7.18±0.25)%,2组比较差异有显著统计学意义(P<0.01)。培养基中加入0mg·L-1、5mg·L-1、10mg·L-1和20mg·L-1的T8肽后RF/6A细胞24h的迁移距离分别为(248.09±2.28)μm、(175.27±3.22)μm、(120.81±3.59)μm和(44.65±1.83)μm,而48h时则为(393.68±2.21)μm、(341.62±4.27)μm、(254.65±2.93)μm和(118.69±5.96)μm,在同一时段,各组比较差异均有显著统计学意义(P<0.01)。结论T8肽能够抑制RF/6A细胞的增生和迁移,使细胞阻滞于G0～G1期及诱导细胞凋亡是其抑制RF/6A细胞生长的原因。     

Tumstatin肽对条件培养基下视网膜脉络膜血管内皮细胞迁移的影响

目的 模拟糖尿病视网膜病变(DR)的体内环境,观察血管形成抑制因子Tumstatin肽(T8肽)对高糖视网膜Müller细胞条件培养基(HGMCM)诱导的视网膜脉络膜血管内皮细胞迁移的影响.方法 采用细胞划痕实验,观察不同质量浓度的T8肽对HGMCM诱导的RF/6A细胞迁移的抑制作用.结果 加入不同质量浓度的T8肽后,RF/6A细咆24 h、48 h迁移的距离显著降低,迁移距离随着T8肽质量浓度的增大而逐渐降低(P＜0.01).结论 Tumstatin肽能够抑制HGMCM诱导的视网膜脉络膜血管内皮细胞迁移,可能是Tumstatin肽抗血管生成的机制之一.     

癌-睾丸抗原GAGE基因mRNA在肝细胞癌的表达及临床意义

GAGE基因是Van den Eynde等应用细胞毒性T淋巴细胞（CTL）筛选法，从一黑色素瘤细胞株cDNA文库中筛选出的肿瘤抗原基因，它能在多种来源不同的肿瘤组织表达，而在正常组织的表达仅限于睾丸组织，因此属于癌-睾丸抗原（CT抗原）。本研究中采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测肝细胞癌（HCC）组织及相应癌旁组织中GAGE基因mRNA4的表达情况，     

黑色素瘤相关抗原-E1在胶质瘤中的表达和意义

一、材料与方法 提取总RNA(胶质瘤47例,相对正常脑组织14例),合成cDNA.     

顶体素结合蛋白真核表达载体的构建及其在肝癌细胞株的表达

目的:构建ACRBP真棱表达载体,建立稳定表达ACRBP的人肝癌细胞株,为后继研究该基因的功能奠定基础.方法:以pMAL-C2/ACRBP重组质粒作为模板进行PCR,扩增出ACRBP编码区cDNA,并与真核表达载体pEGFP-N1连接,构建pEGFP-N1/ACRBP重组质粒.通过Fugene HD将该重组质粒转染至ACRBP表达阴性的肝癌细胞株HepG2,经G418筛选阳性克隆获得稳定转染株.RT-PCR和免疫组织化学方法检测HepC-2细胞中ACRBP的表达情况.结果:pEGFP-N1/ACRBP真核表达载体经测序证实插入序列完全正确;ACRBP基因已经稳定转染至HepG2细胞中并获得表达.结论:成功构建了pEGFP-N1/ACRBP真核表达载体并将其转染HepG2后,能稳定地表达ACRBP.