干扰素诱导抗病毒蛋白基因多态性与慢性丙型肝炎疗效相关性研究

目的探讨α-干扰素（IFN-α）诱导的黏病毒抵抗蛋白（MxA）和真核细胞起始因子调节区2（eIF-20α-reg2）基因的单核苷酸多态性（SNP）与慢性丙型肝炎（CHC）患者对IFN-α治疗应答的关系。方法前瞻性研究216例CHC患者，在接受IFN-α联合利巴韦林治疗48周，随访至停药后24周时，评价疗效[分为持续性应答（SVR）和非持续性应答（NSVR）]。应用多聚酶链反应（PCR）及限制性片段长度多态性（RFLP）法检测患者MxA启动子-88（G／T）、-123（C／A）及eIF-20α-reg2（MG）位点的SNP，并比较SNP与IFN疗效的关系。结果MxA 88位点：GT与GG型患者SVR（57．43％对34．21％）比较，差异有统计学意义（χ^2=9．37，P〈0．01）；TT与GG型患者SVR（66．67％对34．21％）比较，差异有统计学意义（χ^2=9．37，P〈0．01）。而GT与TT型患者SVR比较（57．43％对66．67％），差异无统计学意义（χ^2=1．00，P〉0．05）；MxA-123位点、eIF-20α-reg2位点基因型与IFN疗效比较：差异均无统计学意义（χ^2=4．87，P〉0．05；χ^2=1．66，P〉0．05）。多因素Logist回归分析结果显示：病毒载量（OR=3．178，95％CI：1．463～6．904，P=0．003）、干扰素种类（OR=3．117，95％CI：1．484～6．544，P=0．003）对SVR的独立影响具有统计学意义。MxA-88基因型（OR=1．470，95％CI：0．646～3．345，P=0．358）对SVR的独立影响无统计学意义。结论CHC患者MxA-88为TT或GT型者比GG型者对IFN-α应答好，但不是影响SVR的独立因素。     

N-乙酰半胱氨酸治疗猪急性肝衰竭的作用

目的研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对D-氨基半乳糖诱导的急性肝衰竭动物肝脏的保护作用。方法雌性中国实验小型猪14头。随机分为对照组(6头)和治疗组(8头),应用D-氨基半乳糖1.2g/kg,静脉滴注,诱导制备药物性急性肝衰竭动物模型。治疗组给予NAC治疗,对照组同期给予生理盐水。观察比较2组动物一般状况、生存时间、生理指标、生化指标以及肝脏组织病理变化。结果经过治疗后,治疗组在某些时间点与对照组相比部分肝功能指标明显改善:ALT、AST和总胆红素含量明显较低,凝血酶原活动度较高,凝血酶原时间缩短;其他生化指标,如血氨和内毒素水平有一定下降;在组织病理学上,治疗组与对照组相比炎症有所减轻。结论NAC治疗非对乙酰氨基酚引起的肝衰竭仍然可以改善肝功能和炎症反应,内毒素血症得到一定改善。     

裸鼠皮下人肝癌移植瘤模型的建立

目的建立裸鼠皮下肝癌移植瘤模型。方法BLBA/c裸鼠颈背部皮下注射人肝癌SMMC-7721细胞悬液5×106个.0.2m l-1.只-1,观察肿瘤生长情况,45d处死。瘤组织作病理及电镜检查;取裸鼠周围血作甲胎蛋白(AFP)的检测;用免疫组化法检测肿瘤微血管密度(MVD)。结果该模型具有类似人原发性肝癌的形态学特征。结论成功建立了人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型。     

基于日常检测结果的核酸扩增检测假阳性统计室内质量控制方法

目的建立一种利用核酸扩增检验实验室日常检测数据进行定性测定假阳性监测的实验室室内质量控制方法。方法以实验室日常不少于20次检测的阳性率比值为基础,计算阳性率比值的均值(x)和标准差(s),绘制质控图,以1+2S为“告警”规则,1+3S和3+2S为失控规则。结果对实验室212次HBVDNA聚合酶链反应(PCR)实测数据分析,x和s分别为0.527和0.078,与前20次测定的x(0.532)和s(0.09)相近。212次测定中,出现5次超出x±2s,按照所定的质控规则有两次失控。符合统计上的正态分布。结论为核酸扩增常规检测提供了一种具有可操作性的假阳性统计室内质控方法。     

急性肝损伤大鼠肝脏Fas和FasL的表达及其意义

目的 研究急性肝损伤大鼠肝脏Fas和FasL的表达情况，探讨细胞凋亡在中毒性肝损伤发病中的地位及其意义。方法 健康雄性Wistar大鼠35只，随机分为正常对照组和实验组，实验组再分为3、9、16、24、36和48h6个亚组，每组5只。制备四氯化碳中毒性肝损伤动物模型，采用苏木素-伊红（HE）染色，光镜下观察肝组织损伤情况，采用免疫组化方法测定不同时间点肝组织Fas和FasL的表达，采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）观察肝细胞凋亡情况。同时测定各时间点血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）和肝组织超氧化物歧化酶（SOD）活性、肝组织丙二醛（MDA）含量变化。结果 Fas和FasL在正常大鼠肝细胞中未见表达，实验组3h后即开始有明显表达，并随时间延长表达相应增强；病理学和TUNEL检测结果均显示肝脏有严重损伤，大量肝细胞发生凋亡。大鼠染毒后血清ALT、AST活性和肝组织MDA含量明显升高，肝组织SOD活性显著降低，与正常对照组比较差异均十分显著（P〈O．05或P〈O．01）。结论 大鼠急性肝损伤时Fas和FasL表达显著增加，和肝细胞凋亡变化相一致，提示Fas／Fasl。系统及介导的细胞凋亡反应在中毒性肝损伤的发病机制中可能占有重要地位。     

乙型肝炎病毒X基因原核表达载体的构建及蛋白表达

[目的] 构建和表达乙型肝炎病毒x基因原核表达载体，获得重组HBx蛋白。[方法] 用PCR方法扩增含有EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点的X基因序列，分别以pMD18-T载体和pET32a（＋）载体构建pMD18-T-HBX克隆载体和pET32a-HBX原核表达载体，随后把pET32a-HBX转化大肠杆菌BL-2l进行诱导表达和纯化，Western blot检测原核表达的HBx蛋白的免疫活性。[结果] 经IFFG诱导后可见分子量约38KD的融合蛋白表达；表达的蛋白主要以包涵体形式存在；Western blot结果表明HBx融合蛋白具有较好的免疫活性。[结论] HBVX基因的克隆表达及其融合蛋白的纯化。为研究HCC患者血清中HBx蛋白和抗-HBx抗体滴度水平奠定了坚实的基础。