丝胶对高糖所致足细胞损伤和JNK信号通路的影响

目的 探讨丝胶对高糖所致足细胞损伤时c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路相关蛋白的表达及足细胞凋亡的影响,阐明丝胶的保护作用及其可能机制。 方法 分化成熟的条件永生化小鼠足细胞随机分为正常对照组（含5.5 mmol·L^－1葡萄糖的培养基）、高渗对照组（含5.5 mmol·L^－1葡萄糖+24.5 mmol·L^－1甘露醇的培养基）、高糖组（含30.0 mmol·L^－1葡萄糖的培养基）、低浓度丝胶组（含30.0 mmol·L^－1葡萄糖+150.0 mg·L^－1丝胶的培养基）、中浓度丝胶组（含30.0 mmol·L^－1葡萄糖+300.0 mg·L^－1丝胶的培养基）和高浓度丝胶组（含30.0 mmol·L^－1葡萄糖+600.0 mg·L^－1丝胶的培养基）。采用光学倒置显微镜观察各组足细胞形态表现,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组足细胞中裂孔膜蛋白（Nephrin）、丝裂原活化蛋白激酶激酶1（MEKK1）、丝裂原活化蛋白激酶激酶4（MKK4）、c-Jun氨基末端激酶1（JNK1）和c-Jun mRNA表达水平,Western blotting法检测各组足细胞中Nephrin、MEKK1、MKK4、JNK1和c-Jun蛋白表达水平,AnnexinⅤ/PI双染法检测各组足细胞凋亡率。 结果 正常对照组足细胞胞体较大,并延伸生出树枝状突起;与正常对照组比较,高糖组足细胞胞体回缩变小,细胞间隔增大,脱落和悬浮的足细胞数目增多;与高糖组比较,不同浓度丝胶组足细胞形态逐渐趋于正常。高糖组足细胞中Nephrin mRNA和蛋白表达水平较正常对照组均明显降低（P<0.05）,表明高糖致足细胞损伤模型建立成功。高糖组足细胞中MEKK1、MKK4、JNK1、c-Jun mRNA和蛋白表达水平较正常对照组明显升高（P<0.05）;不同浓度丝胶组足细胞中MEKK1、MKK4、JNK1和c-Jun mRNA及蛋白表达水平较高糖组明显降低（P<0.05）,且高浓度丝胶组足细胞中MEKK1、MKK4、JNK1和c-Jun mRNA及蛋白表达水平较中浓度丝胶组明显降低（P<0.05）,中浓度丝胶组足细胞中MEKK1、MKK4、JNK1和c-Jun mRNA及蛋白表达水平较低浓度丝胶组明显降低（P<0.05）。高糖组和高渗对照组足细胞凋亡率较正常对照组明显升高（P<0.05）;不同浓度丝胶组足细胞凋亡率较高糖组明显降低（P<0.05）,且高浓度丝胶组足细胞凋亡率较中浓度丝胶组明显降低（P<0.05）,中浓度丝胶组足细胞凋亡率较低浓度丝胶组明显降低（P<0.05）。 结论 丝胶对高糖所致足细胞损伤发挥保护作用,其机制可能与抑制JNK信号通路中MEKK1、MKK4、JNK1和c-Jun的表达及抑制足细胞凋亡有关联。     

基于量子点标记胶质纤维酸性蛋白的轻度颅脑损伤快速诊断试纸条研制及评价

目的 采用量子点微球标记的免疫层析技术研制胶质纤维酸性蛋白（GFAP）快速检测试纸条,实现对轻度颅脑损伤（mTBI）的辅助诊断。方法 偶联量子点微球与GFAP抗体,优化偶联条件获得荧光探针,制备免疫层析试纸条,建立诊断方法并优化检测条件,采用临床样本对试纸条的诊断效果进行评价。结果 优化后的试纸条仅需70μL血清样本即可在13 min内实现对GFAP的浓度检测,检出限为0.15 ng/mL,不同批次试纸条重复性良好（CV=10.7%）。在51例临床样本中,mTBI检出灵敏度95.24%,特异性96.67%,具有较好的检出效果。结论 研发的试纸条操作简便,结果可靠,为战时复杂环境下mTBI的快速诊断奠定了基础。     

丝胶对2型糖尿病大鼠脊髓前角神经元NGF表达的影响

目的：研究丝胶对2型糖尿病大鼠脊髓前角神经元神经生长因子（Nerve growth factor,NGF）表达的影响。方法：40只SD大鼠随机分为4组,正常对照组、糖尿病模型组、丝胶治疗组和阳性对照组,每组均为10只。链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）连续腹腔注射制作2型糖尿病大鼠模型。待模型成功建立后,模型组大鼠不作任何处理,丝胶治疗组大鼠给予丝胶灌胃（2．4g／kg／d）,阳性对照组大鼠给予二甲双胍（55．33mg／kg／d）灌胃。应用免疫组织化学染色法观察脊髓前角神经元NGF的表达,并采用MiVnt图像分析系统对免疫组化染色阳性结果进行定量分析。结果：糖尿病模型组大鼠脊髓前角神经元NGF的表达明显低于正常对照大鼠（P〈0．01）;与糖尿病模型组大鼠比较,丝胶治疗组与阳性对照组大鼠脊髓前角神经元NGF的表达明显增高（P〈0．01）,且丝胶组与阳性对照组比较无明显差别（P〉0．05）。结论：丝胶可明显提高2型糖尿病大鼠脊髓前角神经元NGF的表达,发挥对糖尿病神经病变的保护作用。     

下丘脑-垂体-肾上腺轴与2型糖尿病

糖尿病是一组由于胰岛素分泌缺陷和/或胰岛素作用缺陷导致的以慢性血糖水平增高为特征的代谢异常综合征,常导致碳水化合物、蛋白质、脂肪以及水和电解质代谢的紊乱。糖尿病及其并发症在许多国家已成为致残、致死的主要原因之一。     

环介导等温扩增法快速检测结核杆菌复合群内主要致病菌

目的 快速诊断和区分结核杆菌复合群内两种主要致病菌.方法 利用环介导等温扩增(LAMP)技术建立快速检测和区分结核杆菌复合群内主要致病菌的方法,利用该方法对相关的临床分离株样本进行特异性检测,并利用1∶ 10倍比稀释的已知菌株DNA模板分析其敏感性.反应结束后通过电泳或向反应管中加入DNA染料肉眼判定检测结果.结果 该方法可以成功检测到主要的结核致病菌:人型和牛型结核分枝杆菌,与包括卡介苗在内的其余相关菌株均未见非特异性交叉反应.检测的灵敏度可达100拷贝/微升,高于常规PCR方法.结论 该检测方法具有敏感、特异、低成本和快速的特点,可检测和区分人型和牛型结核分枝杆菌,并能排除卡介苗对诊断的干扰.     

胶质纤维酸性蛋白和泛素C端水解酶L1在轻中度创伤性脑损伤诊断中的应用

创伤性脑损伤(TBI)每年会影响全球数千万人,严重威胁人类健康,军人作为特殊群体尤为高发.目前,对于TBI的临床诊断主要依赖于计算机断层扫描(CT)和格拉斯哥昏迷量表(Glasgow Coma Score,GCS).然而,CT检测的假阳性和患者暴露于电离辐射的高风险及GCS存在较大的主观性等限制了TBI尤其是轻中度TBI(mmTBI)的精准诊断.近年来,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和泛素C端水解酶L1 (UCH-L1)正在成为新的TBI诊断血液标志物,其应用越来越广泛.该文梳理了GFAP和UCH-L1的理化性质、功能及其在TBI诊断中与已有标志物相比存在的优势,阐述了其在战时环境下的应用潜力,并展望了TBI快速诊断的研发趋势.     

丝胶对2型糖尿病大鼠肝脏TRB3的调节作用

目的研究2型糖尿病大鼠肝脏肝细胞Tribbles同源蛋白(TRB)3的表达变化及丝胶的调节作用。方法选择36只SPF级雄性SD大鼠作为研究对象,随机分为正常对照组(12只)和造模组(24只)。造模组大鼠以高脂高糖饲料喂养+腹腔注射链脲佐菌素的方法构建2型糖尿病大鼠模型,将成模的大鼠随机分为模型组和丝胶治疗组,每组12只,丝胶治疗组大鼠给予丝胶2.4 g/(kg·d)、其余组大鼠给予等体积生理盐水连续灌胃35 d。给药结束,取血液标本采用葡萄糖氧化酶法检测各组大鼠的空腹血糖;取肝脏组织采用SP免疫组织化学法、免疫印迹法和Real Time Q-PCR法分别检测各组大鼠肝细胞TRB3蛋白和mRNA的表达。结果与模型组大鼠相比,丝胶治疗组大鼠的空腹血糖水平、肝细胞TRB3蛋白和mRNA的表达明显降低(tSP免疫组织化学法=-2.32,t免疫印迹法=-4.89,t实时定量PCR法=-3.08,P<0.05)。结论丝胶降低血糖的作用,可能通过下调肝脏TRB3的表达进而降低对胰岛素磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路中Akt的抑制作用来实现。     

基于沙堡蠕虫和贻贝黏蛋白的融合基因构建及其在昆虫细胞中的表达

目的 构建基于贻贝足蛋白（Mfp）和沙堡蠕虫分泌蛋白（Pcs）的融合基因,并实现其在昆虫细胞中的表达,为新型黏附材料研制奠定基础。方法 理性设计基于Mfp和Pcs的融合分子,通过PCR扩增得到目的基因,再通过pFastBacHBM载体所介导的平末端克隆以及DH10Bac所介导的转座合成带有目的基因的重组杆状病毒质粒（Bacmid DNA）,利用昆虫表达系统生成携带目的基因的杆状病毒,并通过病毒感染细胞实现融合蛋白Pc1-Mfp5的可溶性表达。结果 测序结果显示,重组载体构建成功。病毒滴度测试显示,收获高滴度的杆状病毒。SDS-PAGE以及Western印迹分析表明,Pc1-Mfp5融合蛋白在昆虫细胞中实现了可溶性表达。结论 成功构建pc1-mfp5融合基因,并实现了其在昆虫系统中的可溶性表达,为新型仿生黏附材料的研制奠定了基础。     

丝胶预处理对糖尿病大鼠胰岛细胞蛋白表达的影响

目的观察彩色蚕茧提取物——丝胶对糖尿病大鼠胰岛细胞Bax、Bcl-2、胰岛素及神经肽Y(NPY)蛋白表达的影响。方法将36只SD大鼠随机分为正常组、模型组和丝胶组。模型组和丝胶组大鼠均建立链脲佐菌素(STZ)糖尿病动物模型,丝胶组于注射STZ前给予丝胶灌胃35 d。采用酶法检测血糖,免疫印记法观察Bax、Bcl-2蛋白的表达,免疫组化法观察胰岛素、NPY蛋白的表达。结果与模型组大鼠相比,丝胶组大鼠血糖、Bax和NPY蛋白表达明显降低(P<0.01),Bcl-2和胰岛素蛋白表达明显升高(P<0.01)。结论丝胶预处理可抑制胰岛β细胞凋亡,上调胰岛素表达,下调NPY表达,对糖尿病胰岛损伤具有明显预防作用。