油酸型ARDS大鼠心肌组织IL-1β、IL-10含量及mRNA表达的动态观察

目的:探讨油酸型急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠心肌组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)含量及其mRNA的表达在心肌损伤过程中的作用。方法:Wistar大鼠32只,随机分为4组,采用油酸复制ARDS大鼠模型,观察对照组、油酸(OA)注射后2h(OA2h组)、4h(OA4h组)、6h(OA6h组)组肺的湿/干重、心肌组织的病理改变及血清心肌酶谱(AST、CK、CK-MB、LDH)。用放射免疫分析法检测血清及心肌组织中IL-1β、IL-10的含量,以RT-PCR法检测心肌组织中IL-1β、IL-10mRNA的表达情况。结果:OA各组肺湿/干重均高于C组(P<0.05)。OA各组AST以及OA2h、OA4h组CK、CK-MB、LDH均高于对照组(P<0.05)。OA6h组血清及心肌组织中的IL-1β含量显著升高(P<0.01);OA2h组血清IL-10含量明显高于其它各组(P<0.01),OA6h组心肌组织中IL-10含量明显高于对照组及OA2h组(P<0.01)。OA各组心肌组织IL-1βmRNA表达均高于对照组(P<0.01);OA6h组IL-10mRNA表达有所升高(P<0.01)。结论:油酸型ARDS大鼠并发心肌损伤可能与心肌组织中IL-1β、IL-10含量的增高、mRNA表达的增强有关。     

RNA结合蛋白HuR对NF-κB抑制因子α转录后调控机制的初步研究

 目的：探讨RNA结合蛋白HuR对NF-κB抑制因子α（IκB-α）转录后调控机制。方法：构建IκB-α mRNA 3UTR报告基因真核表达质粒,并转染3T3细胞;体外生物素标记IκB-α mRNA 3UTR并进行RNA pull-down;过表达及干扰HuR后,qPCR检测其对IκB-α mRNA稳定性的影响,Western bltting检测其对IκB-α 蛋白表达的影响。结果：(1) IκB-α mRNA 3UTR报告基因真核表达质粒构建成功;(2) 报告基因检测：共转染pcDNA3-HA-HuR质粒及IκB-α mRNA 3UTR报告基因质粒后与对照组相比其数值明显增高;(3) 用生物素标记的IκB-α mRNA 3UTR探针进行RNA pull-down,可以检测到特异性结合的HuR蛋白;(4) 过表达HuR,IκB-α mRNA稳定性无明显变化,蛋白表达明显上调;干扰HuR 表达后,IκB-α mRNA稳定性无明显变化,蛋白表达明显下调。结论：(1) HuR可以与IκB-α mRNA 3UTR特异性结合并参与调节IκB-α mRNA 3UTR的功能;(2) HuR对IκB-α mRNA稳定性无明显影响,其主要调控IκB-α 蛋白表达,使其表达上调。     

RNA结合蛋白HuR调控前列腺癌细胞活力机制的研究

目的 前列腺癌在我国的发病率及病死率逐年上升,但其发病机制尚未明确,本研究从转录后水平初步探讨RNA结合蛋白HuR参与调控前列腺癌细胞活力的机制.方法 免疫荧光检测前列腺增生细胞(BPH)及前列腺癌细胞(PC3)中HuR蛋白的定位,蛋白质印迹法检测HuR及环氧合酶-2(cyclooxygenase,COX-2)蛋白在细胞内的表达,MTT法检测细胞活力,脂质体转染法转染质粒及干扰片段,qPCR检测干扰效率,RNA-pull down实验验证HuR对COX-2的调控.结果 HuR在BPH细胞主要定位于细胞核,在PC3细胞中主要定位于胞质.PC3细胞中HuR表达水平为1.699±0.011,高于BPH细胞的0.654±0.028,差异有统计学意义,t=58.67,P＜0.001.PC3细胞中过表达HuR后,转染空质粒组细胞活力为1.038±0.117,转染HuR表达质粒后细胞活力为1.838±0.057,差异有统计学意义,t=10.656,P＜0.001.干扰HuR表达后,转染siNC组细胞活力为1.254±0.095,转染siHuR干扰片段组细胞活力为0.66±0.102,t=7.383,P=0.002;BPH组和PC3组COX-2表达水平分别为0.449±0.055和1.066±0.068,t=12.147,P＜0.001;过表达COX-2后PC3细胞活力明显增加,转染空质粒组细胞活力为1.296±0.114,转染COX-2表达质粒后细胞活力为1.954±0.062,t=18.062,P＜0.001.干扰COX-2表达后,PC3细胞活力明显降低,转染siNC组细胞活力为1.233±0.145,转染siCOX-2干扰片段后细胞活力为0.661±0.096,t=5.688,P=0.005.HuR可以结合于COX-2的3′-UTR并上调COX-2蛋白表达,转染空质粒组COX-2蛋白表达水平为0.638±0.067,转染HuR表达质粒组为1.703±0.022,t=26.26,P＜0.001.结论 HuR参与调控前列腺癌细胞活力可能是通过上调COX-2表达而实现.     

无牙颌弓分类研究及临床意义探讨

对牙弓,颌弓形状类别的划分,临床上多采用目测方法,将其分成尖园型,卵园型,方园型等。近年来国内外一些学者借助计算机用“聚类分析”法对牙弓、颌弓的分类问题进行研究,并各自得出相应的结论。本文以“数学模型”为定量依据,以200例无牙上下颌弓为样本,研究并提出对无牙颌弓的分类方法、判别公式及相应的结果,初步探讨其理论及临床意义。材料和方法(一)样本采集及模型制备,从临床就诊的无牙颌患者中抽取100例上下颌弓间关系基本正常者为样本。其中男性36例,平均年龄63.6岁。女性64例,平均年龄61.4岁。用印模膏取初印,然后刮除组织面及边缘部分制成个别托盘后再用藻酸钠印模材取终印模。将印模     

9型腺相关病毒介导RNA干扰抑制p65基因表达对血管紧张素Ⅱ诱导H9c2细胞凋亡的影响

目的:以9型腺相关病毒(AAV9)介导的RNA干扰抑制大鼠心室肌H9c2细胞中p65基因表达,研究其在血管紧张素II(Ang II)诱导下对H9c2细胞凋亡的影响,并阐明其可能机制。方法:分别将r AAV9-eGFP及r AAV9-eGFP-NF-κB p65-siRNA按转染复数(MOI)=4×106vg/cell转染至H9c2细胞,在荧光倒置显微镜下观察e GFP的阳性表达情况,采用流式细胞术检测其转染效率,并用Western blot法分析p65的表达情况。CCK-8法检测病毒对H9c2细胞活力的影响。流式细胞术分析各组细胞的凋亡情况。结果:病毒转染48 h后e GFP开始有表达,并且表达强度随着时间延长而增加,第5天达最高值,此时流式细胞术检测转染率为(52. 7±1. 9)%。与空白组相比,转染病毒后H9c2细胞的活力无明显变化。静息状态下H9c2细胞的NF-κB p65有一定活性,给予Ang II刺激后NF-κB p65的活性明显增高,而转染r AAV9-eGFP-NF-κB p65-siRNA可有效抑制NF-κB p65的活性。流式细胞术检测发现Ang II刺激组的凋亡程度明显高于空白组,而r AAV9-eGFP-NF-κB p65-siRNA组的细胞凋亡明显受到抑制。结论:通过r AAV9介导的RNA干扰能有效抑制H9c2细胞NF-κB p65基因的表达;抑制p65基因表达对H9c2细胞活力无明显抑制,但能减少Ang II诱导下的细胞凋亡。     

护理干预对急性脑卒中偏瘫患者肢体恢复的效果观察

目的:急性脑卒中偏瘫患者康复训练前理解力的培训对偏瘫肢体恢复的效果观察。方法:100例急性脑卒中瘫痪患者,随机分为对照组和干预组,各50例,对照组采取常规护理、康复护理,干预组在对照组的基础上采取加强理解力的培训,比较两组患者的FMA、MMSE评分及其患侧下肢肌力。结果:治疗3周后,干预组FMA、MMSE评分、患侧下肢肌力均显著高于对照组,差异有显著性(P0.05)。结论:早期康复进程中患者的理解能力对患者回归家庭和社会,提高其生活质量起着关键性作用。     

带FLAG标签小鼠HuR真核表达载体的构建及其生物学功能的鉴定

目的 构建人抗原R (HuR)的真核表达载体,观察其在NIH3T3细胞中的表达并初步分析其生物学功能.方法 提取NIH3T3细胞总RNA并反转录为cDNA,以cDNA为模板PCR扩增得到小鼠HuR编码序列,酶切后克隆至pcDNA3.1-FLAG载体;重组载体经PCR、酶切、测序鉴定正确后瞬时转染NIH3T3细胞,采用W...     

慢性低氧所致肺动脉高压对大鼠肺血管平滑肌细胞及成纤维细胞中蛋白激酶CβI的膜转位和蛋白表达量的影响

目的通过观察慢性低氧所致肺动脉高压对大鼠肺血管平滑肌细胞及成纤维细胞中蛋白激酶CβI(PKCβI)的膜转位和蛋白表达量的影响,初步探讨PKCβI在慢性低氧诱导大鼠肺动脉高压的发生、发展过程中所起的作用。方法建立慢性常压低氧肺动脉高压大鼠模型,将雄性SD大鼠随机分为正常对照组、低氧1 d、3 d、7d、14 d和21 d组,应用蛋白免疫印迹和免疫组化技术检测肺动脉高压形成过程中大鼠肺血管平滑肌细胞及成纤维细胞中PKCβI的膜转位和蛋白表达水平。结果 (1)RVSP和RV/(LV+S)比值较正常对照组明显增加(P<0.05),低氧后3 d、7 d、14 d和21 d后大鼠肺血管明显增厚;(2)大鼠肺血管平滑肌细胞和成纤维细胞均有PKCβI的表达,且低氧14 d后PKCβI的蛋白表达量较正常对照组相比降低(P<0.05)。结论 PKCβI蛋白表达量的下调可能参与了慢性低氧诱导的大鼠肺动脉高压肺血管重塑的发生、发展过程。     

急性脑卒中偏瘫患者早期胫骨前肌康复训练对患肢功能和步态恢复的效果

目的探讨早期胫骨前肌训练对急性脑卒中偏瘫患者患肢功能和偏瘫步态恢复的影响。方法将92例急性脑卒中伴肢体功能障碍的患者分为治疗组和对照组各46例,2组患者在生命体征稳定,症状、体征不再进展48 h后开始常规康复训练,治疗组在常规康复训练的同时,进行胫骨前肌训练。结果训练2周后,2组的肌力、踝关节活动度、步行速度和步幅的评分与治疗前比较,治疗组疗效优于对照组(P<0.05)。结论在常规早期康复治疗的基础上加胫骨前肌训练,能更有效地改善脑卒中偏瘫患者患肢功能和步态的恢复。     

MiR-519通过调节HuR表达抑制胃癌细胞活力

目的：探讨miR-519参与调节胃癌细胞活力的机制。方法：qPCR检测胃癌细胞中miR-519表达,Western印迹法检测胃癌细胞中HuR蛋白表达,MTT法研究肿瘤细胞的活力,脂质体转染法分别转染HuR真核表达质粒及干扰片段、转染miR-519。结果：胃癌细胞株中HuR蛋白表达高于对照组细胞,过表达HuR可增加细胞活力(P<0.001),干扰HuR表达后,细胞活力降低(P=0.001);胃癌组织中miR-519表达低于对照组(P=0.001),过表达miR-519可抑制HuR蛋白表达并降低胃癌细胞活力。结论：MiR-519可能通过下调HuR蛋白表达而降低胃癌细胞活力。