3例SARS患者的RT-PCR与ELISA确认

目的 为了对SARS疑似患者进行快速早期诊断和进行血清学确认。方法 从SARS疑似患者含漱液与细胞病毒分离上清液中提取病毒RNA，进行逆转录套式PCR反应，扩增SARS病毒特异性核酸片段，进行序列测定与序列比对。并对患者不同发病日期采集的血清标本进行SARS病毒ELISA抗体测定。结果 SARS患者含漱液标本和细胞病毒分离上清液中均能扩增出特异性核酸片段，经测序证实来自SARS冠状病毒。患者血清标本中SARS病毒抗体在发病后18d开始呈阳性。以后随发病日期增加而升高。结论 逆转录套式PCR是一种早期、敏感、特异、快速检测传染性非典型肺炎疑似患者临床样本中SARS冠状病毒的理想方法。浙江省3例SARS临床诊断病例的含漱液和血清标本经SARS病毒核酸和抗体检测。证实为SARS病例。     

SARS病毒核酸检测中不同引物对灵敏度的影响

目的筛选灵敏、特异的SARS病毒核酸检测方法。方法采用世界卫生组织(WHO)和中国疾病预防控制中心(中国CDC)推荐的9对SARS病毒核酸检测引物，同时又选择市售的2种SARS荧光定量PCR试剂，分别对不同稀释度的SARS病毒核酸进行RT—PCR、巢式PCR和荧光定量PCR扩增，比较其检测灵敏度和特异性。结果两种荧光定量PCR试剂可检测SARS病毒核酸灵敏度均为0．1TCID50，与普通RT—PCR方法检测灵敏度(0.1TCID50)相同，而较巢式PCR法(0．01TCID50)略低；采用RT—PCR方法扩增SARS核酸时，以WHO推荐的SAR1s／SAR1as、BNIinS／BNIAs、BNIoutS/BnoutAs与中国CDC推荐的CDC-P1 ／P1-灵敏度最高。结论RT—PCR扩增时各引物对之间存在明显差异；荧光定量PCR可作为SARS疑似样本检测的首选方法，必要时再采用RT—PCR和巢式PCR法加以确认。     

浙江省2006-2007年暴发性胃肠炎中诺如病毒的分子流行病学分析

目的 分析浙江省2006-2007年暴发性病毒性胃肠炎中诺如病毒感染的分子流行病学特征.方法 收集监测期间暴发性病毒性胃肠炎疫情患者的粪便标本及相关流行病学资料.采用RT-PCR及荧光定量RT-PCR检测诺如病毒.随机选掸部分阳性标本扩增部分多聚酶区和衣壳蛋白片段,进行序列测定,结合诺如病毒I(GI)、Ⅱ(GⅡ)基因型参考株进行进化分析.结果 诺如病毒感染暴发性胃肠炎共5起,发生时间均集中于9-12月,送检标本63份,诺如病毒检测阳性45份.序列分析结果显示,浙江省诺如病毒序列与诺如病毒GⅡ/4型参考株同源性最高,其中与北京2006年、荷兰2006年诺如病毒GⅡ/4型变异株最为接近,核苷酸同源性分别为99.7%和98.5%～99.0%.诺如病毒与北京、荷兰流行的GⅡ/4型变异株处于同一分支.结论 诺如病毒是浙江省病毒性腹泻暴发疫情的重要病原体,流行时间集中于秋季,其流行株为GⅡ/4型变异病毒株.     

1988-2005年甲3亚型流感流行株与疫苗株的HA1区差异探讨

目的 从基因层面探讨18年来我国及欧美国家甲3亚型流感流行株与当时WHO疫苗推荐株之间的差异。方法 收集1988—2005年间我国以及欧美国家的甲3亚型流感流行株与疫苗株的血凝素重链（HA1）区域的氨基酸序列，用BioEdit生物软件进行比较，分析其与当时疫苗推荐株在HA1以及HA1抗原决定簇区域的氨基酸差异。结果 在HA1区以及HA1区抗原决定簇位点，我国甲3亚型流感流行株与当年疫苗株之间的差异，均大于它与下一轮疫苗株之间的差异，且已达到十分显著的程度（P〈0．01）。而欧美国家甲3亚型流感流行株与当年疫苗株之间的差异，虽然稍大于它与下一轮疫苗株之间的差异，但尚不显著（P〉0．05）。此外，使用多年的疫苗株，无论在我国还是欧美，随着疫苗使用年数的增加，流行株与疫苗株之间的差异不断增大。结论 WHO推荐的甲3亚型疫苗株与我国甲3亚型流行株之间，从基因层面进行分析，存在明显的滞后现象。     

SARS荧光免疫诊断技术研究

目的应用基因工程技术,在昆虫细胞中表达SARS核蛋白基因,产生无感染性的核蛋白抗原,利用此蛋白制备抗原片,用于检测血清中SARS特异性抗体.方法从非典型性肺炎病人血清中提取病毒RNA,通过RT-PCR方法扩增出SARS核蛋白基因片段,将核蛋白基因插入杆状病毒,构建重组昆虫杆状病毒,转染昆虫细胞,收获细胞,经丙酮固定,制成SARS抗原片,建立了SARS荧光免疫方法(IFA).结果用此抗原片检测多份血清,仅与SARS病人血清起反应,而与正常人及其它发热病人血清不起反应.结论利用该方法制备抗原片,不需要P3实验室,操作简便,为诊断与研究SARS提供了方便而安全的方法.     

两种剂型脊髓灰质炎疫苗的热稳定性观察

为了研究脊髓灰质炎液体疫苗和糖丸疫苗对热冲击后的稳定性差异 ,对 3 7℃孵箱放置不同天数后的两种疫苗分别测定了效价 ,在 -2 0℃保存下效价为 5 9logTCID5 0 /粒的糖丸疫苗 ,3 7℃放置 1天后其效价明显下降 ,到 5天后降为 0 ;而在 -2 0℃保存下效价为 5 7logTCID5 0 /0 1ml的液体疫苗 ,3 7℃放置 3天后仍能维持在 5 5logTCID5 0 /0 1ml左右。实验证明 :脊髓灰质炎液体疫苗不仅具有与糖丸疫苗同样良好的免疫效果 ,且具有质量可靠、热稳定性好等的综合优势 ,更适合我国使用。     

浙江省首次发现新型布尼亚病毒感染病例及分离病毒分子鉴定

目的 了解浙江省是否存在新型布尼亚病毒潜在自然疫源地,分离疑似病例血清中新型布尼亚病毒并进行鉴定.方法 免疫荧光法检测浙江省台州地区野生啮齿动物不同组织标本中新型布尼亚病毒抗原.实时荧光定量RT-PCR检测疑似病人血清中新型布尼亚病毒核酸,扩增产物进行序列测定.Vero细胞分离疑似病人血清中新型布尼亚病毒,以新型布尼亚病毒株核衣壳蛋白编码基因为靶基因,采用RT-PCR及扩增产物测序对分离的疑似新型布尼亚病毒株进行鉴定,另对该序列进行同源性分析和比较.结果 70只野生啮齿动物中,免疫荧光法检测阳性率为5.71%.实时荧光定量RT-PCR检测结果显示,4例疑似病人血清中有两例检测结果阳性.1例阳性血清样本中分离出1株疑似新型布尼亚病毒,RT-PCR和测序结果证实该病毒确为新型布尼亚病毒,其核衣壳蛋白编码基因序列与湖北省新型布尼亚病毒分离株相似性高达92.2%,但与国内其他地区新型布尼亚病毒分离株序列差异较大.结论 首次证实浙江省存在新型布尼亚病毒自然疫源地及感染病人,不同群新型布尼亚病毒分布可能存在一定的地理差异.     

嘉善县健康人群脊髓灰质炎抗体水平监测

我省自六十年代初开始使用脊髓灰质炎成毒活疫苗,使脊髓灰质炎发病率大幅度下降,并出现一批连续多年无脊髓灰质炎病例报告的县。为真实了解这些地区人群实际免疫状况,巩固防病成果,我们选择了连续18年无脊髓灰质炎病例报告的嘉善     

ELISA法用于麻疹和风疹的鉴别诊断

自从麻疹疫苗广泛应用以来,使麻疹发病率明显下降,但也出现了相当多难以从临床上与风疹鉴别的轻型病例。特别是当该两种病混杂流行时更增加了诊断的难度。因此,利用特异性血清学方法作鉴别诊断十分必要。采用ELISA法测定麻疹与风     

浙江省1998-2005年甲3亚型流感病毒株HA1区和NA区基因特性分析

目的分析近几年浙江省甲3亚型流行性感冒（流感）流行株血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）基因的特性、变异与流感流行的关系。方法选择浙江省1998—2005年流感流行期间分离的甲3亚型代表株25株，提取病毒RNA，扩增HA1和NA基因，进行序列测定，用BioEdit软件分析处理。结果浙江省近几年甲3亚型流感流行株在HA1区的核苷酸长度均为987bp，编码329个氨基酸；在NA区的核苷酸长度为1362bp，编码454个氨基酸。1998—2005年甲3亚型流感病毒HA1区与NA区的氨基酸同源性分别在90．9％～99．3％与95．2％～99．5％之间，HA1区的变异较NA区更大。这8年间在HA1区共发生了30个氨基酸的替代，其中14个氨基酸位点涉及HA1区的4个抗原决定簇；NA区发生了21个氨基酸替代，其中5个氨基酸位点涉及NA区的3个抗原决定簇。在1998与2002年无论是HA1区还是NA区，均产生了较大的变异，在氨基酸进化树上也形成了独立的分支。近年的甲3亚型毒株HA1区有11个糖基化位点，较早期毒株A/Aichi／2／68增加了5个，仅1998年至今的8年中就增加了3个。结论浙江省1998与2002年的二次较大规模的甲3亚型流感流行均与病毒的抗原性漂移有关。