甲3型流行性感冒病毒环介导逆转录等温扩增检测方法的建立与应用

目的 建立适用甲3型流行性感冒(流感)病毒核酸检测的环介导逆转录等温扩增(RT-LAMP)方法,为基层实验室流感快速诊断服务.方法 对甲3型流感病毒设计两对环介导特异性引物与一个环引物,采用环介导RT-LAMP技术对甲3型流感病毒核酸进行等温扩增,并对反应体系进行优化.结果 采用RT-LAMP技术检测甲3型流感病毒核酸,敏感度可达0.01TCID50/反应,与荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的敏感度相一致,且对H1和H5亚型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、风疹病毒、流行性腮腺炎病毒、副流感病毒与腺病毒无交叉反应,具有良好的特异性.采用该方法检测58份临床样本,病毒分离的阳性率为37.9%,而荧光定量RT-PCR与RT-LAMP的阳性率分别为53.45%和51.72%,敏感度明显高于通常的细胞病毒分离.结论 甲3型流感病毒环介导RT-LAMP检测方法,不仅快速特异、敏感性强,而且简便价廉,适于基层实验室使用.     

浙江省乙型流感病毒HA1基因分析

目的：了解浙江省近几年乙型流感病毒的基因变异情况和WHO推荐流感疫苗株对浙江省人体的保护情况。方法：采集浙江省类流感样本进行流感病毒的分离和鉴定，并对分离到的乙型流感病毒进行核酸的提取，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增病毒基因后进行病毒血凝素HA1基因核苷酸序列测定，用DNAMAN和BioEdit生物软件对测序结果进行分析处理，并与WHO推荐疫苗株基因进行比对。结果：分离到Yamagata系和Victoria系两个进化系的乙型流感病毒，两系毒株均未发现核苷酸的丢失和插入，糖基化位点没有太大改变。毒株之间核苷酸的同源性为95.25%，氨基酸的同源性为95.28%。Yamagata系毒株HA1区域核苷酸序列长度为1038 bp，推导的氨基酸序列长度为346个，氨基酸变异替换数在6-8之间；Victoria系毒株HA1区域的核苷酸序列长度为1041 bp，推导的氨基酸序列长度为347个，氨基酸变异替换数在2-8之间，相比Yamagata系毒株在163位上都多1个天冬酰胺（N）。基因进化树上可见明显的Yamagata系和Victoria系两个分支。结论：浙江省人群交替流行着Yamagata系和Victoria系两个抗原性不同的进化系的乙型流感病毒，病毒的基因发生了变异，抗原已发生漂移。2001、2006两年WHO推荐乙型流感疫苗株与我省当年流行株为不同谱系毒株，预防保护效果不够理想，其余年份为同一谱系毒株，预防保护效果较好。     

浙江省近年来流感病毒株的抗原性及人群免疫状况分析

目的 为了解1998－1999年浙江省分离的流感病毒株的抗原性以及杭州市区人群对各类流感病毒的体液免疫力。方法 我们采用常规大量半加敏双向血凝抑制（HI）试验检测相应毒株的交叉HI滴度并计算相应的抗原比。用微量半加敏HI试验检测人群流感HI抗体滴度。结果 浙江省近2年来共分离到12株流感病毒代表株,其中11株为甲3（H3N2）亚型,1株为乙型。A3／浙防／10／98毒株与A3／汉防／359／95、A3悉尼／5／97、A3／沪防／1／98毒株的抗原比分别为1．4、4．0和16．0;A3／浙防／7／99毒株与上述3种标准毒株的抗原比分别为22．6、2．0和1．4。B／浙防／31／99毒株与B／京防／172／97和B／深防／12／97毒株的单向HI滴度分别为≥10240和40。杭州市区人群各型流感HI抗体阳性率为62．4％－100．0％,GMT在11．67－275．49之间。提示,除A3／浙防／10／98毒株抗原性类似于A3／汉防/359/95外,其余甲3亚型毒株的抗原性均类似于A3／沪防／1／98病毒。B型毒株抗原性属于巴拿马类病毒。结论 杭州市区人群对甲3亚型和B型巴拿马类毒株普遍具有HI抗体免疫力。     

浙江省1996年急性弛缓性麻痹病例病原学分析

浙江省１９９６年报告急性弛缓性麻痹（ＡＦＰ）病例１６３例，采集粪便标本１６１例，分离到肠道病毒（ＥＶ）３７株，阳性率为２３０％。其中脊髓灰质炎（脊灰）病毒（ＰＶ）８株，分离率为５０％；非脊灰肠道病毒（ＮＰＥＶ）２９株，分离率为１８０％。８株ＰＶ经国家脊灰实验室鉴定均为疫苗株。对２６株ＮＰＥＶ定型，其中柯萨奇Ｂ组（ＣｏｘＢ）１０株，艾可（ＥＣＨＯ）７株，不能被中和９株。１９９６年采集ＡＦＰ病例接触者粪便标本１０２例，分离到ＮＰＥＶ３５株。     

4种核酸提取方法在流行性感冒病毒核酸检测中的比较

目的：比较常见的4种核酸抽提方法，比较其对流行性感冒（流感）病毒检测的敏感性差异，为实验室应用和结果的评价提供依据。方法：对已确定效价的甲1型流感病毒，作10^-2～10^-5系列稀释，选用Roche公司Hish Pure Viral RNA Kit、QIAGEN公司的Rneasy mini Kit、国产Z生物公司RNA提取试剂盒和Invitrogen公司Trizol试剂等4种核酸提取方法提取上述标本核酸模板，采用罗氏公司的RT-PCR试剂盒，用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）对其进行评价。结果：在对不同病毒拷贝数流感病毒的检测中，4种核酸提取方法以Roche公司High Pure Viral RNA Kit提取效率最高，以此提取效率作为100％，则QIAGEN Rneasy mini Kit、Invitrogen Trizol和国产Z生物公司RNA提取试剂盒的平均提取效率依次为89．71％、75．30％、68．00％。经方差分析及t检验，4种方法之间存在显著性差异（P均〈0．05）。对临床标本的检测，也获得相似结果。结论：各试剂之间提取核酸的效率存在差异，应该选择性价比较好的方法进行临床标本的实验室RNA提取。     

浙江首例人禽流感确诊病例流行病学调查

人禽流行性感冒（人禽流感）是由禽甲型流感病毒中某些亚型的毒株感染人而引起的急性呼吸道传染病，病死率高。1997年中国香港首次证实禽流感病毒（H5N1）感染人类以后，世界各地相继报道了多例禽流感病毒感染人并导致死亡事件，禽流感病毒已对人类健康构成严重威胁，引起了全世界的关注。我国大陆自2003年11月发生第一例人禽流感（H5N1）病例后，至2007年3月底，     

浙江省2000～2006年急性弛缓性麻痹病例实验室检测结果

为了巩固和加强浙江省的无脊髓灰质炎（脊灰）状态，继续保持高水平的口服脊灰减毒活疫苗（OPV）接种率和高质量的急性弛缓性麻痹（AFP）病例监测，进一步提高脊灰实验室的检测质量，及时监测可能出现的疫苗衍生脊灰病毒（VDPV）或输入性脊灰野病毒，以防止其在我省的扩散，现将浙江省2000-2006年AFP病例实验室检测结果报告如下。     

浙江省局部地区2002～2003年流行的无菌性脑膜脑炎的病原学检测与分析

浙江省局部地区 2 0 0 2～ 2 0 0 3年多次出现无菌性脑膜脑炎的流行。为对疫情进行病原学检测与分析 ,采集了临床标本 ,采用HEp 2、RD、Vero等细胞分离病毒 ,并用肠道病毒通用引物进行特异性逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)扩增。结果显示 :5 1份脑脊液标本中分离出埃可病毒 30型 (ECHO3 0 ) 5株 ,柯萨奇病毒B组 5型 (Coxsack ievirusB5,Cox B5) 1株 ;6 8份粪便标本中分离出ECHO3 0 34株 ,Cox B51株。RT PCR的结果与上述病毒分离结果相一致。此外 ,对采集的 1 5例患者的急性期、恢复期双份血清测定了特异性中和抗体 ,其中 1 3例患者抗体呈≥ 4倍增长。证实引起浙江省局部地区 2 0 0 2～ 2 0 0 3年无菌性脑膜脑炎的主要病原为ECHO3 0 。     

杭州市医务人员接触传染性非典型肺炎感染状况调查

目的调查杭州市医务人员接触传染性非典型肺炎(SARS)感染状况,探讨流行因素,评价防制措施.方法对2003年杭州市密切接触SARS病例的48名医务人员进行了流行病学调查和SARS抗体测定.结果调查的48名医务人员中,发病前接触1名,发病后接触48名;经常接触的有35名(72.9%),偶尔接触13名(27.1%).在隔离病房接触的有48名,门诊接触2名;以诊治病人接触为主(占80%),其次是给病人打针和护理病人等;有70.8%的人接触病人的血液和分泌物,有52.1%的人接触病人的排泄物;与SARS病人在1米以内接触的有47名(占97.9%),在1～2米接触的1名(占2.1%).48名医务人员接触SARS病人时,防护措施严密,双份血清测定SARS抗体IgG均阴性.结论杭州市密切接触SARS病例的医务人员未发现感染,采取严密防护是预防SARS感染的关键措施.     

实时荧光定量PCR技术快速检测麻疹病毒核酸的研究

目的建立以特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量RT-PCR方法,对麻疹病毒的核酸进行检测.方法对设计的引物与探针进行了筛选与条件优化,克服了常规RT-PCR定性检测的不足.结果具有对麻疹病毒检测的高度特异性与准确性,检测的敏感度可达0.1 TCID50,从病毒核酸提取至检测完成仅需3个多小时,操作简便,而且大大减少了常规PCR扩增产物的污染机会.结论采用该方法对麻疹病毒与相关的临床样本进行了检测,均获得了满意的结果,为麻疹病毒的分子生物学检测,提供了一种新方法.