RP-HPLC法测定阿立哌唑片剂中的阿立哌唑及有关物质

目的 :建立测定阿立哌唑片剂中阿立哌唑及有关物质的检测方法。方法 :采用反相高效液相色谱法 ,色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱 ,流动相为 0 .0 5mol·L-1 磷酸二氢钠水溶液 (含 1%三乙胺 ,磷酸调 pH至 5 .5 ) 乙腈 (5 0∶5 0 ) ,检测波长为2 17nm ,流速为 1.0ml·min-1 。结果 :阿立哌唑在 4.10 6～ 41.0 60mg·L-1 浓度范围内峰面积有良好线性关系 ,平均回收率为99 .90 %(n =9) ,重复性试验的相对标准偏差为 0 .82 %(n =6) ,最低检出限量为 0 .5 1ng ,有关物质与主药有较好的分离度。结论 :此法简单、专属性强、重现性好、结果准确可靠 ,适用于阿立哌唑片的质量控制。     

幽门螺杆菌oipA DNA重组质粒的构建及免疫保护作用

目的:探讨幽门螺杆菌(Hp)oipADNA重组质粒在防御Hp感染中的作用。方法:将HpoipA基因的开放读码框架定向克隆入pVAX1载体,获得的重组子pVAX1oipA转染SGC7901细胞,用RTPCR及ELISA方法检测细胞oipA转录及翻译水平的表达。抽提纯化重组质粒pVAX1oipA,经肌肉注射免疫BALB/c小鼠(100μg/只)每周1次,共3次,以质粒pVAX1(空载组)和生理盐水(空白组)做对照,分别于末次注射1个月和2个月后ELISA法检测血清中相应抗体。在证实有免疫应答的基础上,以HpSS1攻击小鼠(0.5×1090.5ml/只)3次,于末次攻击4周后,取胃黏膜组织作细菌学(包括胃黏膜快速尿素酶试验、细菌培养鉴定)和组织学检测。结果:pVAX1oipA转染的SGC7901细胞在转录水平和翻译水平均有相应的表达;免疫小鼠产生抗oipA抗体。免疫小鼠经细菌攻击后,实验组、空载组和空白组胃黏膜组织快速尿素酶实验阳性率分别为0(0/10)、90%(9/10)和100%(5/5),细菌培养阳性率分别为20%(2/10)、90%(9/10)和100%(5/5),组织学检测结果:空载组和空白组小鼠胃黏膜均出现轻度或重度糜烂,而实验组小鼠胃黏膜80%(8/10)正常,显示oipADNA重组子具有免疫保护作用。结论:oipADNA重组子能有效诱导抗Hp保护性免疫反应。     

IIb期子宫颈癌的手术治疗探讨

本文对我院１９８３年１９８８年间手术治疗的５７例Ⅱｂ期子宫颈癌进行了统计分析。全组均采用子宫广泛切除加盆腔淋巴结清扫术，部分病例加用放疗。随访时间不少于５年，随访率为９６．４％，５年生存率为７７．１％。分析结果表明，手术治疗Ⅱｂ期子宫颈癌的疗效不低于单纯放射治疗。     

~(51)C_r-释放法检测肿瘤病人外周血细胞及外周血LAK细胞的NK活性

本文以国产~(51)Cr-铬酸钠为标记物,应用~(51)Cr-释放法进行了肿瘤病人的 NK 细胞活性检测。评价了国产~(51)Cr-铬酸钠用于~(51)Cr-释放法检测细胞毒活性的可行性(NR=21.3±4.6);检测晚期癌症病人外周血淋巴细胞(PBL)NK 活性7例(SR=8.1±3.3).良性肿瘤病人 PBL NK 活性15例(SR=22.9±9.8);并研究了天然人白细胞介素-2(hlL-2)激活肿瘤病人 PBL 诱生 LAK 细胞 NK 活性的变化规律,一次性激活(1000U/ml)NK 活性高峰出现在24～48小时。     

幽门螺杆菌glmM DNA重组质粒的构建及体外表达

目的构建幽门螺杆菌(Hp)pVAX1-glmMDNA重组质粒,体外转染SGC-7901细胞并鉴定其表达蛋白的抗原性。方法RT-PCR方法从国际标准株NCTC11637中获取glmM全长基因,克隆插入T载体。测序后经酶切、连接反应将glmM的开放读码框架定向克隆入真核表达载体pVAX1,酶切初步鉴定后测序确认。通过脂质体法将pVAX1-glmMDNA重组质粒转染SGC-7901细胞,检测其转染效率,确定转染成功后RT-PCR法检测glmM在转录水平的表达,ELISA法鉴定表达蛋白的抗原性。结果DNA测序结果显示扩增出的glmM全长基因与GenBank公布的HpglmM序列有96%的同源性。PCR、酶切和测序结果证实glmM目的基因成功克隆入真核表达载体pVAX1。重组质粒转染的细胞经RT-PCR扩增获得1.4kb片段,与目的基因大小相符。ELISA结果显示重组质粒转染细胞的超声破碎物及培养上清液中抗原的滴度比对照组高2倍以上。结论成功构建了pVAX1-glmMDNA重组质粒,其表达蛋白具有良好的抗原性,为进一步研究其抗Hp感染的效果及制备相应有效DNA疫苗奠定基础。     

儿童病毒性脑膜炎、脑炎中肠道病毒感染的分子生物学分型检测及临床研究

目的探讨儿童病毒性脑膜炎、脑炎中肠道病毒感染的分子生物学分型。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及简并引物扩增并测序,利用Genbank核对分型,检测东营地区2008年1月-2012年2月63例临床诊断为病毒性脑膜炎、脑炎患儿脑脊液中的肠道病毒(EV)RNA,并结合临床特点进行分析。结果 63例病毒性脑膜炎、脑炎患儿的脑脊液经RT-PCR检测,EV感染阳性率为74.6%(47/63)。利用通用引物筛选出的阳性标本,并采用简并引物经两次PCR共获得阳性结果 31例(66.0%)。随机抽取23条阳性片段进行克隆测序,测序结果与Gen Bank标准EV毒株进行同源性对比分析,相关序列同源性均在97%以上。肠道病毒引起中枢神经系统感染的临床特征在各个年龄组有所不同,33例急性期EV患儿脑脊液中白细胞数不同程度增高(均数76×106/L)。结论 EV是儿童无菌性脑膜炎、脑炎的最主要的病原体。采用RT-PCR可以快速准确的检测出中枢神经系统感染的肠道病毒;采用分型引物扩增并测序,将EV的VP1部分序列与GENBANK中的EV标准毒株进行对比,根据基因序列的同源性进行EV型别鉴定是一种切实可行的方案。EV引起的病毒性脑膜炎临床症状一般较轻、无特异性,多数患儿CSF中白细胞高于正常范围。     

驻苏州地区某新兵连冻疮发生情况调查分析

目的调查驻苏州地区某新兵连冻疮发病情况,分析其特点,提出防治措施。方法对苏州地区某新兵连90名新兵进行现场检查,记录冻疮发生部位、类型等资料,然后进行数据处理和分析。结果冻疮发病总数为59例,患病率为65．6％;其中耳廓部位冻疮患病率最高,为57．8％,其次为手部,患病率为34．4％;女兵较男兵患病率高;绝大多数为I度冻疮（89．8％）,少数为Ⅱ度冻疮（10．2％）,未发生Ⅲ度冻疮;福建籍新兵较江浙籍新兵冻疮患病率高。结论某新兵连的冻疮发生率较高,但绝大多数为程度较轻的I度冻疮,需加强防治措施,降低患病率。     

生血宁片治疗围生期贫血的临床观察

目的:观察生血宁片治疗围生期孕妇贫血疗效和不良反应发生情况。方法:采用前瞻性、随机、对照的临床研究,将已确诊为缺铁性贫血的围生期孕妇260例随机分为两组,每组各130例。治疗组口服生血宁片0.5g/bid(轻度)或0.5g/tid(中重度),对照组仅加强膳食营养指导,共观察8周。结果:治疗前生血宁片组与对照组在年龄、体重和血红蛋白(Hb)、红细胞(RBC)、血清铁蛋白(SF)和转铁蛋白饱和度等方面均无差异(P>0.05)。治疗后,治疗组Hb108.6±12.6g/L,RBC4.18±0.56×1012/L,SF12.26±4.38μmol/L,总铁结合力(TIBC)63.22±9.78μmol/L,显效率73.1%,有效率87.7%;而对照组显效率30.8%,有效率71.6%。结论:生血宁片治疗围生期贫血效果明显,无明显不良反应发生,是一种治疗围生期贫血的安全有效的药物。     

HCV2a(JFH1)NS5A蛋白在原核和真核细胞中的表达、鉴定及分析

目的在原核与真核细胞中表达丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)2a型JFH1(japanese fulminanthepatitis 1)株NS5A蛋白,分析JFH1NS5A蛋白与其它基因型NS5A蛋白间的差异,为进一步研究NS5A蛋白在HCV病毒复制中的作用奠定基础。方法PCR特异扩增JFH1NS5A基因,克隆入pET-32a和pEGFP-N1载体中,构建JFH1NS5A的原核和真核重组表达质粒pET-JFH1NS5A和pEGFP-JFH1NS5A。将pET-JFH1NS5A转化大肠杆菌BL21(DE3),pEGFP-JFH1NS5A转染HEK293T细胞,在原核与真核系统中进行表达,并以SDS-PAGE、荧光显微术和Westernblot方法检测。利用PubMedBLAST软件对JFH1与HCV1a、1b、2b和2c型NS5A蛋白间的同源性进行了分析。结果酶切鉴定及测序结果表明成功构建了重组质粒pET-JFH1NS5A和pEGFP-JFH1NS5A。SDS-PAGE电泳检测到融合蛋白在原核细胞中的表达,荧光显微镜观察和Westernblot检测到了GFP-JFH1NS5A融合蛋白在HEK293T细胞中表达。BLAST分析显示,JFH1和H77、HC-J4、HCV-J8和BEBE1病毒株NS5A蛋白的同源性分别为57%、60%、68%和74%。结论JFH1NS5A蛋白在原核与真核细胞中表达成功,为研究HCVNS5A在JFH1株病毒高效复制中的作用提供了材料。     

高效毛细管电泳测定西洋参多糖的方法研究

目的研究毛细管电泳测定西洋参多糖的方法。方法经提取、纯化 ,运用毛细管电泳法测定西洋参多糖。结果 4次进样的内标与多糖峰面积比RSD为 1.94% ,线性范围为 10～ 40ng。 结论该方法可用于西洋参多糖的定性、定量分析