可溶性HLA-A2-IgGFc融合蛋白在昆虫细胞的表达及鉴定

目的利用杆状病毒-昆虫细胞表达体系制备可溶性HLA-A2与免疫球蛋白IgGFc段的融合蛋白。方法首先将可溶性HLA-A^＊0201和IgG3分子Fc段的cDNA基因插入杆状病毒表达载体pFastHTa,形成重组载体pFHT-sHLA-A^＊0201-IgGFc。将该重组载体转化DH10Bac大肠杆菌,sHLA-A^＊0201-IgGFc基因同源重组入菌体内杆粒（Bacmid）中。抽提阳性杆粒,转染昆虫细胞Sf9,72 h收集病毒上清。再将病毒上清感染Sf9细胞,96 h收集细胞并裂解,SDS-PAGE观察其表达。细胞裂解液经Ni^＋-NTA树脂纯化Western-blot法鉴定其蛋白质序列,间接ELISA法鉴定是否形成正确构象。结果融合蛋白不仅与HLAⅠ类分子的构象特异性抗体（W6/32）结合,还与羊抗人IgG抗体结合。结论所制备可溶性HLA-A2-IgGFc融合蛋白序列正确,并在体外形成正确空间构象。     

血清和腹水采集间隔时间对腹水鉴别诊断的影响

目的:研究血清和腹水采集间隔时间对腹水鉴别诊断的影响。方法:采用SAAG和腹水/血清肿瘤学标志物(F/S比值)两种腹水分类标准,观察两种血清和腹水采集间隔时间(≤2h和>2h)对上述两种腹水分类标准的结果分析有无影响。结果:105例腹水患者,按间隔时间≤2h检测SAAG,其中54例SAAG≥11g/L,51例SAAG<11g/L,间隔时间>2h时,50例SAAG≥11g/L,55例SAAG<11g/L,两者之间差异无显著性(P>0.05);按间隔时间≤2h检测F/S比值,30例F/S≥1.2,75例F/S<1.2,间隔时间>2h时,33例F/S≥1.2,72例F/S<1.2,两者之间差异也无显著性(P>0.05)。结论:血清和腹水采集间隔时间对按上述两种标准进行腹水分类并无明显影响。     

实用临床诊疗规范--消化系统疾病(二)第五节习惯性便秘

1概述 便秘是一种常见症状,是指具有排便频率减少(7天内排便次数少于2～3次)、排便困难和粪便干结等情况.正常人排便习惯不一,部分正常人习惯于隔数天排便一次而并无异常,故不能以排便1次/d作为正常排便的标准.习惯性便秘又称为单纯性便秘,属于功能性便秘,其发生的原因有:①精神神经因素影响;②肠道紧张性降低;③结肠运动功能失调;④药物影响;⑤食物缺乏纤维素;⑤腹肌及盆肌的张力不足.     

PGE2对胃癌MKN28细胞VEGF表达的影响

目的:观察前列腺素E2(PGE2)对胃癌MKN28细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA转录、蛋白表达水平的影响．方法:对胃癌MKN28细胞分别给予0．1,1,5, 10μmol／L浓度的PGE2处理3 h,分别以实时PCR,Western blot检测VEGF mRNA转录水平及VEGF蛋白表达水平的变化．结果:胃癌MKN28细胞经用不同浓度的PGE2作用3 h,VEGF mRNA表达呈剂量依赖性增加,其表达在PGE2浓度为0．1,1,5,10μmol／L时与对照组之间的差异均有统计学意义(0．67±0．093,0．74±0．13,0．87±0．07,1．49±0．15 vs 0．42±0．10．P<0．05或P<0．01)．VEGF蛋白表达量与PGE2浓度存在正相关,其表达在PGE2浓度为1,5,10μmol／L组与对照组之间的差异均有统计学意义(51．02±2．16,66．69±9．85,136．49±6．89 vs 26．87±3．98,P<0．05或P<0．01)．结论:外源性PGE2可显著增加胃癌MKN28细胞VEGF的表达．     

金龙胶囊对胃癌细胞MGC-803和BGC-823侵袭转移能力的影响

目的:探讨金龙胶囊对人胃癌MGC-803,BGC-823细胞侵袭和迁移能力的影响并对其具体机制进行探讨。方法:体外培养胃癌MGC-803,BGC-823细胞,分为金龙胶囊组(0.1,0.2,0.4,0.8 g·L~(-1)),空白组和5-氟尿嘧啶(5-FU)组,采用噻唑蓝(MTT)比色法分别检测金龙胶囊对MGC-803,BGC-823细胞增殖的抑制作用,计算半数抑制率(IC50);采用细胞侵袭(transwell)小室法和划痕实验检测金龙胶囊处理MGC-803和BGC-823细胞24 h后,细胞侵袭和迁移能力发生改变;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测金龙胶囊处理MGC-803,BGC-823细胞24 h后E-钙黏素(E-cadherin),基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达情况。结果:金龙胶囊能明显抑制MGC-803,BGC-823细胞的增殖,呈一定的浓度及时间依赖性;与空白组比较,金龙胶囊能明细减少MGC-803,BGC-823细胞的穿膜细胞数目,可明显影响2种胃癌细胞的侵袭与迁移能力,并呈明显浓度依赖性(P0.05);金龙胶囊组的划痕距离较空白组明显降低,影响MGC-803,BGC-823细胞迁移,并呈浓度依赖性(P0.05);与空白组比较,金龙胶囊组能够提高MGC-803和BGC-823细胞中E-cadherin蛋白表达,降低MMP-2,MMP-9蛋白表达水平,且呈一定的量效关系(P0.05)。结论:金龙胶囊能够抑制人胃癌MGC-803,BGC-823细胞的侵袭和迁移能力,其作用机制可能与上调E-cadherin表达,抑制MMP-2,MMP-9表达水平有关。本研究证实了金龙胶囊对胃癌MGC-803,BGC-823细胞抗侵袭转移的部分机制。     

腹腔镜与内镜联合治疗胃癌一例

患者男,62岁,因反复上腹胀2个月就诊,无明显诱因,无恶心、呕吐、呕血、黑便,自服奥美拉唑1周,效果不明显.胃镜检查：胃体小弯侧见1.5 cm×1.5 cm的凹陷性病变,黏膜稍充血水肿 活检病理：胃体小弯腺上皮重度异型增生伴癌变.