Fas cDNA克隆、表达及重组蛋白纯化的研究

目的:获得高质量及充足的Fas重组蛋白。方法:采用PCR构建表达重组质粒,亲和层析纯化Fas重组蛋白,ELISA检测其免疫学功能。结果:①PCR扩增获得目的片段约 470 bp。②Sanger双脱氧链终止法测序表明,该 DNA序列仅 174位由A→G突变,属于同义突变,与已知的Fas膜外区氨基酸完全一致。③重组质粒经IPTG诱导有一蛋白得以表达,其目的融合蛋白占细菌总蛋白的17. 4%,分子量约为 34．3 kD。④经 Factor Xa切割 Fas融合蛋白,纯化获得 Fas重组蛋白,Western印迹出现特异性Fas蛋白带,分子量为21．3kD,与预测结果相吻合。⑤ELISA检测 Fas重组蛋白,具有抗体的免疫学活性。结论:成功地表达并纯化了Fas重组蛋白,解决了Fas不易获得的难题,为研究Fas提供了良好的实验材料。     

Cariporide对兔心房电重构的影响

目的：探讨钠氢交换体Ⅰ型(NHE-1)特异性抑制剂cariporide对快速起搏所致兔心房电重构的影响。 方法： 30只兔随机等分为3组：对照组、起搏组和cariporide组。起搏组和cariporide组给予6 h 600 beats/min的快速心房起搏。测定各组不同时点的心房有效不应期（AERP200，AERP150，AERP130），连续刺激6 h后取左右心耳组织，用Western blotting测定NHE-1的含量。 结果： 在快速起搏后1 h后，起搏组的AERP200较起搏前明显缩短，2 h时达高峰，相对缩短量为（15.63±9.04）ms，而对照组和cariporide组AERP未发生明显变化，起搏2h时相对缩短量为(1.43±2.44)ms和(1.43±6.90)ms（P<0.05，与起搏组相比），这些变化一直保持至快速起搏后6 h；起搏组的AERP频率适应性下降, 起搏前AERP130较AERP200缩短(11.88±15.57)ms，起搏后6 h只缩短(4.38±5.63)ms。而cariporide组的AERP频率适应性则未发生显著变化。起搏组右心耳组织的NHE-1含量显著少于对照组（P<0.05），cariporide组的右心耳组织NHE-1含量与对照组差异不显著。 结论： Cariporide可有效阻止快速心房起搏引起的AERP缩短，但不影响起搏引起的NHE-1含量的下降。     

CTT triplex系统各基因座位等位基因在葡萄胎基因组中的分布及其意义

我们对采用PCR和聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴别出的37例DNA完全来自父方的遗传学完全性葡萄胎(g-CHM)进行基因组中CTTtriplex系统各基因座位(CSF1PO、TPOX和TH01)等位基因分布的分析,并初步研究了这些等位基因分布与临床预后的关系。结果显示,在37例g-CHM中,CSF1PO座位中3个等位基因(11,12和14)和TPOX座位中的1个等位基因(11)的出现率与它们在北京地区人群中的基因频率差异显著;g-CHM中CSF1PO、TPOX和TH01基因座位杂合度显著低于北京地区人群的杂合度(P值均远小于0.01);在23例良性g-CHM和10例侵袭性g-CHM中:CSF1PO座位的等位基因10、11在良性中的出现率高于在侵袭性g-CHM中(P=0.026148),等位基因12在良性中的出现率低于在侵袭性g-CHM中(P=0.023879);TPOX座位的等位基因8在良性中的出现率高于在侵袭性g-CHM中(P=0.004322),而等位基因11在良性中的出现率低于其在侵袭性g-CHM中(P=0.008671)。上述结果提示,葡萄胎基因组中存在某些等位基因分布与在人群中的分布不同,而且葡萄胎是否具有侵袭性也和某些等位基因的出现率过高或过低有相关性,这些与侵袭性有关的等位基因可能成为预测葡萄胎是否具有侵袭性的标志物。     

抗癌药用植物猫人参(Actinidia macrosperma)离体再生系统的建立

中药猫人参,又名大籽猕猴桃,是著名抗癌药用植物,其野生资源已近枯竭。本文选用猫人参的茎段(至少带一个节)、叶片作为外植体,筛选出了适合猫人参从启动、快繁直至生根等各个阶段的最适培养基,在实验室建立了程序简单、重复性好的再生系统,实现了猫人参组培苗的快速繁殖。以茎段作为外植体效果较好,既容易消毒,同时又能很快诱导腋芽萌发;以叶片作为外植体,能成功诱导出愈伤组织,但此愈伤组织的分化能力极低。以茎段作为外植体获得的无菌培养物在不同发育阶段适宜的培养基组成:外植体启动培养基为MS+BA 5 μmol/L+NAA 1 μmol/L;最适增殖培养基为MS+BA2 μmol/L+GA 1.5 μmol/L+ZT 4μmol/L,35 d繁殖系数为9-10;最适生根培养基为1/2MS+IBA 2μmol/L,生根率达1 00％,培养35 d,平均苗高6.28cm,平均移栽成活率为91％。     

CD54和LFA-1的相互作用在6A8α-甘露糖苷酶表达抑制的JurkatT细胞的黏附性增强中的作用

目的研究CD54和LFA-1的相互作用在6A8 α-甘露糖苷酶表达抑制的Jurkat细胞(AS)的黏附性增强中的作用。方法用细胞凝集试验确证AS细胞间黏附的增强，用细胞与细胞间黏附分子-1-人IgG的Fc片段(ICAM-1-Fc)的黏附试验和阻断性抗CD11a抗体的阻断试验研究CD54-LFA-1的作用，用单克隆抗体MEM-148检测As细胞LFA-1亲和力的变化，用单克隆抗体NKI-L16检测AS细胞LFA-1亲合力的变化，用鬼笔环肽染色细胞骨架，用Jurkat-Raji细胞间的作用作模型研究6A8α-甘露糖苷酶表达抑制对T和B细胞间黏附的影响，用ConA结合试验检测细胞中蛋白质N-糖基化的变化。结果(1)AS细胞间的黏附性增强主要与CD54及CD11a表达的增强相关，也与LFA-1亲和力的增高相关；(2)AS细胞的细胞骨架发生重排；(3)As细胞与Raji细胞间的黏附也增强；(4)ConA与AS细胞的结合增强。结论CD54和LFA-1的相互作用在AS Jurkat T细胞的黏附性增强中起重要作用。细胞骨架重排也可能起作用。As细胞的蛋白质发生了N-糖基化修饰。     

合成消旋丹参素及其衍生物对血小板聚集性和cAMP含量的影响

合成消旋丹参素(简称合成丹参素)及其衍生物(BLA、BLE)在体外实验和体内静脉注射时,对ADP诱导的家兔和大鼠血小板聚集性均有明显的抑制作用。BLK和BLE有较强的促进血小板解聚作用,而合成丹参素较弱。合成丹参索、BLA和BLE在体外实验时,无升高血小板内cAMP作用,反使其cAMP含量下降。提示合成丹参素及其衍生物对血小板功能的作用,不是通过提高cAMP水平;推测可能和抑制血栓素A_2(TXA_2)合成酶有关。     

rGH＋CLS减少电损伤组织坏死的研究

研究rGH CLS局部应用对减少高压电损伤组织进行性坏死的作用。使用该实验室已建立的重度高压电损伤模型,新西兰大白兔45只均分5组。治疗分别使用rCH CLS（1组）,CLS（2组）,rGH(3组）,盐水（4组）和5组对照,临床解剖探查、组织学和超微结构等方法观察。结果：治疗1组有明显的减少组织坏死作用。15d动物伤肢完整,而2,3和4组虽也各有不同程度延缓坏死的作用。但动物伤肢最终坏死丧失,5组7d大部软组织基本坏死,12d坏死离断,光电镜检查1组5d治疗后粒细胞浸润较少,炎性反应轻,有纤维组织细胞再生和新生的线粒体,10d修复过程明显,2,3,4组7d后坏死明显,5组肌坏死迅速,结果表明：CLS持续组织内透析冲洗和rGH局部肌注能有效地减少电损伤坏死速度和范围,值得研究应用。     

肾病综合征患者焦虑因素分析

目的探讨肾病综合征患者焦虑的影响因素及对策.方法应用状态-特质焦虑问卷(STAI)、社会支持评定量表(SSRS)、生活事件量表(LES)等对80例肾病综合征患者进行测查.结果肾病综合征患者状态焦虑问卷(SAI)分值明显高于正常人群(49.55±8.18Vs39.31±8.66)(P＜0.01).逐步回归分析发现,患者焦虑的主要因素为性格内向、社会支持状况差、负性生活事件多、担心治疗效果不好、担心医生治疗水平不高等.结论肾病综合征患者有明显的焦虑情绪,受多种因素影响,加强心理干预,配合药物治疗,能收到较好效果.     

肾衰透析患者拔牙的临床研究

目的 :探讨肾衰透析患者拔牙的安全性。　方法 :对 42例肾衰血透患者行 98次拔牙手术 ,共拔除患牙 12 2颗 ,术前采取全口洁治、服用抗生素、控制血压等措施 ,术后加强局部止血处理 ,预防出血、感染及心血管系统等并发症的发生。　结果 :透析组术后出血 44次 ,拔牙创口血块充盈不良或脱落 2 7次 ;对照组分别为 4和 5次 (94次手术 ,P<0 .0 5 )。拔牙创口定期观察 1个月 ,均愈合良好。　结论 :慢性肾衰患者通过透析 ,尿毒症得到控制和改善时 ,在作好围拔牙期处理的情况下 ,行拔牙手术是安全可行的