rhTNF-α对成骨向分化前后的人脂肪基质细胞分泌血管生成相关生长因子的影响

目的：研究在重组人肿瘤坏死因子（recombinant human tumor necrosis factor alpha,rhTNF-α）刺激下人脂肪基质细胞（human adipose tissue-derived stromal cells, hADSCs）增殖的改变及成骨向分化前后血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、成纤维细胞生长因子2（fibroblast growth factor-2,FGF-2）和胰岛素样生长因子1（insulin-like growth factor-1,IGF-1）分泌的变化。方法：采用吸脂术获得的第4代hADSCs,以终浓度为0、1、5、10、50、100 μg/L的rhTNF-α刺激hADSCs,分别在48、72、96 h后行MTT法检测不同浓度rhTNF-α对hADSCs增殖的影响;并以该浓度梯度的rhTNF-α刺激hADSCs,24 h后收集上清,以ELISA法检测VEGF、FGF-2和IGF-1的分泌情况;在成骨向诱导的第1、3、7、14天收集细胞上清,ELISA法检测上述3种生长因子分泌的变化,收集细胞上清前24 h更换培养基,并在相应孔中加入rhTNF-α,使其终浓度为10 μg/L。所有ELISA数据均以相应培养孔的细胞数进行校正。结果：rhTNF-α能促进hADSCs的增殖,其作用表现为一定的浓度和时间依赖。相比于对照组,48 h时,10 μg/L rhTNF-α对增殖的促进作用并不明显,但96 h时则表现为促进作用（P<0.01）,而100 μg/L rhTNF-α在48 h表现为抑制作用（P<0.01）,96 h时则表现为明显的促进作用（P<0.01）。相对于对照组,rhTNF-α可以显著促进hADSCs分泌VEGF、FGF-2和IGF-1（P<0.01）;hADSCs经成骨向诱导后,上述3种生长因子的分泌有增加的趋势;不同成骨向分化阶段的hADSCs用10 μg/L rhTNF-α刺激后,在诱导第1天,rhTNF-α显著促进VEGF的分泌（P<0.01）,但对FGF-2和IGF-1的分泌无显著性影响;在诱导第3天和第7天,rhTNF-α对VEGF（P<0.01）、FGF-2（P<0.05）和IGF-1（P<0.05）的分泌均有促进作用;但在第14天则抑制VEGF（P<0.01）、FGF-2（P<0.05）和IGF（P<0.05）的分泌。结论：一定浓度的rhTNF-α对hADSCs的增殖有促进作用;hADSCs分泌VEGF、FGF-2和IGF-1具有rhTNF-α的浓度依赖;在不同成骨向分化阶段,rhTNF-α对hADSCs分泌VEGF、FGF-2和IGF-1这3种生长因子的作用不同。     

残胃癌临床病理特点与幽门螺旋杆菌关系的研究

目的探讨幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori，HP）感染与残胃发生癌变的关系。方法经胃镜取49例残胃癌患者和47例普通胃癌患者的组织标本，采用快速尿素酶法检测HP的感染情况，同时行病理检查。结果残胃癌组HP阳性率显著的低于普通胃癌组（P〈0．01）；49例残胃癌患者的主要病理类型为低分化腺癌28例（57．14％），其他病理类型包括，乳头状腺癌3例（6．12％），管状腺癌6例（12．24％），中分化腺癌8例（16．33％），高分化腺癌2例（4．08％），印戒细胞癌1例（2．04％），未分化癌1例（2．04％）等；BillrothⅠ式手术残胃癌患者HP阳性率（41．67％）显著的高于BillrothⅡ式手术残胃癌患者的HP阳性率（10．81％）。结论残胃癌患者病理类型可能是以低分化腺癌为主要类型；HP的感染可能不是残胃癌的主要发病机制；BillrothⅡ式手术引起的胆汁反流可能是残胃癌发病的主要因素之一。     

早期康复治疗对股骨头坏死保髋术后患者髋关节功能及日常生活能力的影响

【目的】探讨早期康复治疗对股骨头坏死保髋术后患者髋关节功能及日常生活能力的影响。【方法】采用简单随机法将60例单髋股骨头坏死患者随机分为康复治疗组(30例)与对照组(30例)。两组采用相同的保髋手术治疗,康复治疗组术前即进行康复指导与训练,术后进行系统康复治疗,对照组则由患者自行恢复,无系统康复治疗。比较两组患者治疗后手术侧髋主动活动范围(AROM)、疼痛程度的视觉模糊评分(VAS)和日常生活能力的功能独立性评定(FIM)。【结果】康复治疗组治疗后AROM和疼痛程度的改善均优于对照组(P<0．01);在FIM评定中,患者生活自理、转移、运动3项内容的计分高于对照组(P<0．01)。【结论】早期康复治疗能提高股骨头坏死保髋术后患者的髋关节功能及日常生活能力。     

PFOS致SH-SY5Y细胞凋亡及可能机制

目的探讨全氟辛烷磺酸盐(PFOS)对成人神经母瘤细胞(SH-SY5Y)的凋亡效应及可能的机制。方法实验中PFOS剂量设置为200、150、100、50、10、1μmol/L和DMSO(对照组)。体外培养SH-SY5Y细胞,以不同浓度PFOS(1、10、50、100、150、200μmol/L)处理细胞。染毒24 h和48 h后用CCK8法检测SH-SY5Y细胞活性,应用Annexin-V FITC/PI双染法结合流式细胞术检测细胞凋亡,紫外和荧光分光光度法检测SH-SY5Y细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GSH)、总活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的影响。结果 PFOS暴露降低了SH-SY5Y细胞活性,并呈明显的剂量效应关系;PFOS导致SH-SY5Y细胞凋亡;紫外和荧光分光光度法结果显示PFOS引起SH-SY5Y细胞中SOD和GSH水平下降,与对照组相比,最高剂量组PFOS引起GSH含量从8.00±0.12 nmol/mg蛋白降至5.89±0.90 nmol/mg蛋白;同时引起总活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)水平上升,与对照组相比,最高剂量组PFOS引起MDA含量从1.92±0.17 nmol/mg蛋白显著上升至6.95±0.26 nmol/mg蛋白。结论PFOS可能通过对SH-SY5Y细胞产生氧化应激损伤从而对SH-SY5Y细胞产生毒性效应。     

血友病的诊断及治疗的研究进展

血友病是相对罕见的遗传性出血性疾病,患者可因反复关节出血导致关节畸形、关节残疾甚至于重要脏器出血危及生命,因此,对血友病的认识、诊断、治疗尤为重要。该文对近年来血友病的基因诊断、治疗方面的进展进行总结。     

通道下肌间隙入路腰椎固定融合术并发神经损伤的原因及预防

目的总结通道下肌间隙入路腰椎固定融合术并发神经损伤的特点,分析损伤原因并提出预防措施。方法武警浙江省总队医院2012年6月—2015年12月由同一组医师采用通道下肌间隙入路固定融合术治疗的腰椎病变患者277例,其中9例出现神经损伤(男4例、女5例),年龄42~78岁,平均56.7岁。腰丛损伤1例,马尾神经损伤1例,神经根损伤7例。手术操作损伤3例,螺钉位置不正确损伤2例,血肿压迫2例,混合因素1例,原因不明1例。予非手术治疗5例,再次手术4例。结果 9例患者随访9~36个月,平均22.5个月。末次随访时,手术操作直接损伤的3例中2例部分恢复,1例完全恢复;2例椎弓根螺钉位置不正确所致的神经根损伤完全恢复;2例血肿压迫所致神经损伤者1例完全恢复,另1例大部分恢复;混合因素导致马尾神经损伤的1例患者部分恢复;损伤原因不明的1例完全恢复。结论通道下肌间隙入路腰椎固定融合术的神经并发症以神经根损伤多见。神经损伤有显露和手术方式的客观原因,但术者的操作可能是更主要的因素。术前应严格选择病例、术中操作要谨慎细致,以预防神经损伤的发生。     

A PCR-basedRapidNeutralizationAssay for GII.4 NorovirusInfection in HIEC6CellCulture

Because of limited viral replication and lack of cytopathic effect in cell culture,a new PCR-based rapid seroneutralization assay for detection of GII.4norovirus neutralized antibodies was developed with serum samples from acute-phase patients,convalescent-phase patients and healthy controls.According to this study,neutralizing antibodies were detected in 100% of     

实验性颅内压增高对垂体－靶腺轴激素的影响

雄性麻醉犬９只，硬脑膜外置套囊注盐水，阶梯升高７只犬的颅内压（ＩＣＰ）至６．７，１３．３和２０．０ｋＰ３，观察每次升高ＩＣＰ稳定１０ｍｉｎ后的血液动力学和垂体－靶腺轴激素及其组织结构的变化．结果表明随着ＩＣＰ的阶梯性增高，血压也升高，心输出量增加，心率减慢；但当ＩＣＰ升至２０ｋＰａ，心率反而变快，颅内灌注压明显降低．ＩＣＰ升至各阶梯水平，Ｔ３均降低，皮质醇增高显著（Ｐ＜０．０５），Ｔ４和ＬＨ基本不变，ＴＳＨ均＜１　μｇ／Ｌ．光镜观察脑垂体、甲状腺和肾上腺结构基本正常．     

雷公藤内酯对海人酸诱导大鼠脑小胶质细胞MHC分子表达的影响

目的:评价雷公藤内酯对海人酸致痫大鼠神经元的免疫保护作用。方法:结晶紫染色观察神经元形态,免疫组化技术检测小胶质细胞MHC-Ⅰ、Ⅱ类分子的表达。结果:30μg/kg雷公藤内酯可使大鼠的癫痫抽搐状态明显较海人酸组缓和,出现时间较海人酸组晚(P<0.05),且可使海人酸诱导大鼠活化小胶质细胞的数量减少,凋亡神经元数量减少。30μg/kg雷公藤内酯可下调海人酸诱导大鼠脑小胶质细胞表达MHC-Ⅰ、Ⅱ类分子(P<0.01)。结论:雷公藤内酯通过抑制小胶质细胞表达MHC-Ⅰ、Ⅱ类分子和免疫应答对海人酸诱导大鼠神经元凋亡具有免疫保护作用。     

龙胆苦苷在人尿中的含量测定及排泄研究

目的:建立固相萃取液质联用方法测定人尿中龙胆苦苷浓度,研究人体静脉滴注注射用秦龙苦素的主要代谢途径。方法:尿样加入咖啡因内标,经固相萃取后LC-MS/MS分析。色谱条件为:Rescek C8柱(150 mm×2.1 mm,5μm),流动相为:甲醇-10 mmol/L醋酸铵缓冲液-乙腈(50∶40∶10),流速为0.2 mL/min,质谱检测采用多反应离子监测方式。12名健康受试者随机分组交叉静脉滴注80,240,400 mg药物,用本法测定各时段尿样的浓度。结果:龙胆苦苷在30~9 000 ng/mL线性良好(r=0.998 0),回收率为91.10%~96.21%,提取回收率为100.52%~103.83%,高、中、低浓度日内和日间变异系数均小于10%;24 h内3个剂量下原形药物在尿中累积排泄率分别为(76.59±10.02)%、(71.95±12.12)%、(79.76±8.54)%,累积排泄量与给药剂量呈正比,排泄高峰为0~5.5 h。结论:本方法适用于临床药物动力学研究,注射用秦龙苦素在人体内主要是以原形龙胆苦苷经肾脏排泄。