山茱萸多糖对乳腺癌MCF-7细胞的影响及其通过调控AMPK/SIRT1通路的作用机制研究

目的：探讨山茱萸多糖对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响,并通过观察山茱萸多糖对腺苷酸活化蛋白激酶/沉默信息调节因子1（ AMPK/SIRT1）通路的调控作用探索其可能的作用机制。方法：体外培养MCF-7细胞,随机分为对照组（正常培养基培养）和山茱萸多糖低、中、高剂量组（分别予12.5、25.0、50.0 mg/mL山茱萸多糖培养）以及山茱萸多糖高剂量+AMPK激活剂（ AICAR）组（予50.0 mg/mL山茱萸多糖+2.0 mmol/L AICAR培养）,采用平板克隆形成试验检测MCF-7细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,划痕试验检测细胞迁移情况,Transwell法检测细胞侵袭情况,蛋白免疫印迹法（ Western blot法）检测各组细胞AMPK、磷酸化AMPK（ p-AMPK）、SIRT1蛋白相对表达量。选择BALB/c裸鼠,建立荷瘤裸鼠模型,随机分为对照组（灌胃生理盐水）与山茱萸多糖组（每日灌胃800 mg/kg山茱萸多糖溶液）,每组6只,连续灌胃28 d。每7 d测量2组裸鼠肿瘤体积并做组间比较,灌胃结束后处死各组裸鼠取移植瘤,采用免疫组化法检测各组裸鼠移植瘤组织中AMPK、p-AMPK、SIRT1蛋白表达。结果：体外细胞学实验结果表明,山茱萸多糖低、中、高剂量组MCF-7细胞集落形成数明显低于对照组（ P＜ 0.05）,细胞凋亡率明显高于对照组（ P＜ 0.05）,细胞划痕愈合率、细胞侵袭数明显低于对照组（ P＜ 0.05）,细胞中p-AMPK、SIRT1蛋白表达明显低于对照组（ P＜ 0.05） ;山茱萸多糖高剂量+AICAR组MCF-7细胞集落形成数明显高于山茱萸多糖高剂量组（ P＜ 0.05）,细胞凋亡率明显低于山茱萸多糖高剂量组（ P＜ 0.05）,细胞划痕愈合率、细胞侵袭数明显高于山茱萸多糖高剂量组（ P＜ 0.05）,细胞中p-AMPK、SIRT1蛋白表达明显高于山茱萸多糖高剂量组（ P＜ 0.05） ;山茱萸多糖各剂量对上述指标的影响表现出显著的剂量依赖性（ P＜ 0.05）。荷瘤裸鼠实验结果表明,移植第14、21、28、35 d山茱萸多糖组裸鼠移植瘤体积显著小于对照组（ P＜ 0.05） ;干预结束后,山茱萸多糖组裸鼠移植瘤质量与瘤体组织p-AMPK、SIRT1蛋白阳性表达率均明显低于对照组（ P＜ 0.05）,AMPK蛋白阳性表达率与对照组比较差异无统计学意义（ P＞ 0.05）。结论：山茱萸多糖对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭有一定的抑制作用,并可促进MCF-7细胞凋亡,能抑制裸鼠移植瘤生长,其可能的机制为抑制AMPK/SIRT1通路激活。     

鲍曼不动杆菌对抗生素的耐药性监测

目的调查鲍曼不动杆菌（acinetobacter baumannii,Ab）对16种抗生素的耐药情况。方法收集我院2005年1月至2006年6月分离的288株鲍曼不动杆菌,其中社区感染株（community acquired infection,CAI）237株,医院感染株（hospital acquired infection,HAI）51株。按《全国检验技术操作规程》要求操作,用细菌鉴定仪鉴定菌种,采用K-B法做药敏试验。结果Ab对几乎所有半合成青霉素、头孢菌素、碳青霉烯类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类均具有较高水平的耐药性,对其他酶抑制剂复合制剂亦不敏感。对亚胺培南敏感率最高为68.5%,其余抗生素的敏感率都〈54.5%。绝大多数病原菌医院内感染株的耐药率高于社区感染株,两者之间差别有统计学意义（P〈0.01）。结论近期我院经验性治疗首选阿莫西林/舒巴坦＋左氧氛沙星＋阿米卡星或SMZCO组合治疗方案。     

Smo 蛋白在人结肠癌中的表达及其与新生血管的关系

目的 研究豪猪蛋白(Hedgehog)信号途径中Smo蛋白在人结肠癌组织中的表达,初步探讨Smo与结肠癌血管生成的关系.方法 用免疫组化方法研究人结肠癌组织中Smo蛋白的表达;同时用CD34单克隆抗体标记结肠癌组织切片中新生血管,计算微血管密度(micro-vascular density,MVD),并统计Smo蛋白的表达与MVD的关系.结果 在总共39例结肠癌标本中,Smo阳性24例,阴性15例,阳性率61.54%;MVD平均值68.70±11.65,Smo的阳性组MVD均值71.25±12.56,Smo阴性组MVD均值64.05±8.88,两组统计分析差别有统计学意义(t检验,P＜0.05).结论 Smo蛋白在人结肠癌中活化,并参与了结肠癌的发生发展.促进新生血管的生成是其可能的机制之一.     

异基因造血干细胞移植治疗恶性血液病的效果

目的探讨异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)治疗恶性血液病的效果。方法10例恶性血液病病人进行Allo-HSCT治疗,供者中9例为HLA完全相合的同胞,1例为HLA半相合的同胞。预处理方案包括:马利兰-环磷酰胺、马法兰-足叶乙甙-阿糖胞苷-环磷酰胺、氟达拉滨-阿糖胞苷-马法兰-环磷酰胺、卡莫司汀-足叶乙甙-阿糖胞苷-环磷酰胺。结果全部病人均获得造血重建,中性粒细胞≥0.5×109/L、血小板>20×109/L的中位时间分别是14.51、8.3 d;5例发生急性移植物抗宿主病(GVHD),6例发生慢性GVHD,4例血型不合者均于移植后3个月内血型转为供者型。10例病人28 d时DNA图谱均转为供者型。随访4~23个月尚无复发及死亡病例。结论Allo-HSCT虽然会发生GVHD等严重并发症,但仍然是治疗恶性血液病的最有效的方法。HLA半相合同胞Allo-HSCT的开展解决了供者来源少的难题。     

氨氯地平对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231侵袭影响的体外实验

目的 探讨氨氯地平对人乳腺癌高转移细胞株MDA-MB-231体外侵袭的影响及其相关机制.方法 用8.34 μmol/L氨氯地平处理肿瘤细胞,以人工重组基底膜侵袭小室(Transwell)观察氨氯地平对MDA-MB-231细胞侵袭的影响;免疫细胞化学方法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和基质金属蛋白酶-9(matrix met-allo-proteinaae,MMP-9)的表达.结果 8.34 μmol/L的氨氯地平可显著抑制MDA-MB-231细胞的侵袭能力,侵袭抑制率为36.27%;免疫细胞化学检测结果显示,MMP-9和VEGF蛋白的表达在MDA-MB-231细胞中亦明显降低.结论 氨氯地平对MDA-MB-231细胞体外侵袭具有明显的抑制作用,此作用与降低肿瘤细胞的MMP-9和VEGF的表达有关.     

人工锌指蛋白真核表达载体的构建及表达

目的 构建人工锌指蛋白ZFP基因的真核表达载体,检测其在真核细胞的表达情况,从而探讨人工锌指蛋白作为人工转录因子DNA结合域的可能性.方法 全基因合成人工锌指蛋白(putative zinc finger protein,ZFP)的核酸序列并克隆入pEGFP-N1及pIRES2-EGFP真核表达载体中,构建重组质粒pEGFP-N1/ZFP及pIRES2-EGFP/ZFP-Flag,通过酶切、菌落PCR及测序来鉴定重组载体的正确性.脂质体DOTAP体外转染重组质粒于COS-7细胞中,用荧光显微镜、RT-PCR、Western blot方法鉴定ZFP在该细胞中的表达.结果 正确构建了pEGFP-N1/ZFP、pIRES2-EGFP/ZFP-flag重组表达质粒,并且在COS-7细胞中成功进行了人工锌指蛋白ZFP的表达.结论 采用生物信息学手段获得的假定的锌指蛋白基因序列可以在真核细胞内正常表达.     

居家治疗的患者家庭中医疗废弃物处理问题的探讨与研究

目的 了解目前居家治疗的患者对医疗废弃物的认识及医疗废弃物的处理情况,并通过正确的指导和鼓励进一步规范居家治疗的患者家庭中医疗废弃物的管理.方法 发放问卷对居家治疗的120名糖尿病患者进行调查,调查他们对医疗废弃物的认识,目前所采取的处理方法,有无被废弃物损伤的经历等.通过知识讲解,电话回访,并和社区、当地基层医院建立联系,借助社区医院、基层医院为载体,在广泛宣传的基础上,按照就近、方便的原则,利用废弃的广口硬质塑料瓶,将居家治疗中产生的医疗垃圾有效收集并集中处理.为患者提供恰当的容器和地点进行医疗废弃物回收,对按要求回收者给予一定的奖励.结果 通过12个月的跟踪调查指导,居家治疗的患者对医疗废弃物的危害、正确处理的途径的认识有了较大提高;针刺伤发生率明显下降(P<0.01).结论 通过正确的指导和鼓励,能够提高人们对医疗废弃物认识,逐步做到规范处理.     

正交试验优化提取黄连中小檗碱型生物碱

目的:研究黄连中小檗碱型生物碱的最佳提取工艺。方法:采用正交试验设计,以小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱和药根碱的总含量为考察指标,考察乙醇浓度、提取时间、提取次数、乙醇用量4个因素对提取结果的影响。结果:最佳提取工艺为8倍量的50%乙醇,回流提取4次(每次2h)。结论:本工艺重现性好,测定方法可行,为大批量黄连提取生物碱提供了理论依据。     

孟鲁司特钠治疗毛细支气管炎临床疗效分析

目的探讨孟鲁司特钠治疗毛细支气管炎的临床疗效。方法 50例毛细支气管炎患儿随机分成治疗组25例和对照组25例,两组均采用相同综合治疗,治疗组加服孟鲁司特钠,6个月以下2.5mg/d,6个月以上4mg/d,每晚服用1次,疗程至症状和体征消失,观察喘憋、肺部体征改善时间;并对所有病例随访3个月,观察各组患儿在此期间再次出现喘息的例数及复发率。结果治疗组在喘憋、肺部体征持续时间及住院天数方面均明显短于对照组(P<0.01);同时治疗组喘息复发率明显低于对照组(P<0.05)。结论孟鲁司特钠治疗毛细支气管炎临床疗效确切。     

中药抑抗汤含药血清对子宫内膜容受性的影响

目的探讨中药抑抗汤含药血清对体外培养的小鼠子宫内膜容受性的影响。方法40只实验小鼠随机分为两组,分别用中药抑抗汤0.8ml和等量生理盐水灌胃28d,制备含药血清和空白血清。提取妊娠第4天(D4)雌鼠子宫内膜细胞后分为含药血清(A组)、胎牛血清(B组)和空白血清(C组)三组进行细胞培养。黏附实验检测子宫内膜细胞的黏附能力,ELISA法检测细胞培养液白血病抑制因子(LIF)水平,Western blot检测整合素ανβ3蛋白水平。结果 A组细胞黏附能力、LIF和整合素ανβ3蛋白表达均较B、C组显著增加(P<0.05)。结论抑抗汤可能是通过增强细胞黏附功能,增加LIF和整合素ανβ3的表达来改善子宫内膜容受性。