Na+ channel expression and neuronal function in the Na+/H+ exchanger 1 null mutant mouse

Mice lacking Na(+)/H(+) exchanger 1 (NHE1) suffer from recurrent seizures and die early postnatally. Although the mechanisms for seizures are not well established, our previous electrophysiological work has shown that neuronal excitability and Na(+) current density are increased in hippocampal CA1 neurons of these mutant mice. However, it is unknown whether this increased density is related to altered expression or functional regulation of Na(+) channels. In this work, we asked three questions: is the increased excitability limited to CA1 neurons, is the increased Na(+) current density related to an increased Na(+) channel expression, and, if so, which Na(+) channel subtype(s) is upregulated? Using neurophysiological, autoradiographic, and immunoblotting techniques, we showed that both CA1 and cortical neurons have an increase in membrane excitability and Na(+) current density; Na(+) channel density is selectively upregulated in the hippocampus and cortex (P < 0.05); and Na(+) channel subtype I is significantly increased in the hippocampus and Na(+) channel subtype II is increased in the cortex. Our results demonstrate that mice lacking NHE1 upregulate their Na(+) channel expression in the hippocampal and cortical regions selectively; this leads to an increase in Na(+) current density and membrane excitability. We speculate that neuronal overexcitability due to Na(+) channel upregulation in the hippocampus and cortex forms the basis of epileptic seizures in NHE1 mutant mice.     

转乳期婴儿不同喂养方式对其碘营养变化的影响

目的了解母乳喂养婴儿及其乳母碘营养水平;动态观察从1个月月龄至6个月月龄转乳期时不同喂养方式对婴儿碘营养的影响.方法对97名1个月月龄母乳喂养婴儿尿碘水平进行测定,同时检测其乳母乳碘、尿碘水平,比较二者关系;动态观察97名婴儿从出生至6个月月龄,按喂养方式分为母乳、混合、人工喂养三组,分别检测比较其尿碘水平,与1个月月龄时尿碘水平进行自身对照比较.结果 1个月月龄母乳喂养婴儿尿碘中位数为183 μg/L,提示碘营养状态良好,乳母尿碘、乳碘中位数分别为122 μg/L、201 μg/L,前者明显低于后者(P＜0.001);6个月月龄尿碘水平与1个月月龄比较,母乳喂养组较前升高,人工喂养组下降(P均<0.001),混合喂养组无明显变化(P＞0.05),3组间差异有显著意义(P＜0.005),母乳及混合喂养组明显高于人工喂养(P均<0.001),母乳喂养组婴儿尿碘中位数最高.结论母乳喂养儿碘营养状态良好,乳母碘营养不足;转乳期婴儿碘营养呈下降趋势,部分人工喂养婴儿存在碘营养不良.     

川崎病患儿无症状性心肌缺血的三磷酸腺苷-阿托品负荷超声检测

川崎病冠状动脉病变可无症状迁延,具有潜在的心脏风险。自1996年Noto等首次应用多巴酚丁胺负荷超声心动图诊断川崎病冠状动脉狭窄以来,儿童负荷超声检查的方法及其应用报道甚少。本研究探讨应用三磷酸腺苷(ATP)-阿托品负荷超声心动图,检测心室壁的局域运动变化,评价川崎病心肌缺血。     

丙戊酸钠与卡马西平对脑电活动影响的研究

目的探讨丙戊酸钠（ＶＰＡ）与卡马西平（ＣＢＺ）对脑电活动的影响。方法对单独应用ＶＰＡ或ＣＢＺ治疗,且临床上发作已被控制的患儿进行脑电图（ＥＥＧ）和脑电地形图检查。结果①ＶＰＡ治疗组可使间歇期痫样活动（ＩＥＡ）消失或减少５００％以上达６９０％,而ＣＢＺ治疗组仅为４４０％。同时ＣＢＺ治疗组临床发作虽已被控制但ＩＥＡ明显增多有４例,ＶＰＡ治疗组则未见此现象。②ＶＰＡ治疗组对脑电背景活动影响不明显,而ＣＢＺ可引起α波活动减少,θ波、δ波活动增加,治疗前后均具有显著性差异。③ＣＢＺ治疗组α１频段的相对功率及θ频段绝对功率和相对功率,其治疗前后比较经ｔ检验,Ｐ值分别＜００５,＜００５,＜００１;而在ＶＰＡ治疗组仅见θ频段相对功率在治疗前后有显著差异,Ｐ值＜００１。结论ＣＢＺ可使脑电背景活动变慢,甚至ＩＥＡ增加,而ＶＰＡ则影响不明显     

"Y"形板在肱骨髁部骨折中的应用

目的探讨采用Y形钢板内固定治疗肱骨髁部骨折的疗效。方法本组17例肱骨髁部骨折,按AO／ASIF分类法:A3型5例,C1型14例,C2型5例,C3型3例,均采用Y形钢板内固定手术治疗。结果随访11～30个月,按改良Cassebaum评价,优11例,良4例,可2例,优良率88％。结论应用Y形钢板内固定治疗肱骨髁部骨折是一种较好的方法,可取得满意的疗效。     

中国湖北地区汉族人群L-选择素基因P213S多态性研究

目的:了解中国湖北地区汉族人群L-选择素基因第六外显子P213S多态性分布,并与其它地区的分布进行比较。方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,检测206名健康者L-选择素基因P213S多态性基因型和等位基因频率分布。结果:L-选择素各基因型频率分别为PP型(45.63%)、PS型(49.03%)和SS型(5.34%)。P、S等位基因频率分别为70.15%和29.85%,这种基因多态性分布无性别差异(P>0.05)。湖北地区汉族人群L-选择素基因型和等位基因频率分布与英国及日本人有显著性差异(P<0.05)。结论:湖北地区汉族人群中存在L-选择素基因多态性,与其它地区分布比较有明显的差异。     

cblN/Zap嵌合分子的构建及其对Jurkat细胞TCRζ的下调

目的:构建cblN/Zap嵌合分子,稳定转染Jurkat细胞后观察对细胞TCRζ的影响。方法:提取Jurkat细胞的总RNA并反转录为cDNA,以其作为模板用PCR方法扩增Zap基因的SH2片段。以含有人全长cblcDNA的质粒pEFHAcbl作为模板扩增cbl基因的N端(cblN),并在其N末端带上含24bp的flag标签。用重叠延伸PCR法,在cblN基因内部的SH2两端引入BamHI和EcoRV酶切位点并克隆入pcDNA3.1( )中。再以Zap基因的SH2置换cblN基因的SH2,即成为pcDNA3.1( )cblN/Zap。酶切鉴定及测序正确后,采用脂质体法稳定转染Jurkat细胞,用RTPCR和Westernblot鉴定flagcblN/Zap的表达,用Westernblot检测其对细胞TCRζ表达的影响。结果:重组质粒pcDNA3.1( )flagcblN/Zap经酶切后可产生与理论预期长度相符的片段。且测序证实其序列正确。脂质体法稳定转染Jurkat细胞后,检测到目的基因在RNA和蛋白水平的表达。表达的cblN/Zap可下调Jurkat细胞的TCRζ。结论:重构嵌合分子cblN/Zap可下调Jurkat细胞的TCRζ。     

人心肌肌钙蛋白I的原核表达及其兔抗体的制备

目的:构建人心肌肌钙蛋白I(hcTnI)基因的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达后,并制备兔抗hcTnI抗体。方法:以化学方法合成hcTnI基因并插入融合表达载体pET21a( )的多克隆位点,构建重组表达质粒pET21a( )hcTnI。以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,筛选阳性重组子,经IPTG诱导目的蛋白的表达,表达产物的免疫学活性用Westernblot进行鉴定。以表达的hcTnI蛋白免疫家兔,制备抗hcTnI的抗体并进行纯化及特性鉴定。结果:成功地合成hcTnI基因,测序证实序列正确后亚克隆于表达载体pET21a( )中,经PCR筛选和酶切鉴定获得阳性克隆,序列分析表明其中的插入序列与cTnI基因完全一致。在大肠杆菌中表达出相对分子质量(Mr)为24000的目的蛋白,约占菌体总蛋白的28%,Westernblot分析显示,表达的hcTnI蛋白具有良好的免疫反应性。以纯化的hcTnI免疫家兔后,能有效地刺激特异性抗体的产生,抗血清的效价为3×10-4,且具有良好的特异性。结论:成功地构建hcTnI基因的原核表达载体pET21a( )hcTnI,并在大肠杆菌中获得高效表达。制备出兔抗hcTnI的抗体,且效价及特异性均较良好,为进一步建立酶联免疫吸附法检测hcTnI奠定了基础。     

CVB3腺病毒载体疫苗Ad/MDC-VP1与DNA疫苗联合应用的免疫效果

目的 构建重组腺病毒Ad/MDC-VP1,观察Ad/MDC-VP1与NA疫苗联合应用的免疫效果.方法 构建、包装重组腺病毒Ad/MDC-VP1并检测目的 蛋白的表达.BALB/c小鼠随机分为Ad/MDC-VP1、pcDNA3/MDC-VP1、pcDNA3/MDC-VPl+Ad/MDC-VP1和PBS 4组,肌肉注射免疫小鼠.用ELISA法和微量中和试验法分别检测血清柯萨奇病毒B3(CVB3)VP1 IgG和中和抗体滴度;CCK-8法检测淋巴细胞增殖活性和特异性CTL杀伤活性;用致死量CVB3攻击小鼠后,检测血中病毒滴度并观察小鼠的存活率.结果 成功构建并包装了重组腺病毒Ad/MDC-VP1,检测到目的 蛋白的表达.peDNA3/MDC-VP1+Ad/MDC-VP1组血清CVB3 VP1 IsG滴度、淋巴细胞增殖指数、CTL杀伤活性和对小鼠的保护率明显高于其他各组(P<0.05),血清病毒滴度低于其他各组(P<0.05).结论 Ad/MDC-VP1与DNA疫苗联合应用能显著提高小鼠细胞和体液免疫应答.