APP17肽调节胰岛素受体底物1在糖尿病小鼠脑内分布及对脑海马区神经元退行性变的作用

背景:胰岛素在脑内通过胰岛素受体底物发挥作用,APP17肽有神经营养功能,可能通过影响胰岛素受体底物改善胰岛素缺乏引起的糖尿病脑病。目的:制备小鼠糖尿病模型熏观察APP17肽对糖尿病小鼠胰岛素受体底物1的影响。设计:随机对照动物实验。单位:首都医科大学基础医学院病理学教研室,宣武医院脑老化研究室。材料:实验于2003-09/10在首都医科大学基础医学院病理学教研室及宣武医院脑老化研究室完成,选择雄性昆明小鼠18只,随机分为正常对照组、糖尿病组和APP17肽治疗组3组,每组6只。方法:①糖尿病组和APP17肽治疗组小鼠按200mg/kg剂量腹腔注射链脲佐菌素熏3d后测尾部非禁食血糖熏大于15mmol/L者被认为糖尿病模型建立。②APP17肽治疗组于糖尿病造模2周后皮下注射APP17肽熏每次0.35μg/只熏1次/d熏共注射2周。正常对照组大鼠不干预。③给链脲佐菌素4周后熏处死动物取脑组织进行胰岛素受体底物1免疫组化染色。主要观察指标:各组小鼠脑胰岛素受体底物1阳性细胞形态及分布。结果:18只小鼠全部进入结果分析。①糖尿病组胰岛素受体底物1阳性反应细胞广泛分布于皮质、海马、丘脑、下丘脑等部位熏而正常对照组及APP17肽治疗组仅在皮质、海马见有阳性反应细胞熏且着色淡。②糖尿病组、正常对照组及APP17肽治疗组脑海马胰岛素受体底物1免疫组化阳性反应细胞数分别为(28.7±1.5),(9.2±1.5),(10.1±1.4)个/10倍物镜,糖尿病组高于其他两组(P<0.001)。结论:糖尿病小鼠脑内多个区域的神经元存在较多的胰岛素受体底物1阳性细胞熏APP17肽能使胰岛素受体底物1阳性反应细胞出现的部位和数量正常化熏从而改善糖尿病小鼠海马神经元的退行性变。     

乳头内陷整形术改良

目的:参照乳头内陷修复的各种手术方法,通过对酒井法的技术性改良,探索一种兼顾功能和形态的更加完善的手术方法。方法:于2001-01/2003-01选择横滨市立大学病院及横滨整形外科收治先天性乳头内陷的女性患者33例为研究对象。单侧28例,双侧5例。采用改良酒井法手术,牵引出内陷乳头后,在乳腺窦的旁边描圆,这将是术后乳头顶部的外圆,然后在乳头基底部描画直径为2.5～3.0cm的同心圆,这是预定Z型皮瓣的纵轴,在乳头顶部对角设计两个皮瓣。直视下沿乳腺导管分离并彻底切除乳腺导管之间的纤维束、上至乳头顶部下至胸壁,并在必要时切断一两根特别短缩的乳腺导管,特别注意保存大部分的乳腺导管及血管,然后在乳晕区内切断乳头肌。按Z型皮瓣成形术作皮内缝合,制造乳头颈部,并保持乳头形态。结果:纳入患者33例,均进入结果分析。术后随访1年以上,均无再复发,瘢痕不明显,与对侧乳头基本对称,患者满意。结论:改良酒井法对乳头内陷的矫正能够兼顾乳头功能和外形。     

彩色多普勒血流图及能量图对甲状腺良恶性肿瘤的诊断价值

目的 探讨彩色多普勒血流成像（CDFI）及彩色多普勒能量图（CDE）对甲状腺良恶性肿瘤鉴别的价值。 方法 对60例甲状腺肿瘤患者（良性46例，恶性14例）行CDFI和CDE检查，了解肿瘤周边及内部血流分布情况。 结果 血流显示率在CDFI及CDE中分别为65．0％和90．0％，CDE较CDFI提高25．0％（P〈0．05）。甲状腺恶性肿瘤CDFI及CDE大多数表现为血流丰富，且肿瘤内部血流多于肿瘤周边血流，显示率分别为69．2％和76．9％；良性肿瘤大多数表现为血流稀疏，且肿瘤周边血流多于肿瘤内部血流，显示率分别为69．2％和76．9％，二者无显著差异（P〉0．05）。 结论 CDE在甲状腺肿瘤血流的敏感性和准确性上优于CDFI，但二者对肿瘤良恶性的鉴别意义无明显差别。     

Fugl-Meyer上肢运动功能评分与上肢运动功能状态评分的响应性研究

目的：研究机器人辅助训练严重脑损伤患者．Fugl—Meyer上肢运动功能评分（FMA）与上肢运动功能状态评分（MSS）的响应性。方法：训练前4周，训练开始前1天和训练结束后l天分别进行评价。采用Bland—Alttman方法来计算量表的一致性限度。响应性由治疗后超过一致性限度上限的患者比例和响应率来说明。结果：经治疗后超过一致性限度上限的患者在FMA为17例（77．3％）．MSS为18例（81．8％）。FMA的响应率为8．2，MSS的响应率为5．2。结论：FMA和MSS用于评价严重脑损伤患者上肢机器人辅助训练效果均有很高的响应性。     

16层螺旋CT对胰腺癌侵犯胰周血管可切除性判断标准的研究

目的：探索16层螺旋CT对胰腺癌侵犯胰周血管的可切除性评价的方法，试提出新的评判标准，分析该标准的敏感性、特异性及准确率。方法：搜集35例经病理证实的胰腺癌病例，行平扫及三期增强扫描，扫描后行CTA成像。术前根据胰周血管受累周径及长度拟定的新CT评判标准，采用1、2a、2b、3a、3b和4级共6个等级进行评判，并同手术结果对照。以不可切除作为阳性、可切除作为阴性，分别分析各等级敏感性和特异性，并绘制ROC曲线。比较以2级及2a级作为可切除性判断标准的差异，分析肿块不可切除的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和准确率。结果：35例患者中，切除16例，另19例不可切除。与手术结果对照，以1级、2a、2b、3a和3b级作为可切除性判断标准，肿块不可切除的敏感性分别为80．1％、86．4％、69．5％、55．6％和45．2％。ROC曲线显示以2a级作为CT可切除性判断标准为最佳临界点。CT显示肠系膜上静脉出现“泪滴征”或胰周小静脉的扩张、侧支血管形成的共5例，其中仅有“泪滴征”1例能够切除。结论：新的CT评判标准对胰腺癌侵犯胰周血管的可切除性评价具有较高的临床应用价值，2a级可以作为CT可切除性判断标准为最佳临界点。     

口腔鳞癌前哨淋巴结融合显像检测的研究

目的:通过SPECT/CT对早期口腔鳞癌进行术前淋巴显像,评价其在前哨淋巴结(SLN)检测及定位中的意义。方法:应用带低能X线的多功能ECT对21例口腔鳞癌患者进行术前同机融合断层淋巴显像,配合术中注射蓝染法对SLN进行检测并与平面显像比较,评价其优越性。结果:断层显像更加准确地定位并纠正了部分平面显像的定位:包括发现了7例平面显像中未显示的或不同淋巴引流床中的SLN、1例平面显像拟诊为SLN的部位经断层显像及蓝染法确认为注射点的散射引起误诊、1例为因SLN接近注射点在平面显像图上未显示SLN而出现漏诊。断层显像还发现了平面显像未发现的另5个病人具有双侧淋巴引流途径。平面显像、融合显像的SLN检出率分别为95.2%和100%。对全部切除淋巴结进行病理检查发现,21例病人中共检出29个SLN,其中4个SLN病理检查为阳性,SLN隐性转移率为13.8%(4/29),未见假阴性。结论:SPECT/CT淋巴显像对局部SLN提供了较详细的解剖定位标志,有利于准确定位SLN。淋巴断层显像能检出平面显像不易发现的SLN,对局部SLN的分布提供了较多的信息,提高了SLN的检出率,减少漏检率,值得临床推广应用。     

支气管灌洗治疗老年急性炎性肺不张

目的探讨经纤维支气管镜（FOB）支气管肺泡灌洗（BAL）术在老年急性炎性肺不张的临床应用。方法对胸片或／和CT、FOB检查确诊为急性炎性肺不张31例老年患者，在心电监护，经皮血氧饱和度监测下床边行BAL治疗。结果老年急性炎性肺不张31例患者经FOB灌洗后，临床症状和胸片明显改善，显效28例。有效3例。结论老年急性炎性肺不张患者在抗感染的基础上，经纤维支气管镜支气管肺泡灌洗术是一种有效且安全的方法。     

新的HLA-A等位基因A~*0290的认定

目的确认1个中国人群中的HLA新等位基因。方法使用PCR-SSP和测序为基础的分型技术,分析确认HLA-A的新等位基因与A*02010101的差异。结果先证者HLA-A位点有1个等位基因的核苷酸序列与已知的HLA等位基因均不同,该基因和A*02010101的差异在第2外显子区域的292位碱基C>G,导致74编码子CAC>GAC,编码的氨基酸由组氨酸(His)变成天冬氨酸(Asp)。结论该基因为HLA新的等位基因,2005年10月被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA-A*0290。     

结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药基因突变快速检测方法的建立

目的建立结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药基因突变的快速检测方法。方法根据结核分枝杆菌标准株H37Rv序列，自行设计覆盖rpoB、katG、inhA基因突变区的系列寡核苷酸探针，并检测临床样品中结核分枝杆菌的基因突变情况，以此来判断耐药结果。结果在56个利福平耐药菌株中，有50个菌株都在rpoB基因上榆出有突变，利福平耐药突变检出率为89．3％（50／56）；有30个利福平敏感菌株rpoB基因上都未检出突变。有58个异烟肼培养的耐药菌株中有47个在katG或inhA基因上检出有突变，异烟肼耐药突变检出率为81．0％（47／58）；有30个异烟肼敏感菌株katG或inhA基因上未检出突变。结论用膜芯片检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性，具有较高的特异性和敏感性，可用于临床结核分枝杆菌耐药性的检测。     

Parkinson disease-associated mutation R1441H in LRRK2 prolongs the “active state” of its GTPase domain

Mutation in leucine-rich-repeat kinase 2 (LRRK2) is a common cause of Parkinson disease (PD). A disease-causing point mutation R1441H/G/C in the GTPase domain of LRRK2 leads to overactivation of its kinase domain. However, the mechanism by which this mutation alters the normal function of its GTPase domain [Ras of complex proteins (Roc)] remains unclear. Here, we report the effects of R1441H mutation (Roc_R1441H) on the structure and activity of Roc. We show that Roc forms a stable monomeric conformation in solution that is catalytically active, thus demonstrating that LRRK2 is a bona fide self-contained GTPase. We further show that the R1441H mutation causes a twofold reduction in GTPase activity without affecting the structure, thermal stability, and GDP-binding affinity of Roc. However, the mutation causes a twofold increase in GTP-binding affinity of Roc, thus suggesting that the PD-causing mutation R1441H traps Roc in a more persistently activated state by increasing its affinity for GTP and, at the same time, compromising its GTP hydrolysis.Mutation in leucine-rich-repeat kinase 2 (LRRK2) is a common cause of Parkinson disease (PD) (1–5). LRRK2 is a large (2,527-aa) multidomain protein consisting of seven putative domains (2), including a Ras-like GTPase domain called Ras of complex proteins (Roc), followed by a domain called C-terminal of Roc (COR), which is then followed by a kinase domain (Kin). It remains unclear how perturbations of these activities result in disease; however, the most common mutation in LRRK2-associated PD, G2019S in the kinase domain, shows higher kinase activity than wild type; therefore, its overactivation might be associated with disease pathogenesis (6).The tandem Roc-COR-Kin arrangement suggests that their activities might be coupled such that the GTPase activity of Roc might modulate the kinase activity. Indeed, several studies have shown that GTP binding to the Roc domain regulates the activity of the Kin domain (7, 8). Moreover, a PD-associated mutation in the Roc domain (R1441C) has been shown to have higher kinase activity (9), thus suggesting that mutations in the Roc domain, also up-regulate kinase activity.Understanding the function of Roc and its mechanism of action is important for understanding the mechanism of PD pathogenesis and therapeutic development. However, because of the lack sufficient quantity of protein samples amendable for detailed investigations, the biochemical properties and enzymatic activities of the Roc domain of LRRK2 are poorly understood.Here, we describe a stably folded construct of human Roc domain that enabled us to investigate quantitatively its biochemical and enzymatic properties. The results revealed that a PD-causing mutation R1441H in the Roc domain renders it less active at hydrolyzing GTP, as well as having higher affinity for GTP, than its wild-type counterpart, thereby increasing the residence time of its GTP-bound “active state,” which is associated with PD pathogenesis (8).