沉默树突状细胞恒定链以增强其抗肿瘤作用的体外实验研究

目的初步观察用小分子干扰RNA(siRNA)沉默树突状细胞(DCs)恒定链(Ii)后,DCs疫苗的体外抗肿瘤效果。方法从小鼠骨髓分离骨髓前体细胞,细胞经100 ng/ml GM-CSF和100 ng/ml IL-4诱导培养6 d后,转染针对DCs Ii链特异的Ii-siRNA,转染后加用50 ng/ml TNF-α继续诱导细胞成熟48 h,然后分别用Western blot检测沉默效果及CCK-8试剂盒检测DCs刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力;此外,DCs共转染Ii-siRNA和小鼠胃癌前体细胞MFC的总RNA后,与同种异体淋巴细胞共培养,通过ELISA检测培养上清IFN-γ/和IL-4的水平,并收集致敏淋巴细胞进行体外杀伤实验。结果Ii-siRNA明显抑制DCs Ii的表达。沉默Ii链能够增强DCs的淋巴细胞增殖能力,并促使淋巴细胞向Th1的方向漂移[IFN-γ:(5107±351)pg/ml,IL-4:(65±13)pg/ml,P＜0．05]。淋巴细胞经共转染Ii-siRNA和MFC RNA的DCs激活后,明显而特异地杀伤靶肿瘤细胞(杀伤百分率: 66．94%±2．75%,P＜0．05)。结论通过siRNA沉默DCs的Ii链可能是一种行之有效的增强抗肿瘤免疫的方法。     

应用光动力治疗瘢痕疙瘩的实验研究

目的:应用瘢痕疙瘩动物模型探索瘢痕疙瘩的有效治疗方法。方法:用临床患者的瘢痕疙瘩组织构建裸鼠的瘢痕疙瘩动物模型,对动物模型进行光动力试验治疗前并对动物模型治疗前、后瘢痕组织的变化进行观察分析。结果:构建的裸鼠动物模型基本保持瘢痕疙瘩的结构特征,光动力治疗后瘢痕组织变小,成纤维细胞减少,胶原纤维减少。结论:光动力疗法治疗瘢痕疙瘩有效。     

胰腺神经内分泌肿瘤诊断和治疗进展

神经内分泌肿瘤发病率较低,无特异性症状,且对其研究和认识尚不足,导致该类疾病患者的生存期近30年来无明显改善。笔者结合美国国立癌症网络（NCCN）指南,欧洲神经内分泌肿瘤协会（ENETS）共识及北美神经内分泌肿瘤协会（NANETS）共识就胰腺神经内分泌肿瘤的疾病特点及诊断治疗进行综述,以提高对胰腺神经内分泌肿瘤的认识。     

胸腰筋膜间平面阻滞对后路腰椎融合术后镇痛效果的影响

目的 探讨超声引导下胸腰筋膜间平面（thoracolumbar interfascial plane, TLIP）阻滞对后路腰椎融合手术病人术后镇痛效果的影响。方法 前瞻性选择2017年4月至2018年5月在我院择期行后路腰椎融合手术病人50例。采用随机数字表法分为两组,每组25例,TLIP阻滞联合静脉自控镇痛（patient controlled intravenous analgesia, PCIA）组（TLIP组）和单纯PCIA组（对照组）。TLIP组,男12例,女13例,年龄为（49.4±7.7）岁;对照组,男10例,女15例,年龄为（49.5±7.1）岁。TLIP组在全麻诱导后行超声引导下双侧TLIP阻滞,每侧注入0.375%罗哌卡因20 ml。两组术后均使用舒芬太尼行PCIA,维持术后24 h内静息疼痛视觉模拟量表（visual analogue scale, VAS）评分≤3分。记录两组病人围手术期阿片类药物用量及补救镇痛例数,术后2、4、6、12、24 h的静息VAS评分和Ramsay镇静评分,术后24 h 内恶心呕吐、头晕、瘙痒和呼吸抑制的发生情况以及TLIP组阻滞相关并发症的发生情况。结果 与对照组比较,TLIP组术中瑞芬太尼用量及术后24 h内PCIA舒芬太尼用量明显减少（P＜0.05）,术后恶心呕吐发生率明显降低（P＜0.05）,两组均未行补救镇痛。两组间各时间点静息VAS评分和Ramsay镇静评分,以及术后头晕、瘙痒和呼吸抑制等发生率的差异均无统计学意义（P均＞0.05）,TLIP组未发生阻滞相关并发症。结论 超声引导下TLIP阻滞可减少后路腰椎融合术病人围术期阿片类药物用量,降低术后恶心呕吐的发生率。     

综合生理-心理-社会评估问卷的信效度分析

目的 对综合生理-心理-社会评估问卷(UPPSAQ-70)进行信效度分析。方法 选取2013年4月至2018年7月就诊于北京协和医院、由医生开具心理评估、并在心理评估室同时完成UPPSAQ-70和症状自评量表(SCL-90)评估的患者,固定因子数为8个因子和3个因子,进行探索性因子分析;采用Amos 23.0对原8因子模型、8因子模型-修订、原3因子模型、3因子模型-修订和单因子模型进行验证性因子分析;以SCL-90的各因子为校标,计算因子之间的相关系数,验证区分效度。对2018年7月完成UPPSAQ-70评估的患者进行重测,检验重测信度。 结果 UPPSAQ-70的8因子模型包含:情绪、焦虑与疲劳、睡眠、躯体不适、性功能、快乐和满意度、疑病和社交焦虑;3因子模型包含:心理维度症状、生理维度症状和社会维度症状。验证性因子分析提示,8因子修订模型具有较好的拟合程度(χ ²=10 410.4,df=1862,RMSEA=0.07,CFI=0.753,NFI=0.715)。8因子模型以SCL-90为校标,除情绪量表与抑郁(r=0.600)、焦虑(r=0.520)相关度相对较高,其他症状相关度较低(r<0.5)。量表各因子的Chronbach’s α系数在0.823~0.904之间,删除各条目后全量表的Chronbach’s α系数在0.954~0.956之间。该量表的重测信度为Chronbach’s α系数0.847,两次重测各项均显著相关(P<0.05)。 结论 UPPSAQ-70是良好的评估人的整体健康状况的量表,适宜综合医院使用。     

电离辐射对沉默ATRX的HeLa细胞DNA损伤修复的影响

目的：靶向沉默宫颈癌HeLa细胞中α-地中海贫血/精神发育迟滞综合征X染色相关蛋白（ATRX）,检测电离辐射对ATRX、γH2AX和Rad51蛋白表达及γH2AX和Rad51焦点数的影响,探讨ATRX参与辐射后HeLa细胞DNA损伤修复的作用。方法： 3条ATRX-shRNA和阴性对照（Control-shRNA）的慢病毒载体转染293T细胞,收集慢病毒并感染HeLa细胞,利用puromycin筛选获得稳定沉默ATRX的细胞系,分别命名为shA₁-HeLa、shA₂-HeLa、shA₃-HeLa和shCon-HeLa,采用Western blotting法检测沉默ATRX效率以及电离辐射后ATRX、γH2AX和Rad51蛋白的表达,采用免疫荧光技术观察shCon-HeLa和shA₁-HeLa组中γH2AX和Rad51焦点并计数其数量。结果： shCon-HeLa细胞中可见ATRX蛋白表达,而shA₁-HeLa、shA₂-HeLa和shA₃-HeLa细胞中均无ATRX蛋白表达,表明沉默效率较高。在2和8 Gy剂量照射后1、6和24 h,shCon-HeLa组ATRX蛋白表达量逐渐升高,24 h时表达量最高,且8 Gy照射后1、6和24 h表达量均较高。4 Gy照射后0~6 h,与shCon-HeLa组比较,shA₁-HeLa组γH2AX焦点数在1 h明显升高（P<0.05）,而后逐渐降低,但在6 h焦点数仍明显高于shCon-HeLa组（P<0.01）;Rad51焦点数与γH2AX焦点数变化相一致,与shCon-HeLa组比较,shA₁-HeLa组Rad51焦点数在1 h明显升高（P<0.05）,在6 h时shA₁-HeLa焦点数仍明显高于shCon-HeLa组（P<0.01）。4 Gy照射后0~16 h,shA₁-HeLa组细胞中γH2AX和Rad51蛋白表达量均较shCon-HeLa组增加。结论：成功获得稳定沉默ATRX的HeLa细胞模型,电离辐射可诱导ATRX蛋白表达量增加,且沉默ATRX的HeLa细胞中γH2AX和Rad51焦点数及蛋白表达量均高于对照组,提示ATRX参与了辐射诱导的DNA损伤修复过程。     

一种新型PI3K抑制剂JN-65的抗肿瘤活性及其分子模拟机制研究

在恶性血液肿瘤中,PI3K信号通路往往呈现过度表达的紊乱状态,开发PI3K抑制剂治疗恶性血液肿瘤具有广阔的应用前景。本研究通过恶性血液肿瘤的特异性筛选,得到了一个PI3K靶向抑制剂JN-65。MTT检测发现JN-65可以有效抑制血液肿瘤的增殖,其中对白血病细胞特异性较强。体外酶活性检测发现JN-65对PI3K具有一定的抑制活性且对PI3Kγ表现出较强的选择性抑制作用,Western blot实验表明,JN-65能有效抑制PI3K/Akt信号通路,细胞流式实验证明,JN-65通过抑制PI3K信号通路有效地诱导肿瘤细胞的凋亡。本研究采用分子对接模拟方法研究JN-65与PI3K相互作用关系,在分子水平对PI3K的抑制机制进行了研究。JN-65有望成为一个潜在的PI3K抑制剂,能特异性地抑制恶性血液肿瘤。     

乙酰基二肽-1鲸蜡酯的皮肤抗衰老作用及其机制

乙酰基二肽-1鲸蜡酯（acetyl dipeptide-1 cetyl ester,AD-1）是乙酸和十六烷基醇与精氨酸和酪氨酸组成的人工合成肽,具有一定的抗炎和提高皮肤屏障功能的作用,已被用于敏感肌化妆品中。该成分虽然也被用于抗衰老化妆品中,但缺乏公开的系统科学研究。本研究通过评价AD-1的体外抗氧化和抗糖基化作用、建立UVA反复照射真皮原代成纤维细胞的光老化模型,探讨其在光老化细胞中的抗衰老活性。采用MTT法测定AD-1对细胞活力的影响;RT-qPCR法检测AD-1和UVA对衰老相关p21、p53、MMPs、IL6、Col1、Col3以及自噬相关p62、ATG5、ATG7 mRNA表达的影响;Western blot法检测AD-1和UVA对衰老及自噬相关p16、p21、p53、Col1、LC3B、p62蛋白水平的影响;β-半乳糖苷酶染色和MDC染色评价细胞衰老损伤,并通过荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧水平。实验结果显示,AD-1干预可以减少UVA诱导的细胞损伤和mRNA表达异常,改善p16、p21、p53、Col1、LC3B、p62蛋白水平异常。结果表明,AD-1具有一定的...     

反穿刺器在腹腔镜食管-残胃（空肠）吻合术中的应用

目的探讨新型装置反穿刺器（RPD）在腹腔镜食管．残胃（空肠）吻合术中应用的可行性、安全性及临床效果。方法2010年8月至2011年10月,第二军医大学附属长海医院微创外科对14例胃癌及4例贲门胃肠间质瘤患者施行腹腔镜下食管．空肠（残胃）吻合术,即在腹腔镜下切开食管前壁,置人RPD,在切口上方3cm处自食管前壁穿出,紧贴切口上方切割闭合食管残端,完成抵钉座的放置,随后在上腹正中小切口辅助下进一步完成吻合。结果18例患者中男12例,女6例,年龄42～68（平均53）岁。全组患者均顺利完成手术,手术时间125～235（平均155）min,抵钉座的平均放置时间为12min,术中出血60—100（平均75）ml。患者均在术后第2-3d肛门排气,未发生吻合i21瘘、吻合口狭窄、腹腔感染等并发症,于术后7～13d出院,无围手术期死亡病例。术后随访11～25月,均无复发病例。结论利用RPD行食管．残胃（空肠）吻合术,可免去在食管进行荷包缝合的操作,且不需要麻醉师配合放置带抵钉座的胃管,更加简便安全。     

病理N3期胃癌310例预后分析

目的探讨UICC第7版TNM分期标准中病理N3（pN3）期胃癌患者的预后特征及预后影响因素。方法回顾性分析2000年1月至2006年12月间天津医科大学附属肿瘤医院收治的实施胃癌根治术或扩大根治术的310例pN3期胃癌患者的临床病理和随访资料,分别采用Logrank检验和Cox比例风险模型进行单因素和多因素预后分析。结果310例患者均获随访,随访时间为2～103（平均35．7）月,术后5年生存率为14．6％。其中pN3a期201例,pN3b期109例,5年生存率分别为16．8％和10．3％,差异有统计学意义（P=0．013）。单因素预后分析显示,肿瘤部位、Borrmann分型、pT分期、pN分期、淋巴结转移率及手术方式与患者预后有关（均P〈0．05）。多因素分析显示,浸润深度、手术方式及淋巴结转移率是影响预后的独立危险因素（均P〈0．01）,而pN分期并不是独立的预后影响因素（P=0．658）。按浸润深度对患者进行分层分析显示,对于210例pT4a期患者,pN3a和pN3b亚组5年生存率分别为16．1％和12．8％,差异有统计学意义（P=0．001）;但对于88例pT4b期患者,pN3a和pN,b亚组5年生存率的差异则无统计学意义（8．6％比3．1％,P=0．137）。结论pM期胃癌患者预后较差,肿瘤浸润深度和不同手术方式是影响其预后的重要因素,淋巴结转移率对判断pM期胃癌预后有重要意义。第7版TNM分期中pN3分期能较好反映患者的预后情况。