转录因子Ascl2调控Acss1/3的表达影响结直肠癌患者预后

转录因子Ascl2作为WNT信号靶基因,可影响结直肠癌（CRC）前体细胞干性特征,探讨其能否调控短链脂肪酸β-氧化而影响CRC患者的预后。方法 下载稳定干扰Ascl2表达的CRC LS174T细胞（sh-Ascl2/LS174T）的mRNA及miRNA差异表达数据（GSE69036和GSE34926）分析其靶基因;应用RT-PCR方法和Western 印迹定量检测sh-Ascl2/LS174T及对照细胞中的Ascl2、Acss1和Acss3的mRNA表达水平,以及Ascl2和Acss1蛋白表达水平,从GSE44076表达数据和UALCAN数据比较在正常结直肠粘膜、CRC组织和不同临床病理分期的肿瘤组织的表达水平差异;TCGA数据库下载548例CRC患者基因 mRNA表达量及相关临床信息,用Spearman等级相关分析表达相关性,Kaplan-Meier法进行生存分析,Cox回归分析评估危险因素。结果 sh-Ascl2/LS174T细胞中Acss1的mRNA较对照细胞下调2.08倍,miR-4282表达水平下调2.069倍。RT-PCR定量检测sh-Ascl2/LS174T细胞中Acss1的mRNA和miR-4282水平明显下降(P＜0.01), Acss3的mRNA水平明显升高(P＜0.05);Acss1和Ascl2蛋白水平较对照细胞均明显下降。CRC组织Ascl2和Acss1的mRNA水平明显高于癌旁结直肠粘膜组织(P＜0.001),而Acss3明显低于癌旁结直肠粘膜组织 (P＜0.001);CRC组织中Ascl2与Acss1的mRNA表达水平呈正相关,与Acss3的表达水平呈负相关(均P＜0.001)。Ascl2和Acss3表达水平与疾病特异性生存期（DSS）、总体生存期（OS）、无进展生存期（PFS）无关,Acss1高表达组比低表达组的DSS (P=0.0389)和OS (P=0.04)明显降低。Ascl2与Acss1基因异常表达、Ascl2、Acss1和Acss3基因异常联合表达与CRC患者的DSS存在显著的联系(P=0.0377和P=0.0161),Ascl2、Acss1和Acss3三个基因的联合异常表达是影响CRC患者DSS的危险因素之一(P=0.043)。结论Ascl2对CRC细胞中的Acss1/3的表达可能具有调控作用而导致其短链脂肪酸β-氧化的重编程,它们的联合异常表达可以一定程度预测CRC患者的预后     

2016年4月—2022年3月深圳市和济南市流感病原学监测及流行特征

目的 分析在新型冠状病毒肺炎流行背景下,2016年4月—2022年3月国内深圳市和济南市流感流行特点,了解我国南北方地区流感流行差异。 方法 使用深圳市和济南市国家级哨点医院2016—2022监测年度流感样病例(ILI)和流感病原学监测资料,分析流感流行特征和趋势。 结果 2016—2022监测年度深圳市和济南市国家级哨点医院的门急诊病例中流感样病例百分比(ILI%)分别为2.25%、3.45%。两地区ILI%最高的年份均为2021—2022监测年度。ILl年龄构成均以0~4岁为主(分别占40%、46%)。按月分析两地区流感病毒分离阳性率与ILI%变化的相关性,两者趋势均存在正相关(r=0.238,P<0.05;r=0.425,P<0.001)。两地区不同监测年度流感优势毒株型别均不相同,呈交替变化,但每年流行的型别及高峰期的优势毒株型别基本一致。 结论 2020—2021监测年度即新型冠状病毒肺炎流行初期,深圳市和济南市流感活跃程度明显低于往年平均水平且流行毒株型别单一,其余监测年度基本符合我国南、北方地区流感流行特征。     

应用检验信息系统在医院检验科实现全面质量管理

本文介绍了全面质量管理的概念，并认为TQM实际上是一个数据驱动的管理活动。检验信息系统的优点就在于能够提供各种检验数据，文中阐述了如何利用检验信息系统的这一优点，使其成为医院检验科进行全面质量管理的重要工具。     

应用肿瘤基因芯片筛选早期肺鳞癌相关基因

目的： 研究人早期肺鳞癌发生相关基因表达谱, 探讨肺鳞癌发生的分子机制。方法:选取人早期肺鳞癌组织以及相应正常组织，提取RNA, 与含480个与肿瘤相关基因的芯片杂交, 结果经SuperArray Image 软件分析后比较两种组织中的差异表达基因。结果:共筛查出差异表达基因192 条，其中表达上调基因127 条, 下调基因65条; 按照基因功能可分为运输载体、代谢相关基因、细胞信号转导分子、细胞骨架、转录调控因子基因。结论:基因芯片可用于早期肺鳞癌相关基因表达谱的筛查，可为明确早期肺鳞癌发生机制提供重要参考。     

Functional interaction of auxiliary subunits and synaptic proteins with Ca(v)1.3 may impart hair cell Ca2+ current properties

We assessed the functional determinants of the properties of L-type Ca(2+) currents in hair cells by co-expressing the pore-forming Ca(V)1.3alpha(1) subunit with the auxiliary subunits beta(1A) and/or alpha(2delta). Because Ca(2+) channels in hair cells are poised to interact with synaptic proteins, we also co-expressed the Ca(V)1.3alpha(1) subunit with syntaxin, vesicle-associated membrane protein (VAMP), and synaptosome associated protein of 25 kDa (SNAP25). Expression of the Ca(V)1.3alpha(1) subunit in human embryonic kidney cells (HEK 293) produced a dihydropyridine (DHP)-sensitive Ca(2+) current (peak current density -2.0 +/- 0.2 pA/pF; n = 11). Co-expression with beta(1A) and alpha(2delta) subunits enhanced the magnitude of the current (peak current density: Ca(V)1.3alpha(1) + beta(1A) = -4.3 +/- 0.8 pA/pF, n = 10; Ca(V)1.3alpha(1) + beta(1A) + alpha(2delta) = -4.1 +/- 0.6 pA/pF, n = 9) and produced a leftward shift of approximately 9 mV in the voltage-dependent activation of the currents. Furthermore, co-expression of Ca(V)1.3alpha(1) with syntaxin/VAMP/SNAP resulted in at least a twofold increase in the peak current density (-4.7 +/- 0.2 pA/pF; n = 11) and reduced the extent of inactivation of the Ca(2+) currents. Botulinum toxin, an inhibitor of syntaxin, accelerated the inactivation profile of Ca(2+) currents in hair cells. Immunocytochemical data also indicated that the Ca(2+) channels and syntaxin are co-localized in hair cells, suggesting there is functional interaction of the Ca(V)1.3alpha(1) with auxiliary subunits and synaptic proteins, that may contribute to the distinct properties of the DHP-sensitive channels in hair cells.     

尾加压素Ⅱ促兔肺动脉平滑肌细胞增殖及机理探讨

目的:探讨尾加压素Ⅱ(urotensin Ⅱ,U-Ⅱ)对兔肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的作用及机理。方法:采用植块法培养家兔PASMCs,以MTT测定和[³H]-胸腺嘧啶核苷([³H]-TdR)掺入法观察U-Ⅱ对PASMCs增殖的影响,加入不同浓度的几种细胞内信号转导阻断剂,观察对U-Ⅱ效应的影响。 结果:U-Ⅱ(10^-9 mol/L-10^-7 mol/L)浓度依赖地促进PASMCs的A值增加及 -TdR掺入,以10^-7 mol/L U-Ⅱ的作用最明显,A值和[³H]-TdR掺入量分别较对照组高42.9%和68.5%(P＜0.05) 。10^-10 mol/L U-Ⅱ对PASMCs增殖无作用。尼卡地平、W₇、H₇、PD₉₈₀₅₉在一定浓度范围内(10^-7 mol/L-10^-5 mol/L)均可以浓度依赖地抑制U-Ⅱ诱导的PASMCs的A值增加及[³H]-TdR掺入增加。在浓度为10^-5 mol/L时,其抑制作用最明显,A值的抑制率分别为42.3%、19.6%、23.2%和10.5%(P＜0.05), -TdR掺入量的抑制率分别为46.6%、9.8%、21.7%和14.7%(P＜0.05 )。 结论: U-Ⅱ具有较强的促PASMCs增殖的作用,其诱导PASMCs增殖是通过Ca²⁺、CaM、PKC、MAPK来介导的。     

联合利用嵌套缺失和酚筛选法构建和鉴定目的基因的缺失突变体

目的 介绍一种快捷、无突变的目的基因缺失体构建和鉴定方法.方法 用Mlu I 和 Sac I酶将GCLC/pGL3在GCLC基因与pGL3连接处切开,形成以GCLC端为3'凹端而pGL3载体端为3'凸端的线型载体.利用外切核酸酶Ⅲ从GCLC基因端(3'凹端)单向逐一切除GCLC基因上的核苷酸,并在不同的时间终止其反应以获得一系列的GCLC基因缺失体.将GCLC基因缺失体与pGL3载体自身环化构建成GCLC基因序列缺失体的pGL3报道载体.最后用酚抽提和凝胶电泳法粗略挑选出不同长度的GCLC/pGL3缺失突变体.结果 利用嵌套缺失法构建出各种长度的GCLC基因的缺失突变体,且不存在基因突变的现象.利用酚筛选法快速鉴定出29种不同长度的缺失突变体.结论 联合利用嵌套缺失和酚筛选法可以高保真而快速地构建和鉴定目的基因的缺失突变体.     

CD3+木瓜提取物对ApoE基因缺陷小鼠血脂及炎性相关因素的影响

目的观察木瓜提取物对ApoE基因缺陷小鼠血脂水平、主动脉窦斑块中巨噬细胞活化及肿瘤坏死因子(TNF-α)水平的影响。方法30只雄性ApoE基因缺陷小鼠随机分为3组:对照组、低剂量组和高剂量组,低剂量组和高剂量组分别在基础饲料上添加5%和10%的木瓜提取物喷雾干燥颗粒,饲养16周后经小鼠眼眶静脉取血后处死动物,酶法测定血脂水平、采用免疫组化分析主动脉窦斑块中TNF-α的表达水平和采用免疫荧光反映斑块CD68阳性表达水平与巨噬细胞阳性表达率。结果低剂量组和高剂量组的血清TC和LDL-C显著低于对照组(P<0.05),木瓜提取物能显著下调斑块中TNF-α的表达水平以及减少巨噬细胞的阳性率。结论木瓜提取物降低了血清脂蛋白胆固醇水平(TC和LDL-C),减少了炎性因子TNF-α表达以及减弱巨噬细胞参与程度,预示其可能具有减缓动脉斑块发生发展的抗动脉粥样硬化作用。     

建立一种用重组蛋白检测抗口蹄疫病毒抗体的间接ELISA方法

目的研究以重组蛋白作为包被抗原检测口蹄疫病毒（FMDV）感染后的动物血清中特异性抗体的可能性,为建立一种非病毒颗粒的ELISA检测试剂盒提供实验依据。方法利用自行构建表达的O型口蹄疫病毒VP1表位肽重组蛋白（VP1epi）作为包被抗原,采用间接ELISA方法确定抗原的最佳工作浓度和包被方法,优化各项实验条件,并以FMDV感染后的豚鼠血清作为标准阳性血清确定ELISA方法的特异性和灵敏度。结果FMDV感染后的阳性豚鼠血清可以很好地识别VP1epi重组蛋白,用此蛋白包被检测抗FMDV抗体的灵敏度可达1∶3200,并证明所检测的抗体是FMDV特异性的。结论VP1epi重组蛋白可以替代FMDV颗粒用于建立检测抗FMDV抗体的ELISA试剂盒。     

紫外线照射对腺病毒气溶胶活力和粒级分布的影响

目的 研究紫外线照射对腺病毒气溶胶活力和粒级分布的影响.方法 在2000L的腔室中通过TK-3微生物气溶胶发生器将绿色荧光蛋白(GFP)标记的腺病毒形成气溶胶,暴露在预先设定波长的紫外线下,用多级撞击式空气微生物采样器进行采样.对采样样品进行实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测基因组拷贝数.通过在荧光显微镜下计数带绿色荧光的PK15细胞数可直观检测病毒的感染力及活力.结果 带有绿色荧光的PK15细胞数及FQ-PCR检测结果均提示所采集的病毒气溶胶主要分布在第6级.波长为254 nm的紫外线照射5 min时,在显微镜下观察到的荧光数明显减少.波长为254 nm紫外线照射30 min时,6个级别的细胞内均未见绿色荧光.波为365 nm紫外线照射30 min时,绿色荧光数仍较多.波长为254 nm的紫外线照射30 min时没有观察到有绿色荧光的细胞,但是FQ-PCR结果提示病毒基因组拷贝数仍较高.结论 波长为254 nm的紫外线比365 nm的紫外线照射灭活腺病毒气溶胶的效果更显著.两种波长的紫外线照射对腺病毒气溶胶的粒级分布没有显著影响.病毒基因组的存在并不能代表病毒有感染力.